Amfireguliini versus ei-amfireguliinilisäys kypsymisviljelyalustaan ​​IVM:ssä.

Tässä tutkimuksessa voidaan erottaa kaksi potilastyyppiä:

• Munasarjojen monirakkulamorfologia + normaali syklin pituus (jopa 35 päivää). Suurimmalla osalla tämän ryhmän koehenkilöistä on ei-syndrominen monirakkuinen munasarja, eikä heillä ole PCOS:ää. Näillä potilailla AMH on vain kohtalaisesti kohonnut ja follikkelien syklistä kehitystä tapahtuu FSH:n vaikutuksen alaisena.
• PCOS - munasarjojen monirakkulamorfologia + oligomenorrea (kuukautiset, jotka esiintyvät yli 35 päivän välein, vain neljästä yhdeksään kuukautisia vuodessa) tai amenorrea. Näillä potilailla, joilla on usein voimakkaasti kohonnut AMH-taso ja samanaikainen hyperandrogenemia, suhteellinen FSH-resistenssi johtaa follikulaarisen kasvun pysähtymiseen pienen antraalisen follikkelin tilassa. Dominoivan follikkelin spontaania valintaa ei tapahdu tai sitä esiintyy harvoin. Suuri osa follikkeleista on atreettisia. Merkittävällä osalla näistä potilaista BMI on yli 25. Nämä potilaat saavat yleensä saman tavanomaisen gonadotropiinistimulaatiohoidon kuin edellisen ryhmän potilaat, mutta jos suurimmat follikkelit ovat halkaisijaltaan alle 8 mm kolmantena stimulaatiopäivänä, potilaat saavat yhden tai kaksi lisäpäivää gonadotropiinistimulaatiota. Lisäksi nämä potilaat ottavat yleensä kaksi-kolme viikkoa OCP:tä ennen IVM-syklin alkua ja aloittavat stimulaation noin viidentenä päivänä OCP:n poistamisen jälkeen. Koska näillä potilailla ei kuitenkaan ole endogeenistä FSH-ohjattua follikkelien kerääntymistä, stimulaation aloitus on melko joustava.
• OCP:n (oraaliset ehkäisypillerit) käyttö ennen IVM-sykliä on pakollista. OCP:tä (esimerkiksi Microgynon 30 mikrogrammaa) annetaan päivittäin munasarjan atretic follikkelien puhdistamiseksi. OCP:tä annetaan 14–21 päivän ajan (tämä menetelmä mahdollistaa syklien ja työmäärän paremman ohjelmoinnin embryologialaboratoriossa).

Ennen ensimmäistä IVM-sykliä (seulontakäynti): Kaikille koehenkilöille tehdään lantion ultraäänitutkimus, jolla arvioidaan soveltuvuus IVM-hoitoon. Potilaille tehdään verikoe serologian (hepatiitti B, HIV, kuppa) ja lähtötason hormonaalisen profiloinnin (LH, FSH, E2, progesteroni, AMH, SHBG, testosteroni) varalta. Lisäanalyysi TSH:sta, tyroperoksidaasivasta-aineista, prolaktiinista. Kaikista samanaikaisista lääkkeistä, jotka on otettu viimeisen 3 kuukauden aikana ennen IVM-yritystä, tulee ilmoittaa.

Ensimmäinen IVM-hoitosykli:

• Ensimmäinen klinikkakäynti:

