新生児の外傷性腰椎穿刺後 24 時間対 48 時間で腰椎穿刺を繰り返す

研究デザイン 層別化とブロッキングを伴う非盲検無作為対照試験。 研究の設定 大学院医学教育研究研究所（PGIMER）の小児救急の新生児ユニットと新生児ユニット。

前者はレベル 3 の新生児集中治療室 (NICU) です。 試験期間 他の場所で言及 適格基準 他の場所で言及 同意 親情報シートが提供された。 インフォームド 書面による同意が患者の両親から得られた後、被験者は研究に含まれました。 同意には、それに関連する手順と研究に関する情報が含まれていました。 また、処置に関連する、および処置後の危険因子も含まれていました。 すべての被験者は、それぞれの両親から故意の同意を得た後に含まれていました。

手順 登録後、補正されていない白血球 (WBC)、補正された WBC 数、赤血球 (RBC) 数、グルコース濃度、タンパク質濃度、CSF プロカルシトニン濃度、グラム染色、および微生物の培養と感受性が行われました。

LP 後、被験者は無作為化され、24 時間後または 48 時間後に繰り返し LP が実行され、未補正の WBC、補正された WBC 数、RBC 数、グルコース濃度、タンパク質濃度、グラム染色、および微生物の培養と感受性が研究されました。

ベースラインパラメータ 妊娠、出生時体重、性別、生後年齢、現在の体重、新生児の最初の腰椎穿刺の適応症、最初の腰椎穿刺を行う人の年功レベル、最初の腰椎穿刺前に入手可能な場合の血小板数、凝固研究レポート最初の腰椎穿刺前およ​​び腰椎穿刺を繰り返す前に利用可能、最初の LP の前にグルコメーターで測定された全血ブドウ糖。

最初の腰椎穿刺で測定されたパラメータ

o 未補正および補正済みの WBC カウント: 細胞は 2 つの方法を使用してカウントされました。 1 つは、LP を実行してから 30 分以内に Neubauer チャンバーにいました。 60 μL の CSF を 2 つのエッペンドルフ チューブに分割し、A と B のラベルを付けました。最初のエッペンドルフ チューブ、つまり A とラベルを付けた 27 μL の CSF を、実験室標準のマイクロ ピペットを使用してメチレン ブルーで希釈し、チャンバーの充填に使用しました。 WBC と RBC の両方の細胞計数は、標準的な手順として実行されました。

Ｂと表示されたエッペンドルフ管からの別の２７μＬのＣＳＦを、リンドウバイオレットおよび氷酢酸からなる３μＬのトルコ液を使用して希釈した。 タークス液は基本的に赤血球を溶解します。 続いて、チャンバーの片側が充電され、WBC が明るい灰色の四角 (n) で計算されます。 マイクロリットルあたりの白血球数 = n x 25/9. ＲＢＣ計数のために、３μＬのメチレンブルーを２７μＬのＣＳＦに加えて３０μＬとした。 チャンバーの片側を充電し、暗灰色の正方形 (n) で RBC をカウントしました。 1 マイクロリットルあたりにカウントされた合計 RBC = n x 500/9。 前述のように、WBC と RBC は、メインの血液学検査室と緊急検査室で利用可能な自動化された機械でもカウントされました。 完全に自動化されたマシン アナライザーは、Sysmex XN-1000 (シスメックス神戸、日本) です。 XN シリーズ アナライザーには、蛍光フローサイトメトリーとインピーダンス測定を使用して CSF 内の WBC と RBC の数をカウントする研究モードがあります。 ＲＢＣを測定するために、光学（低濃度範囲用）およびインピーダンス（高濃度用）技術の両方が使用された。 WBC Differential Fluorescence チャネルでは、WBC の合計数と WBC の差分数は、フローサイトメトリー測定 (側方散乱、前方散乱、DNA/RNA 蛍光など) に基づいています。 XN hsA リサーチ モードを使用した分析の前に、サンプルの準備は必要ありませんでした。

グルコース濃度 - CSF 中のグルコース濃度は、グルコースオキシダーゼの存在下での酵素酸化の後、比色法に基づく方法を使用して推定されましたが、タンパク質は分解されませんでした。 反応中に生成される過酸化水素は、フェノールおよび 4-アミノフェナゾンと反応して、指示薬として機能する赤紫色のキオノンイミン色素を形成します。 生成される色の強度は、グルコース濃度に正比例し、505 nm の波長で測定されます。 マシン モデルは Siemens の Adiva 1800 です。

タンパク質濃度 - これは、Beckman Coulter アナライザーで実行される測光色テストによる定量的決定でもあります。 ピロガロールレッドはモリブデン酸と結合して、波長 470 nm で最大吸収を持つ赤色複合体を形成します。 このアッセイは、ピロガロールレッド-モリブデン酸複合体がタンパク質分子の塩基性アミノ酸基に結合するときに発生するシフト吸収に基づいています。 青紫色の複合体が形成され、波長 600 nm で吸光度が最大になります。 この複合体の吸光度は、サンプル中のタンパク質濃度に正比例します。

