Amphiregulin versus niet-amphiregulin-suppletie voor rijpingskweekmedium in IVM.

In dit onderzoek zijn twee typen patiënten te onderscheiden:

• Polycysteuze ovariummorfologie + normale cyclusduur (tot 35 dagen). De meerderheid van de proefpersonen in deze groep heeft niet-syndromale polycysteuze eierstokken en heeft geen PCOS. Bij deze patiënten is AMH slechts matig verhoogd en vindt cyclische folliculaire ontwikkeling plaats onder invloed van FSH.
• PCOS - Polycysteuze ovariummorfologie + oligomenorroe (menstruatieperioden die optreden met tussenpozen van meer dan 35 dagen, met slechts vier tot negen menstruaties per jaar) of amenorroe. Bij deze patiënten, met vaak sterk verhoogde AMH-spiegels en gelijktijdige hyperandrogenemie, resulteert relatieve FSH-resistentie in het stoppen van de folliculaire groei bij de kleine antrale folliculaire toestand. Spontane selectie van een dominante follikel komt niet of zelden voor. Een groot deel van de follikels is atretisch. Een belangrijk deel van deze patiënten heeft een BMI hoger dan 25. Deze patiënten krijgen over het algemeen hetzelfde standaardregime met gonadotrofinestimulatie als de patiënten van de vorige groep, maar als de grootste follikels op de derde dag van stimulatie een diameter hebben van minder dan 8 mm, krijgen patiënten één of twee extra dagen gonadotrofinestimulatie. Bovendien nemen deze patiënten over het algemeen twee tot drie weken OCP vóór de start van de IVM-cyclus en beginnen ze ongeveer op dag vijf na het stoppen met OCP met stimulatie. Aangezien deze patiënten echter geen endogene FSH-aangedreven rekrutering van follikels hebben, is de start van de stimulatie vrij flexibel.
• Het gebruik van OCP (orale anticonceptiepil) vóór de IVM-cyclus is verplicht. OCP (bijvoorbeeld Microgynon 30 microgram) wordt dagelijks toegediend om de atretische follikels in de eierstok te zuiveren. OCP wordt gedurende 14 tot 21 dagen gegeven (deze methode zorgt voor een betere programmering van de cycli en de werklast in het embryologielaboratorium).

Vóór de eerste IVM-cyclus (screeningsbezoek): Alle proefpersonen ondergaan een echografie van het bekken om te beoordelen of ze geschikt zijn voor een IVM-behandeling. Patiënten ondergaan een bloedtest voor serologie (hepatitis B, HIV, syfilis) en baseline hormonale profilering (LH, FSH, E2, progesteron, AMH, SHBG, testosteron). Aanvullende analyse van TSH, thyroperoxidase-antilichamen, prolactine. Alle gelijktijdige medicatie die in de laatste 3 maanden voorafgaand aan de IVM-poging is ingenomen, moet worden gemeld.

Eerste IVM-behandelcyclus:

• Eerste bezoek aan de kliniek:

  • Alle proefpersonen zullen op cyclusdag (cd1) contact opnemen met de onderzoeksverpleegkundige om de eerste capaciteitscultuurcyclus te starten. Als cd1 in het weekend is, nemen de proefpersonen op maandag contact op met de studieverpleegkundige. De proefpersoon zal de kliniek bezoeken op dag 1, 2 of 3 van de menstruele bloeding. Er wordt een echo gemaakt om cysten in de eierstokken uit te sluiten en er wordt bloed afgenomen voor hormonaal onderzoek (HCG, FSH, LH, E2, progesteron). Op de avond van cyclusdag 3 van het eerste bezoek aan de kliniek wordt gestart met flexibele Gonadotrofine-stimulatie om de follikelontwikkeling te stimuleren. De eerste dosis HP-hMG 150 IE om 14.00 uur. Tweede dosis volgende dag HP-hMG 150 IE om 14.00 uur. De proefpersoon komt terug voor een echografie van het bekken en een bloedtest (FSH, LH, E2, progesteron) na de twee dagen HP-hMG 150 IE-stimulatie (d.w.z. op de ochtend van dag 6).
  • Voor patiënten met OCP-bloeding: Op dag één, twee, drie of vier van de onttrekkingsbloeding die optreedt na het stoppen van de OCP, gaat de proefpersoon naar de kliniek om een ​​echografie van het bekken te ondergaan en wordt er een bloedmonster afgenomen voor hormonale beoordeling (FSH). , LH, E2, progesteron, AMH, totaal serum testosteron, SHBG). Op de dag van het eerste bezoek aan de kliniek wordt gestart met flexibele HP-hMG-stimulatie om de ontwikkeling van de follikels te bevorderen, met een eerste dagelijkse dosis HP-hMG om 20.00 uur. De proefpersoon komt terug voor een echografie van het bekken en een bloedtest (FSH, LH, E2, progesteron) na twee dagen HP hMG-stimulatie.