  • Kaikki koehenkilöt ottavat yhteyttä tutkimussairaanhoitajaan syklipäivänä (cd1) aloittaakseen ensimmäisen kapasitaatioviljelysyklin. Jos cd1 on viikonloppuna, koehenkilöt ottavat yhteyttä tutkimushoitajaan maanantaina. Tutkittava saapuu klinikalle kuukautisvuodon 1., 2. tai 3. päivänä. Ultraäänitutkimus tehdään munasarjakystojen poissulkemiseksi ja verinäyte otetaan hormonaalista arviointia varten (HCG, FSH, LH, E2, progesteroni). Ensimmäisen klinikkakäynnin 3. kiertopäivän iltana aloitetaan joustava gonadotropiinistimulaatio follikkelien kehityksen edistämiseksi. Ensimmäinen annos HP-hMG:tä 150 IU klo 14.00. Toinen HP-hMG-annos seuraavana päivänä 150 IU klo 14.00. Potilas palaa lantion ultraäänitutkimukseen ja verikokeeseen (FSH, LH, E2, progesteroni) kahden päivän HP-hMG 150 IU -stimulaation jälkeen (eli 6. päivän aamuna).
  • Potilaille, joilla on OCP-verenvuoto: Ensimmäisenä, toisena, kolmantena tai neljäntenä päivänä OCP-hoidon lopettamisen jälkeen ilmenevässä vieroitusverenvuotossa tutkittava saapuu klinikalle lantion ultraäänitutkimukseen ja verinäyte otetaan hormonaalista arviointia varten (FSH). , LH, E2, progesteroni, AMH, seerumin kokonaistestosteroni, SHBG). Ensimmäisen klinikkakäynnin päivänä aloitetaan joustava HP-hMG-stimulaatio follikulaarisen kehityksen edistämiseksi ensimmäisellä päivittäisellä HP-hMG-annoksella klo 20. Potilas palaa lantion ultraäänitutkimukseen ja verikokeeseen (FSH, LH, E2, progesteroni) kahden päivän HP hMG-stimulaation jälkeen.

• Toinen klinikkakäynti päivänä 6 (2 päivän HP-hMG-hoidon jälkeen):

  • Jos ultraäänitutkimus osoittaa, että yksi hallitseva follikkeli on suurempi kuin 12 mm ja muut follikkelit ovat kaikki alle 10 mm, ja munasolun haku (OR) ajoitetaan kaksi päivää myöhemmin, klo 8.00-9.00. On tärkeää pitää OR 42–46 tuntia viimeisen HP-hMG-injektion jälkeen kiinteänä ajoituksena. Jos ultraäänitutkimus osoittaa, että follikkelin maksimihalkaisija on alle 8 mm, viimeinen HP-hMG-injektio annetaan klo 14.00. ja munasolun haku (OR) ajoitetaan kaksi päivää myöhemmin, klo 8.00-9.00. On tärkeää pitää OR 42–46 tuntia viimeisen HP-hMG-injektion jälkeen kiinteänä ajoituksena.
  • Potilaille, joilla on OCP-verenvuoto: Jos ultraäänitutkimus osoittaa, että follikkelin enimmäishalkaisija on n. 9 mm, viimeinen HP-hMG-injektio annetaan klo 14.00. ja munasolun haku (OR) ajoitetaan kaksi päivää myöhemmin, klo 8.00-9.00 (yleisanestesiassa – OR:n tarkka aika tulee keskustella leikkaussairaanhoitajan ja anestesialääkärin kanssa). On tärkeää pitää TAI-aika vakiona 42–46 tunnin sisällä viimeisen HP-hMG-injektion jälkeen.

• Kolmas käynti – Oosyyttien haku: Munasolun haku (OR) ajoitetaan klo 8.00–10.00 (yleispuudutuksessa). OR-päivänä:

  • Sekä munasarjojen että endometriumin limakalvon ultraäänikuvaus tallennetaan.
  • Verinäyte otetaan hormonaalista profilointia varten (LH, FSH, E2, progesteroni).
• Kaikkia potilaasta otettuja cumulus-oocyte komplekseja (COC) viljellään CAPA-alustassa 24 tuntia.

• CAPA-viljelyn jälkeen puolet munasoluista jaetaan satunnaisesti (50/50) kahteen kypsymislaukaisuelatusaineeseen.