プロカルシトニン濃度 - CSF プロカルシトニンは、ビオチン標識プロカルシトニン特異抗体およびルテニウム錯体で標識されたモノクローナルプロカルシトニン特異抗体 (Roche Diagnostics、ドイツ) を使用した 2 段階サンドイッチ電気化学発光イムノアッセイを使用して決定されました。 ＣＳＦサンプル２００μＬを、ビオチンおよびルテニウム標識抗プロカルシトニン抗体と共に３７℃でインキュベートした。 2 番目のインキュベーションでは、ビオチン-ストレプトアビジン相互作用を介して複合体に結合するストレプトアビジン被覆抗微粒子を添加しました。 反応混合物は測定セルに吸引され、そこで微粒子が電極の表面に磁気的に捕捉されます。 結合していない物質は洗浄によって除去され、電極に電圧が印加されると化学発光が誘発され、光電子増倍管によって測定されます。 アッセイの測定範囲は 2 ng/dl ～ 10000 ng/dl で、機能感度は 6 ng/dl、分析感度は 2 ng/dl です。

外傷性腰椎穿刺のグラム染色 外傷性腰椎穿刺の培養と感度 単位方針に従って、CSF 細胞計数の訓練を受けた担当者が NICU サイドラボの顕微鏡で LP の 30 分以内に CSF 細胞計数を実施しました。 これは、分析の遅延による WBC と RBC の変性と WBC 数の低下を避けるために行われました。

ランダム化シーケンス 適格な被験者は、最初の LP 後 24 時間以内に登録されました。 ブロックのランダム化シーケンスは、ウェブサイト www.randomization.com から生成されました。 この調査では、割り当て比率が 1:1 で、並べ替えられた偶数のランダムに変化するブロック サイズが使用されました。

ETHICS COMMITTEE APPROVAL この研究は、チャンディーガルの PGIMER の機関倫理委員会 (INT/IEC/2019/000557) によって承認されました。無作為化のグループに言及している論文。 登録後、患者の名前が封筒に書かれました。 名前を書いた後でのみ、封筒が破れ、その後、封筒内の割り当てられた介入が実行されました。

介入グループ 被験者は無作為に 2 つのグループに割り当てられました。 1 つのグループは、最初の外傷性 LP の 24 時間後に繰り返し LP が行われた患者で構成されていました。 2番目のグループは、最初の外傷性LPから48時間後にLPが繰り返された患者で構成されていました。

盲目 NICU で働く医師や看護師を盲目にすることはできませんでした。 ただし、微生物学、血液学、および生化学の研究室の担当者は、割り当てられたグループを知らされていませんでした。

リピート LP で測定された結果:

LPを行う前の血糖値、CSFサンプルが得られたかどうか、CSFサンプル: 純粋な血液か、明らかに血が混じっているか、微小外傷性か非外傷性か、CSF RBC数、CSF WBC数(未補正および補正)、CSFグルコース、CSFタンパク質、CSFグラム染色、培養、および感受性。 最初の LP と同様に、CSF 細胞計数の訓練を受けた担当者が、NICU サイド ラボの顕微鏡で LP の 30 分以内に CSF 細胞計数を実行しました。

参照基準 明確な髄膜炎 CSF 培養および/またはグラム染色陽性 髄膜炎の疑い CSF プロカルシトニン (PCT) 陽性。 CSF PCT陽性を定義するために、33 ng/dL以上のカットオフを採用しました。 これは、Reshi らによる研究に基づいています(18)。 この研究は、2 年間 (2014 年 1 月から 2015 年 12 月) にわたって、スリナガルの SKIMS の新生児学および小児科の新生児集中治療室で実施されました。 この研究は、敗血症精密検査の一環として LP を認定した生後 28 日の乳児を含む前向き研究でした。 彼らは、外傷性腰椎穿刺を約500赤血球/ mm 3のCSFサンプルと定義し、白血球数の調整は、赤血球500対白血球1の平均比率で行われました。 細菌性髄膜炎の診断は、CSFおよび/または血液培養陽性またはグラム染色陽性の敗血症の新生児で行われました。 彼らは、生後28日以上の乳児または入院前に抗生物質を投与された新生児、髄膜炎または単純ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス）に加えて感染の別の病巣が存在する場合、最近脳手術を受けた新生児を除外しました. 除外基準後の研究は、168人の新生児で結論付けられました。 彼らは、0.33ng/ml の値で、CSF PCT の感度が 92%、特異度が 87%、陽性適中率 (PPV) が 85.2%、陰性適中率 (NPV) が 93% であることを観察しました。 私たちの研究では、CSF WBC、CSF 糖、CSF タンパク質など、髄膜炎の可能性を示す他の CSF の従来のパラメーターを、髄膜炎の可能性を定義するために含めませんでした。参照基準の一部になります。

結果測定の比較 別の場所で言及