Herhaal lumbale punctie 24 versus 48 uur na traumatische lumbale punctie bij neonaten

ONDERZOEKSOPZET Een open-label gerandomiseerde controleproef, met stratificatie en blokkering. STUDIE-INSTELLING De afdeling Pasgeborenen en de afdeling Neonatologie van de Pediatrische Spoedeisende Hulp van het Postgraduate Institute of Medical Education and Research (PGIMER).

De eerste is een neonatale intensive care-afdeling (NICU) van niveau 3. STUDIEPERIODE Elders vermeld GESCHIKTHEIDSCRITERIA Elders vermeld TOESTEMMING Er is een informatieblad voor de ouders verstrekt. Geïnformeerde schriftelijke toestemming werd verkregen van de ouders van de patiënt, waarna proefpersonen in het onderzoek werden opgenomen. De toestemming omvatte informatie over de procedure en het onderzoek dat daarmee verband hield. Het omvatte ook de risicofactoren die verband houden met en na de procedure. Alle proefpersonen werden opgenomen na het verkrijgen van opzettelijke toestemming van de respectieve ouders.

PROCEDURE Na inschrijving werden niet-gecorrigeerde witte bloedcellen (WBC), gecorrigeerde WBC-telling, rode bloedcellen (RBC)-telling, glucoseconcentratie, eiwitconcentratie, CSF-procalcitonineconcentratie, gramkleuring en kweek en gevoeligheid van micro-organismen uitgevoerd.

Na LP werd de proefpersoon gerandomiseerd en herhaalde LP werd na 24 uur of 48 uur uitgevoerd, en niet-gecorrigeerde WBC, gecorrigeerde WBC-telling, RBC-telling, glucoseconcentratie, eiwitconcentratie, gramkleuring en kweek en gevoeligheid van micro-organismen werden bestudeerd.

BASISPARAMETERS Dracht, geboortegewicht, geslacht, postnatale leeftijd, huidig ​​gewicht, indicatie voor initiële lumbaalpunctie bij de pasgeborene, anciënniteitsniveau van de persoon die de initiële lumbaalpunctie uitvoert, aantal bloedplaatjes indien beschikbaar vóór initiële lumbaalpunctie, het coagulatieonderzoeksrapport, indien beschikbaar, vóór de eerste lumbaalpunctie en herhaalde lumbaalpunctie, Volbloedglucose gemeten met een glucometer vóór de eerste LP.

Parameters gemeten bij de initiële lumbaalpunctie

o Ongecorrigeerde en gecorrigeerde WBC-telling: Cellen werden geteld met behulp van twee methoden. Eén was binnen 30 minuten na het uitvoeren van een LP in de Neubauer-kamer. 60 μL CSF werd gesplitst in 2 Eppendorf-buisjes, gelabeld A en B. 27 μL CSF in het eerste Eppendorf-buisje, dwz gelabeld A, werd verdund met methyleenblauw met behulp van laboratoriumstandaardmicropipetten en werd gebruikt om de kamer te vullen. Het aantal cellen van zowel WBC als RBC werd als standaardprocedure uitgevoerd.

Nog eens 27 μL CSF uit Eppendorf-buis met label B werd verdund met 3 μL Turk's vloeistof met een samenstelling van gentiaanviolet en ijsazijn. De vloeistof van de Turk lyseert in wezen de RBC's. Daarna wordt één kant van de kamer geladen en WBC's worden berekend in de lichtgrijze vierkanten (n). Het aantal leukocyten per microliter = n x 25/9. Voor RBC-telling - 3 μl methyleenblauw werd toegevoegd aan 27 μl CSF om 30 μl te maken. Eén kant van de kamer was geladen en RBC's werden geteld op de donkergrijze vierkanten (n). Het totaal aantal RBC's geteld per microliter = n x 500/9. Zoals vermeld werden WBC's en RBC's ook geteld in geautomatiseerde machines die beschikbaar zijn in het Main Hematology lab en het emergency lab. De volledig geautomatiseerde machineanalysator is de Sysmex XN-1000 (Sysmex-Kobe, Japan). De analysator van de XN-serie heeft een onderzoeksmodus die fluorescentieflowcytometrie en impedantiemetingen gebruikt om het aantal WBC's en RBC's in CSF te tellen. Om RBC's te meten, werden zowel de optische (voor lagere concentratiebereiken) als impedantie (voor hogere concentratie) technieken gebruikt. In het WBC-differentiële fluorescentiekanaal zijn de totale WBC- en differentiële WBC-tellingen gebaseerd op flowcytometriemetingen (bijv. zijverstrooiing, voorwaartse verstrooiing en DNA/RNA-fluorescentie). Vóór de analyse met de XN hsA-onderzoeksmodus was er geen voorbereiding van het monster nodig.

