Gentag lumbalpunktur ved 24 versus 48 timer efter traumatisk lumbalpunktur hos nyfødte

STUDIEDESIGN Et åbent randomiseret kontrolforsøg med stratificering og blokering. STUDIEINDSTILLING Newborn-enheden og Neonatal-enheden for pædiatrisk nødsituation på Postgraduate Institute of Medical Education and Research (PGIMER).

Førstnævnte er en niveau 3 neonatal intensiv afdeling (NICU). UNDERSØGELSESPERIODE Nævnt andetsteds BERETNINGSKRITERIER Nævnt andetsteds SAMTYKKE Der blev leveret et overordnet informationsark. Der blev indhentet informeret skriftligt samtykke fra patientens forældre, hvorefter forsøgspersoner blev inkluderet i undersøgelsen. Samtykket indeholdt oplysninger om proceduren og undersøgelse relateret til den. Det omfattede også risikofaktorer forbundet med og efter proceduren. Alle forsøgspersoner blev inkluderet efter indhentet bevidst samtykke fra respektive forældre.

PROCEDURE Efter tilmelding ukorrigerede hvide blodlegemer (WBC), korrigeret WBC-tal, røde blodlegemer (RBC)-tal, Glucosekoncentration, Proteinkoncentration, CSF Procalcitonin-koncentration, Gram-farvning og kultur og følsomhed af mikroorganismen blev udført.

Efter LP blev forsøgspersonen randomiseret, og gentagen LP blev udført enten efter 24 timer eller 48 timer, og ukorrigeret WBC, korrigeret WBC-tal, RBC-tal, Glucosekoncentration, Proteinkoncentration, Gram-farvning og Kultur og følsomhed af mikroorganismer blev undersøgt.

BASELINE PARAMETRE Gestation, Fødselsvægt, Køn, Postnatal alder, Aktuel vægt, Indikation for initial lumbalpunktur hos den nyfødte, Anciennitetsniveau for den person, der udfører den indledende lumbalpunktur, Trombocyttal, når det er tilgængeligt før initial lumbalpunktur, Koagulationsundersøgelsesrapporten, hvis tilgængelig, før indledende lumbalpunktur og gentagen lumbalpunktur, Fuldblodsglukose målt med glucometer før den indledende LP.

Parametre målt i den indledende lumbalpunktur

o Ukorrigeret og korrigeret WBC-tal: Celler blev talt ved hjælp af to metoder. Den ene var i Neubauer-kammeret inden for 30 minutter efter at have udført en LP. 60 μL CSF blev delt i 2 Eppendorf-rør, mærket A og B. 27 μL CSF i det første Eppendorf-rør, dvs. mærket A, blev fortyndet med Methylene Blue ved hjælp af laboratoriestandardmikropipetter og blev brugt til at oplade kammeret. Celletælling af både WBC og RBC blev udført som standardprocedure.

Et andet 27 μL CSF fra Eppendorf-rør mærket B blev fortyndet ved hjælp af 3 μL Turks væske med sammensat af ensianviolet og iseddike. Tyrkens væske lyser i det væsentlige røde blodlegemer. Herefter oplades den ene side af kammeret, og WBC'er beregnes i de lysegrå firkanter (n). WBC-tal pr. mikroliter = n x 25/9. Til RBC-tælling - 3 μL methylenblåt blev tilsat til 27 μL CSF for at lave 30 μL. Den ene side af kammeret blev opladet, og RBC'er blev talt på de mørkegrå firkanter (n). De samlede røde blodlegemer talt pr. mikroliter = n x 500/9. Som nævnt blev WBC'er og RBC'er også talt i automatiserede maskiner, der var tilgængelige i det primære hæmatologiske laboratorium såvel som i nødlaboratoriet. Den fuldt automatiserede maskinanalysator er Sysmex XN-1000 (Sysmex-Kobe, Japan). XN-seriens analysator har forskningstilstand, som bruger fluorescensflowcytometri og impedansmålinger til at tælle antallet af WBC'er og RBC'er i CSF. For at måle RBC'er blev både den optiske (for lavere koncentrationsområder) og impedans (for højere koncentration) teknikker brugt. I WBC Differential Fluorescence-kanalen er de totale WBC og differentielle WBC-tal baseret på flowcytometrimålinger (f.eks. sidespredning, fremadspredning og DNA/RNA-fluorescens). Før analyse ved hjælp af XN hsA-forskningstilstanden krævede prøven ingen forberedelse.

