Amphiregulin versus Nicht-Amphiregulin-Ergänzung zum Reifungskulturmedium in IVM.
Wirkung des CAPA-Kulturschritts auf die meiotische und Entwicklungskompetenz menschlicher Oozyten nach Verwendung von zwei (zuvor verwendeten) meiotischen Reifungstriggern in einem Studiendesign für GESCHWISTER-Oozyten
Der klinische Einsatz von IVM wurde in den 90er Jahren entwickelt, ist aber aus mehreren Gründen noch nicht zu einer realistischen Option für die breite Praxis geworden. Trotz jüngster Fortschritte bei der Verbesserung der Implantations- und Schwangerschaftsraten unter Verwendung von in-vitro gereiften Eizellen bleiben die Ergebnisse von IVM grundsätzlich niedriger als bei Behandlungszyklen unter Verwendung herkömmlicher ART. Um das Ergebnis von IVM-Zyklen zu verbessern, konzentriert sich diese Studie auf die Verbesserung der In-vitro-Kulturbedingungen.
Die In-vitro-Maturation (IVM) menschlicher Eizellen, die aus minimal stimulierten oder nicht stimulierten Eierstöcken gewonnen werden, bietet eine "patientenfreundlichere" Behandlungsoption als die herkömmliche Behandlung der assistierten Reproduktionstechnologie (ART) mit kontrollierter ovarieller Hyperstimulation (COH). Typischerweise wird IVM Frauen mit polyzystischen Ovarien (PCO/PCOS) oder Patientinnen mit einer ausgezeichneten ovariellen Reserve, d. h. einer hohen Antrumfollikelzahl, angeboten. Die IVM-Behandlung ist durch eine minimale Verabreichung von FSH oder hMG und NO hCG-Trigger gekennzeichnet. Der IVM-Ansatz stört das tägliche Leben der Patienten weniger, da weniger Hormon- und Ultraschallüberwachung erforderlich ist, vermeidet eine Reihe kleinerer und größerer Komplikationen wie das ovarielle Hyperstimulationssyndrom und zielt darauf ab, die Gesamtkosten der Unfruchtbarkeitsbehandlung für den Patienten zu senken und für das Gesundheitsbudget.
Menschliche Eizellen, die aus kleinen Antrumfollikeln gewonnen werden, können die Meiose wieder aufnehmen, indem sie den Abbau der Keimbläschen und die Extrusion des ersten Polkörpers durchlaufen, wenn die Eizellen die meiotische Kompetenz erreicht haben. Diese Eizellen können befruchtet werden, obwohl sich nur ein Teil (weniger als 50%) von ihnen zu lebensfähigen Embryonen weiterentwickeln kann. Es wurde die Hypothese aufgestellt, dass ein Versagen der embryonalen Entwicklung zumindest teilweise auf ein unreifes Oozytenzytoplasma zurückzuführen sein könnte. Ein neuartiges menschliches In-vitro-Reifungskultursystem (IVM) (genannt CAPACITATION-IVM wird untersucht, im Folgenden "CAPA" genannt) unter Verwendung von 1°) natürlichen Verbindungen, von denen bekannt ist, dass sie die cAMP-Spiegel innerhalb des Kumulus-Oozyten-Komplexes beeinflussen, und 2°) Verbindungen, die sind entscheidend für das Oozyten-Cumulus-Crosstalk. Das Hochhalten von zyklischem AMP nach dem Abrufen in der GV-Oozyte verhindert das Auftreten einer Kernreifung und ermöglicht eine verstärkte Kommunikation zwischen der Oozyte und den Kumuluszellen. Dies ermöglicht die Verbesserung der Synchronisation von Kern- und zytoplasmatischen Reifungsprozessen in der Eizelle zugunsten der Embryoqualität.
Studienübersicht
Status
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
In dieser Studie können zwei Arten von Patienten unterschieden werden:
- Polyzystische Ovarialmorphologie + normale Zykluslänge (bis zu 35 Tage). Die Mehrheit der Probanden in dieser Gruppe hat nicht-syndromale polyzystische Ovarien und kein PCOS. Bei diesen Patienten ist AMH nur mäßig erhöht und die zyklische Follikelentwicklung findet unter dem Einfluss von FSH statt.