Glucoseconcentratie - Glucoseconcentratie in CSF werd geschat met behulp van een op colorimetrie gebaseerde methode na enzymatische oxidatie in aanwezigheid van glucose-oxidase, maar brak het eiwit niet af. Het waterstofperoxide dat tijdens de reactie wordt geproduceerd, reageert met fenol en 4-aminofenazon om een ​​roodviolette quinononimine-kleurstof te vormen die als indicator fungeert. De intensiteit van de geproduceerde kleur is rechtevenredig met de glucoseconcentratie en wordt gemeten bij een golflengte van 505 nm. Het machinemodel is Adiva 1800 van Siemens.

Eiwitconcentratie - Dit is ook een kwantitatieve bepaling door een fotometrische kleurtest uitgevoerd in een Beckman Coulter-analysator. Pyrogallolrood wordt gecombineerd met molybdaat om een ​​rood complex te vormen met maximale absorptie bij een golflengte van 470 nm. De assay is gebaseerd op de verschuivingsabsorptie die optreedt wanneer het pyrogallol-rood-molybdaatcomplex basische aminozuurgroepen van eiwitmoleculen bindt. Er wordt een blauwpaars complex gevormd met een maximale absorptie bij een golflengte van 600 nm. De absorptie van dit complex is recht evenredig met de eiwitconcentratie in het monster.

Procalcitonineconcentratie - CSF-procalcitonine werd bepaald met behulp van een tweestaps sandwich-elektrochemiluminescentie-immunoassay met behulp van biotine-gelabeld procalcitonine-specifiek antilichaam en een monoklonaal procalcitonine-specifiek antilichaam gelabeld met een Ruthenium-complex (Roche Diagnostics, Duitsland). 200 μL van het CSF-monster werd geïncubeerd bij 37 graden C met de met biotine en ruthenium gemerkte anti-procalcitonine-antilichamen. In de tweede incubatie werden met streptavidine gecoate antimicrodeeltjes toegevoegd die het complex binden via de biotine-streptavidine-interactie. Het reactiemengsel wordt opgezogen in een meetcel waar microdeeltjes magnetisch worden gevangen op het oppervlak van de elektrode. Ongebonden stoffen worden verwijderd door wassen en bij het aanleggen van een spanning op de elektrode zou chemiluminescentie worden geïnduceerd die wordt gemeten door een fotomultiplicator. Het meetbereik van de assay is 2 ng/dl - 10000 ng/dl met een functionele gevoeligheid van 6 ng/dl en een analytische gevoeligheid van 2 ng/dl.

Gramkleuring van traumatische lumbaalpunctie Kweek en gevoeligheid van traumatische lumbaalpunctie Volgens het beleid van de eenheid werd CSF-celtelling uitgevoerd binnen 30 minuten na LP in de microscoop in het zijlaboratorium van de NICU door personeel dat getraind was in CSF-celtelling. Dit werd gedaan om degeneratie van WBC's en RBC's en een daling van het aantal WBC's als gevolg van vertraging in de analyse te voorkomen.

RANDOMISATIESEQUENTIE In aanmerking komende proefpersonen werden ingeschreven binnen minder dan 24 uur na de initiële LP. Er werd een blokrandomiseringsreeks gegenereerd vanaf de website www.randomization.com. In dit onderzoek werden gepermuteerde, even genummerde, willekeurig variërende blokgroottes met een toewijzingsverhouding van 1:1 gebruikt.

