신생아의 외상성 요추 천자 후 24시간 대 48시간에 요추 천자 반복

연구 설계 계층화 및 차단이 포함된 공개 라벨 무작위 대조 시험. 연구 설정 대학원 의학 교육 및 연구 연구소(PGIMER)의 신생아 병동 및 소아 응급실 신생아 병동.

전자는 레벨 3 신생아 집중 치료실(NICU)입니다. 학습 기간 다른 곳에서 언급됨 자격 기준 다른 곳에서 언급됨 동의 학부모 정보 시트가 제공되었습니다. 피험자가 연구에 포함된 후 환자의 부모로부터 정보에 입각한 서면 동의를 얻었습니다. 동의서에는 관련 절차 및 연구에 대한 정보가 포함되었습니다. 또한 시술 전후에 관련된 위험 요소도 포함했습니다. 모든 과목은 각 부모의 동의를 얻은 후 포함되었습니다.

절차 등록 후 수정되지 않은 백혈구(WBC), 수정된 WBC 수, 적혈구(RBC) 수, 포도당 농도, 단백질 농도, CSF 프로칼시토닌 농도, 그람 염색 및 배양 및 미생물 민감도가 수행되었습니다.

Post-LP 대상자는 무작위 배정되었고 반복 LP는 24시간 또는 48시간 후에 수행되었으며, 수정되지 않은 WBC, 수정된 WBC 수, RBC 수, 포도당 농도, 단백질 농도, 그람 염색 및 미생물의 배양 및 민감도가 연구되었습니다.

기준 매개변수 임신, 출생 체중, 성별, 출생 후 연령, 현재 체중, 신생아의 초기 요추 천자에 대한 적응증, 초기 요추 천자를 수행하는 사람의 선임 수준, 초기 요추 천자 전에 이용 가능한 경우 혈소판 수, 다음과 같은 경우 응고 연구 보고서 사용 가능, 초기 요추 천자 및 반복 요추 천자 전, 초기 LP 전에 혈당계로 측정한 전혈 혈당.

초기 요추 천자에서 측정된 매개변수

o 비보정 및 보정 WBC 수: 두 가지 방법을 사용하여 세포 수를 세었습니다. 하나는 LP 연주 후 30분 이내에 Neubauer 챔버에 있었습니다. 60 μL의 CSF를 A와 B로 표시된 2개의 Eppendorf 튜브에 분할했습니다. 첫 번째 Eppendorf 튜브, 즉 A로 표시된 CSF의 27 μL를 실험실 표준 마이크로피펫을 사용하여 Methylene Blue로 희석하고 챔버를 충전하는 데 사용했습니다. WBC와 RBC의 세포 수는 표준 절차로 수행되었습니다.

B 라벨이 붙은 Eppendorf 튜브의 또 다른 27 μL CSF는 Gentian Violet과 Glacial Acetic으로 구성된 3 μL Turk's fluid를 사용하여 희석되었습니다. 터크액은 본질적으로 적혈구를 용해시킵니다. 다음에 챔버의 한쪽이 충전되고 WBC가 밝은 회색 사각형(n)으로 계산됩니다. 마이크로리터당 WBC 수 = n x 25/9. RBC 수를 위해 - 3 μL의 Methylene Blue를 27 μL의 CSF에 첨가하여 30 μL를 만들었습니다. 챔버의 한 면을 충전하고 RBC를 짙은 회색 사각형(n)으로 세었습니다. 마이크로리터당 계산된 총 RBC = n x 500/9. 언급한 바와 같이 WBC와 RBC는 Main Hematology 검사실과 응급 검사실에서 사용할 수 있는 자동화 기계에서도 계산되었습니다. 전자동 기계 분석기는 Sysmex XN-1000(Sysmex-Kobe, Japan)이다. XN 시리즈 분석기에는 CSF의 WBC 및 RBC 수를 계산하기 위해 형광 유세포 분석 및 임피던스 측정을 사용하는 연구 모드가 있습니다. RBC를 측정하기 위해 광학(낮은 농도 범위용) 및 임피던스(높은 농도 범위용) 기술이 모두 사용되었습니다. WBC Differential Fluorescence 채널에서 총 WBC 및 Differential WBC 수는 유세포 분석 측정(예: 측면 산란, 전방 산란 및 DNA/RNA 형광)을 기반으로 합니다. XN hsA 연구 모드를 사용하여 분석하기 전에는 샘플을 준비할 필요가 없었습니다.

포도당 농도- CSF의 포도당 농도는 포도당 산화 효소의 존재 하에서 효소 산화 후 비색계 기반 방법을 사용하여 추정되었지만 단백질을 분해하지는 않았습니다. 반응 중에 생성된 과산화수소는 페놀 및 4-아미노페나존과 반응하여 지시약 역할을 하는 적자색 퀴오노니민 염료를 형성합니다. 생성되는 색상의 강도는 포도당 농도에 정비례하며 505nm의 파장에서 측정됩니다. 기계 모델은 Siemens의 Adiva 1800입니다.

단백질 농도 - 이것은 또한 Beckman Coulter 분석기에서 수행되는 광도 측정 테스트에 의한 정량적 결정입니다. 파이로갈롤 레드는 몰리브덴산염과 결합하여 470nm의 파장에서 최대 흡수를 갖는 적색 착물을 형성합니다. 이 분석은 피로갈롤 레드-몰리브데이트 복합체가 단백질 분자의 염기성 아미노산 그룹에 결합할 때 발생하는 이동 흡수를 기반으로 합니다. 600nm의 파장에서 최대 흡광도를 갖는 청자색 복합체가 형성됩니다. 이 복합체의 흡광도는 샘플의 단백질 농도에 정비례합니다.