- PCOS – Morphologie der polyzystischen Eierstöcke + Oligomenorrhoe (Menstruationsperioden treten in Abständen von mehr als 35 Tagen auf, mit nur vier bis neun Perioden pro Jahr) oder Amenorrhoe. Bei diesen Patienten mit oft stark erhöhten AMH-Spiegeln und begleitender Hyperandrogenämie führt eine relative FSH-Resistenz zu einem Stillstand des Follikelwachstums im Zustand der kleinen antralen Follikel. Eine spontane Selektion eines dominanten Follikels findet nicht oder selten statt. Ein großer Teil der Follikel ist atretisch. Ein großer Teil dieser Patienten hat einen BMI von über 25. Diese Patienten erhalten im Allgemeinen das gleiche standardmäßige Gonadotropin-Stimulationsschema wie die Patienten der vorherigen Gruppe, aber wenn die größten Follikel am dritten Tag der Stimulation einen Durchmesser von weniger als 8 mm haben, erhalten die Patienten einen oder zwei zusätzliche Tage der Gonadotropin-Stimulation. Darüber hinaus nehmen diese Patienten im Allgemeinen zwei bis drei Wochen OCP vor Beginn des IVM-Zyklus ein und beginnen mit der Stimulation ungefähr am fünften Tag nach dem Absetzen des OCP. Da diese Patienten jedoch keine endogene FSH-gesteuerte Rekrutierung von Follikeln haben, ist der Beginn der Stimulation ziemlich flexibel.
- Die Einnahme von OCP (orale Kontrazeptiva) vor dem IVM-Zyklus ist obligatorisch. OCP (z. B. Microgynon 30 Mikrogramm) wird täglich verabreicht, um die atretischen Follikel in den Eierstöcken zu reinigen. OCP wird zwischen 14 und 21 Tagen verabreicht (diese Methode ermöglicht eine bessere Programmierung der Zyklen und der Arbeitsbelastung im Embryologielabor).
Vor dem ersten IVM-Zyklus (Screening-Besuch): Alle Probanden werden einer Ultraschalluntersuchung des Beckens unterzogen, um die Eignung für eine IVM-Behandlung zu beurteilen. Die Patienten werden einem Bluttest zur Serologie (Hepatitis B, HIV, Syphilis) und zur Erstellung eines Ausgangshormonprofils (LH, FSH, E2, Progesteron, AMH, SHBG, Testosteron) unterzogen. Zusätzliche Analyse von TSH, Thyroperoxidase-Antikörpern, Prolaktin. Alle begleitenden Medikamente, die in den letzten 3 Monaten vor dem IVM-Versuch eingenommen wurden, sollten mitgeteilt werden.
Erster IVM-Behandlungszyklus:
Erster Klinikbesuch:
- Alle Probanden wenden sich am Zyklustag (cd1) an die Study Nurse, um den ersten Kapazitationskulturzyklus einzuleiten. Wenn cd1 am Wochenende ist, kontaktieren die Probanden die Study Nurse am Montag. Das Subjekt wird die Klinik am 1., 2. oder 3. Tag der Menstruationsblutung aufsuchen. Zum Ausschluss von Ovarialzysten wird eine Ultraschalluntersuchung durchgeführt und eine Blutprobe zur Hormonbestimmung (HCG, FSH, LH, E2, Progesteron) entnommen. Am Abend des 3. Zyklustages des ersten Klinikbesuchs wird mit der flexiblen Gonadotropin-Stimulation begonnen, um die Follikelentwicklung zu fördern. Die erste Dosis von HP-hMG 150 IE um 14:00 Uhr. Zweite Dosis HP-hMG 150 IE am nächsten Tag um 14:00 Uhr. Das Subjekt wird nach den zwei Tagen der HP-hMG 150 IE-Stimulation (d. h. am Morgen des 6. Tages) für eine Ultraschalluntersuchung des Beckens und einen Bluttest (FSH, LH, E2, Progesteron) zurückkehren.
- An Patienten mit OCP-Blutungen: Am ersten, zweiten, dritten oder vierten Tag der Abbruchblutung, die nach dem Absetzen der OCP auftritt, wird der Proband die Klinik aufsuchen, um sich einer Ultraschalluntersuchung des Beckens zu unterziehen, und es wird eine Blutprobe zur Hormonbestimmung entnommen (FSH , LH, E2, Progesteron, AMH, Gesamtserumtestosteron, SHBG). Am Tag des ersten Klinikbesuchs wird mit einer flexiblen HP-hMG-Stimulation begonnen, um die Follikelentwicklung mit einer ersten täglichen HP-hMG-Dosis um 20:00 Uhr zu fördern. Das Subjekt wird nach zwei Tagen HP-hMG-Stimulation für eine Ultraschalluntersuchung des Beckens und einen Bluttest (FSH, LH, E2, Progesteron) zurückkehren.