• Tweede bezoek aan de kliniek op dag 6 (na 2 dagen behandeling met HP-hMG):

  • Als op de echografie één dominante follikel groter dan 12 mm aanwezig is en de overige follikels allemaal kleiner dan 10 mm, wordt de eicelpunctie (OK) twee dagen later tussen 8.00 en 9.00 uur ingepland. Het is belangrijk om de OK 42 - 46 uur na de laatste HP-hMG-injectie als een vast tijdstip aan te houden. Als de echografie een maximale folliculaire diameter van minder dan 8 mm laat zien, wordt om 14.00 uur een laatste injectie met HP-hMG toegediend. en de eicelpunctie (OK) wordt twee dagen later ingepland, tussen 8.00 en 9.00 uur. Het is belangrijk om de OK 42 - 46 uur na de laatste HP-hMG-injectie als een vast tijdstip aan te houden.
  • Voor patiënten met OCP-bloeding: Als de echografie een maximale follikeldiameter van ca. 9 mm, zal om 14.00 uur een laatste injectie met HP-hMG worden toegediend. en de eicelpunctie (OK) wordt twee dagen later ingepland, tussen 8:00 en 9:00 uur (onder algehele narcose - het exacte tijdstip van de OK dient te worden overlegd met operatieverpleegkundigen en anesthesist). Het is belangrijk om de OK-tijd constant te houden op 42-46 uur na de laatste HP-hMG-injectie.

• Derde bezoek - Eicelpunctie: De eicelpunctie (OK) vindt plaats tussen 8.00 en 10.00 uur (onder algehele narcose). Op de dag van OR:

  • Er wordt een echografie van beide eierstokken en van de endometriumbekleding gemaakt.
  • Er wordt bloed afgenomen voor hormonale profilering (LH, FSH, E2, progesteron).
• Alle cumulus-oöcytcomplexen (COC) die bij de patiënt zijn verkregen, worden 24 uur in CAPA-medium gekweekt.

• Na CAPA-kweek wordt de helft van de oöcyten willekeurig (50/50) verdeeld over de twee rijpingstriggers.

  • Groep 1: Medicult IVM-media + AREG+FSH+HSA+Insuline+Estradiol (AREG-TRIGGER-groep)
  • Groep 2: Medicult IVM-media + FSH+GH+hCG+HSA (CONTROL-TRIGGER-groep) zonder toegevoegde AREG

• In vitro eicelrijping:

  • Evalueer en registreer COC's voor cumulusmassa (CM) en cumuluscontact tussen eicel en cumuluscellen. Maak elke keer foto's. Gooi volledig ontblote, gedegenereerde eicellen weg.
  • Breng de helft van de COC's (5-10 per keer) over van de capacitatiekweekschotel naar de "wasschotel" met "Rijpingsmedium 1 (AREG-TRIGGER medium)" met behulp van een Eppendorf-micropipet en was ze grondig (laad pipetpunten met 5 µl, max. 10 µl). Breng vervolgens COC's over naar de "IVM-schotel" met "Maturation Medium 1 (AREG-TRIGGER medium)".
  • Breng de tweede helft van de COC's van de Capacitatie-kweekschaal over naar de "wasschaal" met "Maturation Medium 2 (CONTROL-TRIGGER medium)" en was ze grondig (laad pipetpunten met 5 µl, max. 10 µl). Breng vervolgens COC's over naar de "IVM-schotel" met "Maturation Medium 2 (CONTROL-TRIGGER medium)".
  • Bewaar COC's in pools van ~10.
  • Label de schaal op de juiste manier en kweek COC's 30-32 uur in een incubator.
• Evaluatie van de rijping (MII, GVBD, GV) vindt plaats om 30 uur. Oöcyten die GVBD hebben ondergaan maar zonder duidelijke PB worden na 32 uur beoordeeld. Inseminatie zal worden uitgevoerd met behulp van intra-cytoplasmatische sperma-injectie (3-4 uur na het ophalen van de eicel of rijpingscontrole); alleen volwassen eicellen worden geïnsemineerd.
• Bevruchtingscontrole wordt uitgevoerd onder een omgekeerde microscoop 16-18 uur na inseminatie. Embryo-evaluatie zal worden uitgevoerd op 68 ± 1 uur na de bevruchting met behulp van de Istanbul-consensus. Standaard protocol voor embryovitrificatie gebruikt. Embryo's zullen worden gevitrificeerd volgens het verkregen stimulatieprotocol (groep 1 AREG-TRIGGER of groep 2 - CONTROL-TRIGGER).
• Terugplaatsing van ingevroren embryo's: de patiënt wordt gerandomiseerd om willekeurig embryo's te ontvangen van AREG-TRIGGER of CONTROL-TRIGGER. Waar geen embryo('s) uit de gerandomiseerde groep beschikbaar waren, werden embryo's uit de andere groep teruggeplaatst.
• De eerste zwangerschapstest werd 14 dagen na de embryotransfer uitgevoerd; een positieve zwangerschapstest werd gedefinieerd als serum beta hCG >5 mIE/ml
• Klinische zwangerschap werd gedefinieerd als ten minste één zwangerschapszak op echografie na 7 weken zwangerschap met detectie van hartslagactiviteit.
• Doorgaande zwangerschap werd gedefinieerd als zwangerschap met een detecteerbare hartslag bij een zwangerschapsduur van ≥ 12 weken na voltooiing van de eerste overdracht.
• Levende geboorte werd gedefinieerd als de geboorte van ten minste één pasgeborene na een zwangerschapsduur van 24 weken die enig teken van leven vertoonde (tweelingen waren een enkele telling).
• Na een eerste mislukte IVM-cyclus: De klinische en embryologische gegevens en resultaten met betrekking tot de eerste IVM-cyclus (cumulatieve verse en ingevroren embryocycli) zullen worden besproken, om een ​​meer op de patiënt afgestemde aanpak voor een eventuele tweede IVM-cyclus vast te stellen. De patiëntgerichte benadering in de tweede IVM-cyclus kan bestaan ​​uit aanpassing van het beheer van de folliculaire fase.