IVM における成熟培養培地へのアンフィレグリンと非アンフィレグリンの補足。

この研究では、次の 2 種類の患者を区別できます。

• 多嚢胞性卵巣の形態 + 通常の周期の長さ (最大 35 日)。 このグループの被験者の大部分は、非症候性の多嚢胞性卵巣を持ち、PCOS を持っていません。 これらの患者では、AMH は中程度に上昇するだけで、FSH の影響下で周期的な卵胞発育が起こります。
• PCOS - 多嚢胞性卵巣の形態 + 乏月経 (月経周期が 35 日以上の間隔で発生し、1 年に 4 ～ 9 回の月経のみ) または無月経。 これらの患者では、AMH レベルが大幅に上昇し、高アンドロゲン血症を伴うことが多く、相対的な FSH 抵抗性により、小さな胞状卵胞状態で卵胞の成長が停止します。 支配的な卵胞の自発的な選択は起こらないか、めったに起こりません。 卵胞の大部分は閉鎖性です。 これらの患者の重要な割合は、BMI が 25 を超えています。 これらの患者は一般に、前のグループの患者と同じ標準的なゴナドトロピン刺激療法を受けますが、刺激の 3 日目に最大の卵胞の直径が 8 mm 未満の場合、患者はゴナドトロピン刺激を 1 日または 2 日追加で受けます。 さらに、これらの患者は通常、IVM サイクルの開始前に 2 ～ 3 週間の OCP を服用し、OCP 離脱後約 5 日目に刺激を開始します。 ただし、これらの患者は内因性の FSH による卵胞動員を行わないため、刺激の開始はかなり柔軟です。
• IVM サイクルの前に OCP (経口避妊薬) を使用することが義務付けられています。 OCP (たとえば、Microgynon 30 マイクログラム) を毎日投与して​​、卵巣の閉鎖卵胞を除去します。 OCP は 14 ～ 21 日間与えられます (この方法により、発生学ラボでのサイクルとワークロードをより適切にプログラミングできます)。

最初のIVMサイクルの前（スクリーニング訪問）：すべての被験者は骨盤超音波スキャンを受け、IVM治療を受ける適合性を評価します。 患者は、血清学（B型肝炎、HIV、梅毒）およびベースラインのホルモンプロファイリング（LH、FSH、E2、プロゲステロン、AMH、SHBG、テストステロン）の血液検査を受けます。 TSH、チロペルオキシダーゼ抗体、プロラクチンの追加分析。 IVM 試行前の過去 3 か月間に服用した併用薬はすべて通知する必要があります。

最初の IVM 治療サイクル:

• 最初のクリニック訪問:

  • すべての被験者は、サイクル日（cd1）に研究看護師に連絡して、最初の容量培養サイクルを開始します。 cd1 が週末の場合、被験者は月曜日に研究看護師に連絡します。 被験者は、月経出血の1日目、2日目、または3日目にクリニックに通います。 卵巣嚢胞の存在を除外するために超音波スキャンが実行され、ホルモン評価 (HCG、FSH、LH、E2、プロゲステロン) のために血液サンプルが採取されます。 最初のクリニック訪問のサイクル 3 日目の夜に、柔軟なゴナドトロピン刺激が卵胞の発育を促進するために開始されます。 HP-hMG 150 IU の初回投与は午後 2 時。 翌日の午後 2 時に HP-hMG 150 IU の 2 回目の投与。 被験者は、2日間のHP-hMG 150 IU刺激の後（つまり、6日目の朝）、骨盤超音波スキャンと血液検査（FSH、LH、E2、プロゲステロン）のために戻ります。
  • OCP 出血のある患者へ: OCP の中止後に発生する消退出血の 1、2、3、または 4 日目に、被験者は診療所に通い、骨盤の超音波スキャンを受け、ホルモン評価 (FSH) のために血液サンプルが採取されます。 、LH、E2、プロゲステロン、AMH、総血清テストステロン、SHBG)。 最初のクリニック訪問の日に、柔軟な HP-hMG 刺激を開始して、卵胞の発育を促進します。HP-hMG の最初の 1 日用量は午後 8 時です。 被験者は、2日間のHP hMG刺激の後、骨盤超音波スキャンと血液検査（FSH、LH、E2、プロゲステロン）のために戻ります。

• 6 日目の 2 回目の来院 (HP-hMG 治療の 2 日後):