Zweiter Klinikbesuch an Tag 6 (nach 2 Tagen HP-hMG-Behandlung):
- Wenn die Ultraschalluntersuchung das Vorhandensein eines einzelnen dominanten Follikels zeigt, der größer als 12 mm ist, wobei die anderen Follikel alle kleiner als 10 mm sind, wird die Eizellenentnahme (OR) zwei Tage später zwischen 8:00 und 9:00 Uhr angesetzt. Es ist wichtig, die OR 42 - 46 Stunden nach der letzten HP-hMG-Injektion als festen Zeitpunkt beizubehalten. Wenn die Ultraschalluntersuchung einen maximalen Follikeldurchmesser von weniger als 8 mm zeigt, wird eine letzte HP-hMG-Injektion um 14:00 Uhr verabreicht. und die Eizellentnahme (OR) wird zwei Tage später zwischen 8:00 und 9:00 Uhr angesetzt. Es ist wichtig, die OR 42 - 46 Stunden nach der letzten HP-hMG-Injektion als festen Zeitpunkt beizubehalten.
- An Patienten mit OCP-Blutungen: Zeigt die Ultraschalluntersuchung einen maximalen Follikeldurchmesser von ca. 9 mm, eine letzte Injektion von HP-hMG wird um 14:00 Uhr verabreicht. und die Eizellentnahme (OR) wird zwei Tage später zwischen 8:00 und 9:00 Uhr angesetzt (unter Vollnarkose - der genaue OP-Zeitpunkt sollte mit dem OP-Schwestern und dem Anästhesisten besprochen werden). Es ist wichtig, die OR-Zeit konstant bei 42–46 Stunden nach der letzten HP-hMG-Injektion zu halten.
Dritter Besuch – Eizellentnahme: Die Eizellentnahme (OR) wird zwischen 8:00 und 10:00 Uhr (unter Vollnarkose) geplant. Am OP-Tag:
- Eine Ultraschalluntersuchung beider Eierstöcke und der Gebärmutterschleimhaut wird aufgezeichnet.
- Eine Blutprobe wird für ein Hormonprofil (LH, FSH, E2, Progesteron) entnommen.
- Alle der Patientin entnommenen Kumulus-Oozyten-Komplexe (COC) werden 24 Stunden in CAPA-Medium kultiviert.
Nach der CAPA-Kultur wird die Hälfte der Oozyten nach dem Zufallsprinzip (50/50) auf die beiden Reifungsauslöser-Medium verteilt.
- Gruppe 1: Medicult IVM-Medium + AREG+FSH+HSA+Insulin+Estradiol (AREG-TRIGGER-Gruppe)
- Gruppe 2: Medicult IVM-Medium + FSH+GH+hCG+HSA (KONTROLLE-TRIGGER-Gruppe) ohne hinzugefügtes AREG
In-vitro-Oozytenreifung:
- Bewerten und registrieren Sie COCs für die Kumulusmasse (CM) und den Kumuluskontakt zwischen Eizelle und Kumuluszellen. Machen Sie jedes Mal Fotos. Entsorgen Sie vollständig denudierte, degenerierte Eizellen.
- Übertragen Sie die Hälfte der COCs (jeweils 5-10) aus der Capacitation-Kulturschale mit einer Eppendorf-Mikropipette in die "Waschschale" mit "Reifungsmedium 1 (AREG-TRIGGER-Medium)" und waschen Sie sie gründlich (beladen Sie die Pipettenspitzen mit 5µl, max. 10 ul). Übertragen Sie dann COCs auf die "IVM-Schale" mit "Reifungsmedium 1 (AREG-TRIGGER-Medium)".
- Übertragen Sie die zweite Hälfte der COCs aus der Capacitation-Kulturschale in die "Waschschale" mit "Reifungsmedium 2 (CONTROL-TRIGGER-Medium)" und waschen Sie sie gründlich (Pipettenspitzen mit 5 µl, max. 10 ul). Übertragen Sie dann COCs auf die "IVM-Schale" mit "Maturation Medium 2 (CONTROL-TRIGGER-Medium)".
- Halten Sie COCs in Pools von ~10.
- Beschriften Sie die Schale entsprechend und kultivieren Sie die COCs 30-32 Stunden in einem Inkubator.
- Die Bewertung der Reifung (MII, GVBD, GV) erfolgt nach 30 Stunden. Oozyten, die einer GVBD unterzogen wurden, aber keinen klaren PB aufweisen, werden nach 32 Stunden bewertet. Die Befruchtung erfolgt durch intrazytoplasmatische Spermieninjektion (3-4 Stunden nach der Oozytenentnahme oder Reifungsprüfung); nur reife Eizellen werden besamt.