  • Ryhmä 1: Medicult IVM -väliaine + AREG+FSH+HSA+insuliini+estradioli (AREG-TRIGGER-ryhmä)
  • Ryhmä 2: Medicult IVM -väliaine + FSH+GH+hCG+HSA (CONTROL-TRIGGER-ryhmä), johon ei ole lisätty AREGiä

• Munasolujen kypsyminen in vitro:

  • Arvioi ja rekisteröi COC:t cumulus mass (CM) ja kumulaatiokontakti munasolujen ja cumulus solujen välillä. Ota valokuvia joka kerta. Hävitä kokonaan denudoidut, rappeutuneet munasolut.
  • Siirrä puolet COC:ista (5-10 kerrallaan) kapasitaatioviljelymaljasta "pesumaljaan", joka sisältää "Maturation Medium 1 (AREG-TRIGGER medium)" käyttämällä Eppendorf-mikropipettiä ja pese ne huolellisesti (täytä pipetin kärjet 5 µl, max. 10 µl). Siirrä sitten COC:t "IVM-maljaan" ja "Maturation Medium 1 (AREG-TRIGGER medium)".
  • Siirrä COC:iden toinen puolikas Capacitation-viljelymaljasta "pesumaljaan", joka sisältää "Maturation Medium 2 (CONTROL-TRIGGER medium)" ja pese ne huolellisesti (täytä pipetin kärkiin 5 µl, max. 10 µl). Siirrä sitten COC:t "IVM-maljaan" ja "Maturation Medium 2 (CONTROL-TRIGGER medium)".
  • Säilytä yhdistelmäehkäisytabletteja ~10:n poolissa.
  • Merkitse malja asianmukaisesti ja viljele COC:ita 30–32 tuntia inkubaattorissa.
• Kypsytyksen arviointi (MII, GVBD, GV) tehdään 30 tunnin kohdalla. Munasolut, joille on tehty GVBD, mutta joilla ei ole selkeää PB:tä, arvioidaan 32 tunnin kuluttua. Siemennys suoritetaan intrasytoplasmisella siittiöinjektiolla (3-4 tuntia munasolun talteenoton tai kypsymisen tarkistuksen jälkeen); vain kypsyneet munasolut siemennetään.
• Hedelmöityksen tarkistus tehdään käänteismikroskoopilla 16-18 tunnin kuluttua siemennyksestä. Alkioiden arviointi suoritetaan 68 ± 1 tunnin kuluttua hedelmöityksestä Istanbulin konsensuksen mukaisesti. Käytetty standardi embryo-vitrifikaatioprotokolla. Alkiot lasitetaan saadun stimulaatioprotokollan mukaisesti (ryhmä 1 AREG-TRIGGER tai ryhmä 2 - CONTROL-TRIGGER).
• Pakastetun alkion siirto: Potilas satunnaistetaan vastaanottamaan alkio satunnaisesti AREG-TRIGGER- tai CONTROL-TRIGGER-alkiosta. Jos satunnaistetun ryhmän alkioita ei ollut saatavilla, siirrettiin alkioita toisesta ryhmästä.
• Ensimmäinen raskaustesti suoritettiin 14 päivää alkionsiirron jälkeen; positiivinen raskaustesti määriteltiin seerumin beeta-hCG:ksi >5 mIU/ml
• Kliininen raskaus määriteltiin vähintään yhdeksi raskauspussiksi ultraäänellä 7 viikon raskausviikolla ja sydämenlyöntiaktiivisuus havaittiin.
• Jatkuva raskaus määriteltiin raskaudeksi, jonka syke on havaittavissa ≥12 raskausviikolla ensimmäisen siirron jälkeen.
• Elävänä syntymä määriteltiin vähintään yhden vastasyntyneen syntymäksi 24 viikon raskausviikon jälkeen, jossa oli elonmerkkejä (kaksoset olivat yksittäinen laskelma).
• Ensimmäisen epäonnistuneen IVM-syklin jälkeen: Ensimmäiseen IVM-sykliin (kumulatiiviset tuoreet ja pakastetut alkiosyklit) liittyvät kliiniset ja embryologiset tiedot ja tulokset keskustellaan potilaalle räätälöidyn lähestymistavan luomiseksi mahdollista toista IVM-sykliä varten. Potilaalle räätälöity lähestymistapa toisessa IVM-syklissä voi koostua follikulaarisen vaiheen hallinnan muuttamisesta.