프로칼시토닌 농도 - CSF 프로칼시토닌은 비오틴 표지된 프로칼시토닌 특이적 항체 및 루테늄 복합체로 표지된 단일클론 프로칼시토닌 특이적 항체(Roche Diagnostics, Germany)를 사용하는 2단계 샌드위치 전기화학발광 면역분석법을 사용하여 결정되었습니다. 200μL의 CSF 샘플을 비오틴 및 루테늄으로 표지된 항-프로칼시토닌 항체와 함께 37℃에서 배양했습니다. 두 번째 인큐베이션에서, 비오틴-스트렙타비딘 상호작용을 통해 복합체에 결합하는 스트렙타비딘-코팅된 항 마이크로입자를 첨가하였다. 반응 혼합물은 미립자가 전극 표면에 자기적으로 포획되는 측정 셀로 흡인됩니다. 결합되지 않은 물질은 세척에 의해 제거되고 전극에 전압이 가해지면 광전자 증배관에 의해 측정되는 화학발광이 유도됩니다. 분석의 측정 범위는 2ng/dl - 10000ng/dl이며 기능적 감도는 6ng/dl이고 분석 감도는 2ng/dl입니다.

외상성 요추 천자의 그람염색 외상성 요추 천자의 배양 및 민감도 단위 정책에 따라 CSF 세포 수에 대해 교육을 받은 직원이 NICU 측 실험실의 현미경에서 LP의 30분 이내에 CSF 세포 수를 수행했습니다. 이는 WBC 및 RBC의 변성 및 분석 지연으로 인한 WBC 수치 감소를 피하기 위해 수행되었습니다.

무작위배열 적격 대상자는 초기 LP 이후 24시간 이내에 등록되었습니다. 웹 사이트 www.randomization.com에서 블록 무작위화 시퀀스가 ​​생성되었습니다. 순열, 짝수, 무작위로 다양한 블록 크기를 1:1 할당 비율로 이 연구에 사용했습니다.

윤리 위원회 승인 이 연구는 찬디가르에 있는 PGIMER의 기관 윤리 위원회(INT/IEC/2019/000557)의 승인을 받았습니다. 무작위 그룹을 언급하는 논문. 등록 후 봉투에 환자 이름을 적었습니다. 이름을 쓰고 나서야 봉투가 찢어지고 봉투 안에 할당된 개입이 뒤따랐다.

개입 그룹 피험자는 2개 그룹으로 무작위로 할당되었습니다. 한 그룹은 초기 외상성 LP 후 24시간에 반복 LP를 수행한 환자로 구성되었습니다. 두 번째 그룹은 초기 외상성 LP 후 48시간에 LP가 반복된 환자로 구성되었습니다.

실명 NICU에서 일하는 의사와 간호사의 눈을 멀게 하는 것은 불가능했습니다. 그러나 미생물학, 혈액학 및 생화학 실험실 직원은 할당 그룹에 대해 눈이 멀었습니다.

반복 LP에서 측정된 결과:

LP 수행 전 혈당, CSF 샘플 획득 여부, CSF 샘플: 순수 혈액, 눈에 보이는 혈흔, 미세외상 또는 비외상 여부, CSF RBC 수, CSF WBC 수(교정 및 교정되지 않음), CSF 포도당, CSF 단백질, CSF 그람 염색, 배양 및 민감도. 첫 번째 LP와 유사하게 CSF 세포 수는 CSF 세포 수에 대해 교육을 받은 직원이 NICU 측 연구실의 현미경에서 LP 30분 이내에 수행했습니다.

참조 표준 확실한 뇌수막염 CSF 배양 및/또는 그람 염색 양성 가능성 있는 뇌수막염 CSF 프로칼시토닌(PCT) 양성. CSF PCT 양성을 정의하기 위해 33ng/dL 이상의 컷오프를 취했습니다. 이는 Reshi et al(18)의 연구를 기반으로 한 것입니다. 이 연구는 2년(2014년 1월부터 2015년 12월까지) 동안 스리나가르의 SKIMS에 있는 신생아 및 소아과의 신생아 집중 치료실에서 수행되었습니다. 이 연구는 패혈증 워크업의 일부로 LP 자격을 갖춘 생후 28일 영아를 포함하는 전향적 연구였습니다. 그들은 외상성 요추 천자를 ⩾500 적혈구/mm3의 CSF 샘플로 정의했으며, 백혈구 수 조정은 500개의 적혈구 대 1개의 백혈구의 평균 비율로 수행되었습니다. 세균성 수막염의 진단은 양성 CSF 및/또는 혈액 배양 또는 양성 그람 염색을 동반한 패혈증이 있는 신생아에서 이루어졌습니다. 그들은 생후 28일 이상 된 영아 또는 입원 전 항생제를 투여받은 신생아, 수막염 또는 바이러스성 수막염(단순 포진 바이러스) 외에 다른 감염 병소가 있는 경우 최근 뇌 수술을 받은 신생아를 제외했습니다. 제외 기준 후 연구는 168명의 신생아에 대해 결론지었습니다. 그들은 0.33ng/ml의 값에서 CSF PCT가 92%의 민감도, 87%의 특이도, 85.2%의 양성 예측 값(PPV), 93%의 음성 예측 값(NPV)을 갖는 것을 관찰했습니다. 우리 연구에서 뇌수막염의 정의를 위해 CSF WBC, CSF 설탕 및 CSF 단백질과 같은 뇌수막염에 대한 다른 CSF 기존 매개변수를 포함하지 않았습니다. 참조 표준의 일부가 됩니다.

결과 측정 비교 다른 곳에서 언급됨