- Die Befruchtungskontrolle wird 16-18 Stunden nach der Besamung unter einem inversen Mikroskop durchgeführt. Die Embryobewertung wird 68 ± 1 Stunden nach der Befruchtung gemäß dem Istanbuler Konsens durchgeführt. Verwendetes Standard-Embryo-Vitrifikationsprotokoll. Embryonen werden gemäß dem erhaltenen Stimulationsprotokoll vitrifiziert (Gruppe 1 AREG-TRIGGER oder Gruppe 2 - CONTROL-TRIGGER).
- Transfer von gefrorenen Embryonen: Der Patient wird randomisiert, um den Embryo zufällig von AREG-TRIGGER oder CONTROL-TRIGGER zu erhalten. Wo keine Embryonen aus der randomisierten Gruppe verfügbar waren, wurden Embryonen aus der anderen Gruppe übertragen.
- Der erste Schwangerschaftstest wurde 14 Tage nach dem Embryotransfer durchgeführt; ein positiver Schwangerschaftstest wurde als Serum-beta-hCG > 5 mIU/ml definiert
- Eine klinische Schwangerschaft wurde als mindestens eine Fruchtblase im Ultraschall in der 7. Schwangerschaftswoche mit Nachweis von Herzschlagaktivität definiert.
- Eine anhaltende Schwangerschaft wurde als Schwangerschaft mit einer nachweisbaren Herzfrequenz in der 12. Schwangerschaftswoche nach Abschluss des ersten Transfers definiert.
- Als Lebendgeburt wurde die Geburt mindestens eines Neugeborenen nach der 24. Schwangerschaftswoche mit jeglichem Lebenszeichen definiert (Zwillinge wurden als Einzelzahl gezählt).
- Nach einem ersten erfolglosen IVM-Zyklus: Die klinischen und embryologischen Daten und Ergebnisse in Bezug auf den ersten IVM-Zyklus (kumulative Zyklen mit frischen und gefrorenen Embryonen) werden besprochen, um einen stärker auf den Patienten zugeschnittenen Ansatz für einen eventuellen zweiten IVM-Zyklus festzulegen. Der patientenindividuelle Ansatz im zweiten IVM-Zyklus könnte in einer Modifikation des Managements der Follikelphase bestehen.
Studientyp
Einschreibung (Tatsächlich)
Phase
- Unzutreffend
Kontakte und Standorte
Studienorte
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-
-
Ho Chi Minh City, Vietnam
- My Duc Hospital
-
-
Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Studienberechtigte Geschlechter
Beschreibung
Einschlusskriterien:
- Polyzystische Ovarialmorphologie: mindestens 24 Follikel in beiden Eierstöcken und/oder erhöhtes Eierstockvolumen (> 10 ml) (es reicht aus, wenn 1 Eierstock diese Kriterien erfüllt)
- Unterziehen von ≤ 2 vorherigen IVM- oder IVF-Versuchen
- Zustimmung zum Transfer von ≤ 2 Embryonen
Ausschlusskriterien:
- Hochgradige Endometriose
- Oozytenspende und genetische Diagnosezyklen vor der Implantation
- Fälle mit extrem schlechter Spermienqualität.
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
- Hauptzweck: BEHANDLUNG
- Zuteilung: NON_RANDOMIZED
- Interventionsmodell: PARALLEL
- Maskierung: KEINER
Waffen und Interventionen
Teilnehmergruppe / Arm |
Intervention / Behandlung |
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ACTIVE_COMPARATOR: AREG-TRIGGER
Pro Karton (6mL) 5940 µL „Basal Medium“
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Oozyten in AREG-TRIGGER-Medium werden in AREG + FSH + HSA + Insulin + Estradiol-Medium reif. Pro Karton (6mL) 5940 µL „Basal Medium“
Andere Namen:
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ACTIVE_COMPARATOR: STEUER-TRIGGER
Pro Karton (5 ml) 4,3 ml IVM Medicult Medium (Vial 2) 0,5 ml HSA (ab Lager 10%ige Lösung) 50 µl FSH (ab Lager 7,5 IE/ml) 5 µl hCG (ab Lager 100 IE/ml) 75 µl GH (ab Lager 10 % Lösung) Vorrat 0,66 mg/ml)
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Oozyten in CONTROL-TRIGGER-Medium werden in FSH + hCG + GH + HSA-Medium reif. Pro Karton (5 ml) 4,3 ml IVM Medicult Medium (Vial 2) 0,5 ml HSA (ab Lager 10%ige Lösung) 50 µl FSH (ab Lager 7,5 IE/ml) 5 µl hCG (ab Lager 100 IE/ml) 75 µl GH (ab Lager 10 % Lösung) Vorrat 0,66 mg/ml)
Andere Namen:
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Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
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Meiotische Reifungseffizienz
Zeitfenster: Zwei Tage nach der Eizellenentnahme
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Prozentsatz von PB, GVBD, GV durch die beiden Triggertypen.