GOEDKEURING VAN DE ETHISCHE COMMISSIE Het onderzoek werd goedgekeurd door de Institutional Ethics Committee van PGIMER, Chandigarh (INT/IEC/2019/000557) POST-RANDOMISATIE UITSLUITINGEN Elders vermeld VERBERGEN VAN TOEWIJZING De willekeurige toewijzingsvolgorde werd verborgen met behulp van ondoorzichtige verzegelde enveloppen met serienummers die stukjes een paper, met vermelding van een groep randomisatie. Na inschrijving werd de naam van de patiënt op de envelop geschreven. Pas na het schrijven van de naam werd de envelop gescheurd en werd vervolgens de toegewezen interventie in de envelop uitgevoerd.

INTERVENTIEGROEPEN De proefpersonen werden willekeurig toegewezen aan 2 groepen. De ene groep bestond uit patiënten bij wie een herhaalde LP werd gedaan 24 uur na de initiële traumatische LP. De 2e groep bestond uit patiënten bij wie LP 48 uur na de initiële traumatische LP werd herhaald.

BLINDEN Het was niet mogelijk om doktoren en verpleegkundigen die op de NICU werkten te blinderen. Het laboratoriumpersoneel voor microbiologie, hematologie en biochemie was echter blind voor de toewijzingsgroep.

UITKOMSTEN GEMETEN IN HERHALEN LP:

Bloedglucose voordat LP wordt gedaan, of CSF-monster is verkregen, CSF-monster: openhartig bloed, zichtbaar bloed getint, microtraumatisch of niet-traumatisch, CSF RBC-telling, CSF WBC-telling (niet-gecorrigeerd en gecorrigeerd), CSF-glucose, CSF-eiwit, CSF Gramkleuring, cultuur en gevoeligheid. Net als bij de eerste LP, werd CSF-celtelling uitgevoerd binnen 30 minuten na LP in de microscoop in het zijlaboratorium van de NICU door personeel dat was opgeleid in CSF-celtelling.

REFERENTIESTANDAARD Definitieve meningitis CSF-kweek en/of gramkleuring positief Waarschijnlijke meningitis CSF procalcitonine (PCT) positief. Om CSF PCT-positief te definiëren, hebben we een grenswaarde van 33 ng/dL of meer genomen. Dit was gebaseerd op de studie van Reshi et al(18). Het onderzoek werd gedurende een periode van 2 jaar (januari 2014 tot december 2015) uitgevoerd op de afdeling Neonatale Intensive Care van de afdeling Neonatologie en Kindergeneeskunde van SKIMS, Srinagar. De studie was een prospectieve studie met baby's van 28 dagen oud, die LP kwalificeerden als onderdeel van sepsis-onderzoek. Ze definieerden traumatische lumbaalpunctie als een CSF-monster met 500 rode bloedcellen / mm3, en aanpassingen aan het aantal leukocyten werden gedaan met een gemiddelde verhouding van 500 rode bloedcellen tot 1 witte bloedcellen. De diagnose bacteriële meningitis werd gesteld bij pasgeborenen met sepsis met ofwel positieve CSF en/of bloedkweek of positieve gramkleuring. Ze sloten baby's uit die ouder waren dan 28 dagen of pasgeborenen die antibiotica hadden gekregen voorafgaand aan ziekenhuisopname, pasgeborenen die recent een hersenoperatie hadden ondergaan als er naast meningitis of virale meningitis (herpes simplex-virus) een andere infectiehaard aanwezig was. Na exclusiecriteria werd de studie afgesloten met 168 pasgeborenen. Ze observeerden dat CSF PCT bij een waarde van 0,33 ng/ml een gevoeligheid heeft van 92%, een specificiteit van 87%, een positief voorspellende waarde (PPV) van 85,2% en een negatief voorspellende waarde (NPV) van 93%. We hebben in onze studie geen andere CSF-conventionele parameters voor waarschijnlijke meningitis opgenomen, zoals CSF WBC, CSF Sugar en CSF Protein voor de definitie van waarschijnlijke meningitis, omdat we van plan waren deze tests als indextests te bestuderen, en daarom konden ze niet ook deel uitmaken van de referentiestandaard.

VERGELIJKING VAN UITKOMSTMATEN Elders vermeld