Amfiregulin versus ikke-amfiregulin-tilskudd til modningsdyrkingsmedium i IVM.

Det er to typer pasienter som kan skilles i denne studien:

• Polycystisk ovariemorfologi + normal sykluslengde (opptil 35 dager). Flertallet av forsøkspersonene i denne gruppen har ikke-syndromiske polycystiske eggstokker og har ikke PCOS. Hos disse pasientene er AMH bare moderat forhøyet og syklisk follikulær utvikling skjer under påvirkning av FSH.
• PCOS - Polycystisk ovariemorfologi + oligomenoré (menstruasjonsperioder som forekommer med intervaller på mer enn 35 dager, med bare fire til ni perioder i løpet av et år) eller amenoré. Hos disse pasientene, med ofte sterkt forhøyede AMH-nivåer og samtidig hyperandrogenemi, resulterer relativ FSH-resistens i stans av follikkelvekst ved den lille antrale follikkeltilstanden. Spontan seleksjon av en dominant follikkel forekommer ikke eller forekommer sjelden. En stor andel av folliklene er atretiske. En viktig andel av disse pasientene har en BMI høyere enn 25. Disse pasientene får generelt samme standard gonadotropinstimuleringsregime som pasientene i den forrige gruppen, men hvis de største folliklene har en diameter på mindre enn 8 mm på den tredje stimuleringsdagen, får pasientene én eller to tilleggsdager med gonadotropinstimulering. Dessuten tar disse pasientene vanligvis to-tre uker med OCP før starten av IVM-syklusen og starter stimulering omtrent på dag fem etter OCP-seponering. Men siden disse pasientene ikke har endogen FSH-drevet rekruttering av follikler, er starten på stimulering ganske fleksibel.
• Bruk av OCP (p-piller) før IVM-syklusen er obligatorisk. OCP (for eksempel Microgynon 30 mikrogram) vil bli administrert daglig for å fjerne atretiske follikler i eggstokken. OCP vil bli gitt i mellom 14 og 21 dager (denne metoden gir bedre programmering av syklusene og arbeidsbelastningen i embryologilaboratoriet).

Før den første IVM-syklusen (Screening-besøk): Alle forsøkspersoner vil gjennomgå en bekken-ultralydskanning for å vurdere egnethet til å gjennomgå IVM-behandling. Pasienter vil gjennomgå en blodprøve for serologi (hepatitt B, HIV, syfilis) og baseline hormonprofilering (LH, FSH, E2, progesteron, AMH, SHBG, Testosteron). Ytterligere analyse av TSH, tyroperoksidase-antistoffer, prolaktin. Eventuell samtidig medisinering tatt i løpet av de siste 3 månedene før IVM-forsøket bør varsles.

Første IVM-behandlingssyklus:

• Første klinikkbesøk:

  • Alle forsøkspersoner vil kontakte studiesykepleier på syklusdagen (cd1) for å sette i gang den første Kapasitasjonskultursyklusen. Dersom cd1 er i helgen vil forsøkspersoner kontakte studiesykepleier på mandag. Pasienten vil oppsøke klinikken på dag 1, 2 eller 3 av menstruasjonsblødninger. En ultralydsskanning utføres for å utelukke eksistensen av ovariecyster og det tas en blodprøve for hormonvurdering (HCG, FSH, LH, E2, progesteron). På kvelden på syklusdag 3 av det første klinikkbesøket, vil fleksibel gonadotropinstimulering startes for å forbedre follikkelutviklingen. Den første dosen med HP-hMG 150 IE kl. 14.00. Andre dose neste dag med HP-hMG 150 IE kl. 14.00. Personen vil komme tilbake for en bekkenultralydskanning og en blodprøve (FSH, LH, E2, progesteron) etter de to dagene med HP-hMG 150 IE stimulering (dvs. om morgenen dag 6).
  • Til pasienter med OCP-blødning: På dag én, to, tre eller fire av abstinensblødningen som oppstår etter seponering av OCP-behandlingen, vil pasienten oppsøke klinikken for å gjennomgå en bekken-ultralydskanning og en blodprøve tas for hormonvurdering (FSH). , LH, E2, progesteron, AMH, totalt serum testosteron, SHBG). På dagen for det første klinikkbesøket vil fleksibel HP-hMG-stimulering startes for å øke follikkelutviklingen, ved en første daglige dose av HP-hMG kl. 20.00. Personen vil returnere for en bekken ultralydskanning og en blodprøve (FSH, LH, E2, progesteron) etter to dager med HP hMG-stimulering.