  • 超音波スキャンで 12 mm を超える単一の主要な卵胞が存在し、他の卵胞はすべて 10 mm 未満であることが示された場合、採卵 (OR) は 2 日後の 8:00 から 9:00 h の間にスケジュールされます。 一定のタイミングとして、最後の HP-hMG 注射から 42 ～ 46 時間後に OR を維持することが重要です。 超音波スキャンで卵胞の最大直径が 8 mm 未満であることが示された場合、午後 2 時に HP-hMG の最終注射を行います。卵母細胞検索 (OR) は、2 日後の 8:00 から 9:00 h の間にスケジュールされます。 一定のタイミングとして、最後の HP-hMG 注射から 42 ～ 46 時間後に OR を維持することが重要です。
  • OCP 出血のある患者へ: 超音波スキャンで卵胞の最大直径が約 9 mm、HP-hMG の最終注射は午後 2 時に投与されます。卵母細胞回収 (OR) は、2 日後の 8:00 と 9:00 時間の間にスケジュールされます (全身麻酔下 - OR の正確な時間は、手術看護師および麻酔科医と話し合う必要があります)。 最後の HP-hMG 注射後 42 ～ 46 時間で、OR の時間を一定に保つことが重要です。

• 3 回目の来院 - 採卵: 採卵 (OR) は 8:00 から 10:00 の間に予定されます (全身麻酔下)。 OR当日：

  • 両方の卵巣と子宮内膜の超音波スキャンが記録されます。
  • ホルモンプロファイリング（LH、FSH、E2、プロゲステロン）のために血液サンプルが採取されます。
• 患者から回収されたすべての卵丘-卵母細胞複合体 (COC) は、CAPA 培地で 24 時間培養されます。

• CAPA 培養に続いて、卵母細胞の半分を 2 つの成熟トリガー培地にランダムに (50/50) 分割します。

  • グループ 1: Medicult IVM メディア + AREG+FSH+HSA+インスリン+エストラジオール (AREG-TRIGGER グループ)
  • グループ 2: Medicult IVM 培地 + FSH+GH+hCG+HSA (CONTROL-TRIGGER グループ)、AREG を追加しない

• インビトロ卵母細胞成熟:

  • 卵母細胞と卵丘細胞間の卵丘質量 (CM) と卵丘接触の COC を評価して登録します。 毎回写真撮影。 完全に露出し、変性した卵母細胞を廃棄します。
  • エッペンドルフマイクロピペットを使用して、キャパシテーション培養皿から「成熟培地1（AREG-TRIGGER培地）」を含む「洗浄皿」にCOCの半分（一度に5〜10個）を移し、完全に洗浄します（ピペットチップに最大5μl 10μl）。 その後、COC を「成熟培地 1 (AREG-TRIGGER 培地)」で「IVM ディッシュ」に移します。
  • COC の後半部分を Capacitation 培養皿から「成熟培地 2 (CONTROL-TRIGGER 培地)」を含む「洗浄皿」に移し、完全に洗浄します (ピペット チップに 5 μl をロードします。 10μl）。 その後、COC を「成熟培地 2 (CONTROL-TRIGGER 培地)」で「IVM ディッシュ」に移します。
  • 〜 10 のプールで COC を保持します。
  • 皿に適切にラベルを付け、COC をインキュベーターで 30 ～ 32 時間培養します。
• 成熟度の評価 (MII、GVBD、GV) は 30 時間で行われます。 ＧＶＢＤを受けたが明確なＰＢがない卵母細胞は、３２時間で評価される。 授精は、細胞質内精子注入を使用して実行されます（卵母細胞回収または成熟チェックの3〜4時間後）。成熟した卵母細胞のみが授精されます。
• 授精後16～18時間で倒立顕微鏡下で受精確認を行います。 イスタンブールコンセンサスを使用して、受精後68±1時間で胚評価を行う。 標準胚ガラス化プロトコルを使用。 胚は、得られた刺激プロトコルごとにガラス化されます (グループ 1 AREG-TRIGGER またはグループ 2 - CONTROL-TRIGGER)。
• 凍結胚移植: 患者は、AREG-TRIGGER または CONTROL-TRIGGER から無作為に胚を受け取るように無作為化されます。 無作為化されたグループからの胚が利用できなかった場合、他のグループからの胚が移植されました。
• 最初の妊娠検査は、胚移植の 14 日後に実施されました。陽性の妊娠検査は、血清ベータ hCG > 5 mIU/mL と定義されました。
• 臨床的妊娠は、心拍活動の検出を伴う妊娠 7 週での超音波検査で少なくとも 1 つの胎嚢として定義されました。
• 継続中の妊娠は、最初の移植の完了後、妊娠 12 週以上で心拍数が検出可能な妊娠と定義されました。
• 生児出生は、妊娠 24 週以降に生命の徴候を示す新生児が少なくとも 1 人出生した場合と定義されました (双子は 1 カウント)。
• 最初の失敗した IVM サイクルの後: 最終的な 2 番目の IVM サイクルのためのより患者に合わせたアプローチを確立するために、最初の IVM サイクル (累積新鮮および凍結胚サイクル) に関連する臨床的および発生学的データと結果について説明します。 2 番目の IVM サイクルにおける患者に合わせたアプローチは、卵胞期の管理の変更で構成される場合があります。