Die PB- (oder MII-) Oozyte zeigt die erste PB im PVS.
GVBD-Oozyten haben weder ein sichtbares GV noch PBI.
Die GV-Oozyte weist einen intrazytoplasmatischen Kern auf, der als „Keimbläschen“ bezeichnet wird.
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Zwei Tage nach der Eizellenentnahme
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Anzahl übertragbarer Tag-3-Embryonen
Zeitfenster: Fünf Tage nach der Eizellenentnahme
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Anzahl der übertragbaren Tag-3-Embryonen, die von den beiden Meiose-Trigger-Typen erhalten wurden
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Fünf Tage nach der Eizellenentnahme
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
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Fortlaufende Schwangerschaftsrate
Zeitfenster: Mindestens 12 Wochen vom Beginn des letzten Menstruationszyklus (jeder Zyklus dauert 4 Wochen) bis zum Zeitpunkt der Entbindung
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Schwangerschaft mit nachweisbarer Herzfrequenz in der 12. Schwangerschaftswoche bis zum Zeitpunkt der Geburt
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Mindestens 12 Wochen vom Beginn des letzten Menstruationszyklus (jeder Zyklus dauert 4 Wochen) bis zum Zeitpunkt der Entbindung
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Lebendgeburtenrate
Zeitfenster: Mindestens 24. Schwangerschaftswoche bis zum Zeitpunkt der Geburt
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Als Lebendgeburt gilt die Geburt mindestens eines Neugeborenen nach der 24. Schwangerschaftswoche, das ein Lebenszeichen zeigt (bei Zwillingen wird nur eine gezählt).
Für den Zeitpunkt dieses Auftretens wird die anhaltende Schwangerschaft verwendet, d. h. die anhaltende Schwangerschaft nach 12 Wochen wird in Berechnungen verwendet, vorausgesetzt, dass diese anhaltende Schwangerschaft zu einer Lebendgeburt führt.
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Mindestens 24. Schwangerschaftswoche bis zum Zeitpunkt der Geburt
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Genetische und epigenetische Analyse von Nabelschnurblut von Neugeborenen (Wird in einer separaten Studie durchgeführt)
Zeitfenster: 1 Tag (vor Beginn der IVF/IVM) und 1 Tag (zum Zeitpunkt der Entbindung)
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Das Material des Neugeborenen (Nabelschnurblut) wird für genetische (Karyotypisierung) und epigenetische Analysen gesammelt.
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1 Tag (vor Beginn der IVF/IVM) und 1 Tag (zum Zeitpunkt der Entbindung)
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Genetische und epigenetische Analyse von Zellen aus Wangenabstrichen von Neugeborenen (Wird in einer separaten Studie durchgeführt)
Zeitfenster: 1 Tag (vor Beginn der IVF/IVM) und 1 Tag (zum Zeitpunkt der Entbindung)
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Das Material des Neugeborenen (Zellen aus Wangenabstrichen) wird für genetische (Karyotypisierung) und epigenetische Analysen gesammelt.
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1 Tag (vor Beginn der IVF/IVM) und 1 Tag (zum Zeitpunkt der Entbindung)
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Genetische und epigenetische Analyse der Plazenta von Neugeborenen (Wird in einer separaten Studie durchgeführt)
Zeitfenster: 1 Tag (vor Beginn der IVF/IVM) und 1 Tag (zum Zeitpunkt der Entbindung)
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Das Material des Neugeborenen (Plazenta) wird für genetische (Karyotypisierung) und epigenetische Analysen gesammelt.
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1 Tag (vor Beginn der IVF/IVM) und 1 Tag (zum Zeitpunkt der Entbindung)
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Mitarbeiter und Ermittler
Sponsor
Ermittler
- Hauptermittler: Tuong M Ho, MD,MCE, Hope Research Center
Publikationen und hilfreiche Links
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn (TATSÄCHLICH)
Primärer Abschluss (TATSÄCHLICH)
Studienabschluss (TATSÄCHLICH)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (TATSÄCHLICH)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (TATSÄCHLICH)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Andere Studien-ID-Nummern
- CS/BVMD/19/03
Plan für individuelle Teilnehmerdaten (IPD)
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Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
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