• Andre klinikkbesøk på dag 6 (etter 2 dager med HP-hMG-behandling):

  • Hvis ultralydskanningen viser tilstedeværelsen av en enkelt dominerende follikkel større enn 12 mm med de andre folliklene alle mindre enn 10 mm, og oocytthentingen (OR) planlegges to dager senere, mellom 8:00 og 9:00. Det er viktig å holde OR 42 - 46 timer etter siste HP-hMG-injeksjon som et fast tidspunkt. Hvis ultralydsskanningen viser en maksimal follikkeldiameter på mindre enn 8 mm, vil en siste injeksjon med HP-hMG bli administrert kl. 14.00. og oocytthenting (OR) vil bli planlagt to dager senere, mellom 8:00 og 9:00. Det er viktig å holde OR 42 - 46 timer etter siste HP-hMG-injeksjon som et fast tidspunkt.
  • Til pasienter med OCP-blødning: Hvis ultralydsskanningen viser en maksimal follikkeldiameter på ca. 9 mm, vil en siste injeksjon av HP-hMG bli administrert kl. 14.00. og uthenting av oocytter (OR) planlegges to dager senere, mellom 8:00 og 9:00 (under generell anestesi - nøyaktig tidspunkt for OR bør diskuteres med operasjonssykepleiere og anestesilege). Det er viktig å holde tiden for OR konstant på 42-46 timer etter siste HP-hMG-injeksjon.

• Tredje besøk - Oocytthenting: Oocytthenting (OR) vil bli planlagt mellom kl. 8:00 og 10:00 (under generell anestesi). På OR-dagen:

  • En ultralydsskanning av begge eggstokkene og av livmorslimhinnen registreres.
  • Det vil bli tatt en blodprøve for hormonprofilering (LH, FSH, E2, progesteron).
• Alle cumulus-oocyttkomplekser (COC) hentet fra pasienten dyrkes i CAPA-medium i 24 timer.

• Etter CAPA-kultur vil halvparten av oocyttene deles tilfeldig (50/50) til de to modningsutløsermediene.

  • Gruppe 1: Medicult IVM media + AREG+FSH+HSA+Insulin+estradiol (AREG-TRIGGER gruppe)
  • Gruppe 2: Medicult IVM media + FSH+GH+hCG+HSA (CONTROL-TRIGGER-gruppe) uten AREG tilsatt

• In vitro oocyttmodning:

  • Evaluere og registrere COCs for cumulus masse (CM) og cumulus kontakt mellom oocytt og cumulus celler. Ta bilder hver gang. Kast fullstendig blottede, degenererte oocytter.
  • Overfør halvparten av p-pillene (5-10 om gangen) fra Capacitation-kulturskålen til "oppvaskskålen" som inneholder "Modningsmedium 1 (AREG-TRIGGER-medium)" ved å bruke en Eppendorf-mikropipette og vask dem grundig (fyll pipettespissene med 5 µl, maks. 10 ul). Overfør deretter COCs til "IVM-skålen" med "Modningsmedium 1 (AREG-TRIGGER medium)".
  • Overfør den andre halvdelen av COCene fra Capacitation-kulturskålen til "oppvaskskålen" som inneholder "Modningsmedium 2 (CONTROL-TRIGGER medium)" og vask dem grundig (fyll pipettespisser med 5 µl, maks. 10 ul). Overfør deretter COCs til "IVM-skålen" med "Modningsmedium 2 (CONTROL-TRIGGER medium)".
  • Oppbevar p-piller i bassenger på ~10.
  • Merk retten på riktig måte og dyrk COCs 30-32 timer i en inkubator.
• Evaluering av modning (MII, GVBD, GV) vil bli gjort etter 30 timer. Oocytter som har gjennomgått GVBD, men uten tydelig PB, vil bli vurdert etter 32 timer. Inseminasjon vil bli utført ved bruk av intra-cytoplasmatisk spermieinjeksjon (3-4 timer etter oocytthenting eller modningskontroll); kun modne oocytter vil bli inseminert.
• Befruktningskontroll vil bli utført under omvendt mikroskop 16-18 timer etter inseminering. Embryoevaluering vil bli utført 68 ±1 time etter befruktning ved å bruke Istanbul-konsensus. Standard embryovitrifikasjonsprotokoll brukt. Embryoer vil bli forglasset i henhold til oppnådd stimuleringsprotokoll (gruppe 1 AREG-TRIGGER eller gruppe 2 - KONTROLL-TRIGGER).
• Frossen embryooverføring: Pasienten vil bli randomisert til å motta embryo tilfeldig fra AREG-TRIGGER eller CONTROL-TRIGGER. Der ingen embryo(er) fra den randomiserte gruppen var tilgjengelig, ble embryo(er) fra den andre gruppen overført.
• Den første graviditetstesten ble utført 14 dager etter embryooverføring; en positiv graviditetstest ble definert som serum beta hCG >5 mIU/ml
• Klinisk graviditet ble definert som minst én svangerskapssekk på ultralyd ved 7 ukers svangerskap med påvisning av hjerteslagaktivitet.
• Pågående graviditet ble definert som graviditet med påvisbar hjertefrekvens ved ≥12 ukers svangerskap etter fullført første overføring.
• Levende fødsel ble definert som fødsel av minst en nyfødt etter 24 ukers svangerskap som viste ethvert tegn på liv (tvillinger var en enkelt telling).
• Etter en første mislykket IVM-syklus: De kliniske og embryologiske dataene og resultatene knyttet til den første IVM-syklusen (kumulative ferske og frosne embryosykluser) vil bli diskutert, for å etablere en mer pasienttilpasset tilnærming for en eventuell andre IVM-syklus. Den pasienttilpassede tilnærmingen i den andre IVM-syklusen kan bestå av modifikasjon av håndteringen av follikkelfasen.