Glucosekoncentration - Glucosekoncentration i CSF blev estimeret ved hjælp af en kolorimetribaseret metode efter enzymatisk oxidation i nærvær af glucoseoxidase, men nedbrød ikke proteinet. Hydrogenperoxidet, der produceres under reaktionen, reagerer med phenol og 4-aminophenazon og danner et rødviolet quiononiminfarvestof, der fungerer som en indikator. Intensiteten af ​​den farve, der produceres, er direkte proportional med glukosekoncentrationen og måles ved en bølgelængde på 505 nm. Maskinmodellen er Adiva 1800 fra Siemens.

Proteinkoncentration - Dette er også en kvantitativ bestemmelse ved en fotometrisk farvetest udført i en Beckman Coulter-analysator. Pyrogallolrød kombineres med molybdat for at danne et rødt kompleks med maksimal absorption ved en bølgelængde på 470 nm. Assayet er baseret på den skiftabsorption, der opstår, når pyrogallolrødt-molybdatkomplekset binder basiske aminosyregrupper i proteinmolekyler. Et blålilla kompleks dannes med en maksimal absorbans ved en bølgelængde på 600 nm. Absorbansen af ​​dette kompleks er direkte proportional med proteinkoncentrationen i prøven.

Procalcitoninkoncentration - CSF procalcitonin blev bestemt under anvendelse af en to-trins sandwich elektrokemiluminescens immunoassay under anvendelse af biotin-mærket procalcitonin-specifikt antistof og et monoklonalt procalcitonin-specifikt antistof mærket med et Ruthenium-kompleks (Roche Diagnostics, Tyskland). 200 μL af CSF-prøven blev inkuberet ved 37 grader C med de Biotin- og Ruthenium-mærkede anti-procalcitonin-antistoffer. I den anden inkubation blev streptavidin-coatede anti-mikropartikler tilsat, som binder komplekset via biotin-streptavidin-interaktionen. Reaktionsblandingen aspireres ind i en målecelle, hvor mikropartikler indfanges magnetisk på overfladen af ​​elektroden. Ubundne stoffer fjernes ved vask, og ved påføring af en spænding til elektroden ville der blive induceret kemiluminescens, som måles med en fotomultiplikator. Måleområdet for analysen er 2 ng/dl - 10000 ng/dl med en funktionel følsomhed på 6 ng/dl og analytisk følsomhed på 2 ng/dl.

Gramfarvning af traumatisk lumbalpunktur Kultur og følsomhed af traumatisk lumbalpunktur I henhold til enhedspolitikken blev CSF-celletælling udført inden for 30 minutter efter LP i mikroskopet i NICU sidelaboratoriet af personale, der var uddannet i CSF-celletælling. Dette blev gjort for at undgå degeneration af hvide blodlegemer og røde blodlegemer og fald i antallet af hvide blodlegemer på grund af forsinkelse i analysen.

RANDOMISERINGSSEKVENS Kvalificerede forsøgspersoner blev tilmeldt inden for mindre end 24 timer efter den indledende LP. En blokrandomiseringssekvens blev genereret fra webstedet www.randomization.com. Permuterede, lige numre, tilfældigt varierende blokstørrelser med et tildelingsforhold på 1:1 blev brugt i denne undersøgelse.

ETISK KOMMITTÉ GODKENDELSE Undersøgelsen blev godkendt af The Institutional Ethics Committee of PGIMER, Chandigarh (INT/IEC/2019/000557) EFTER-RANDOMISERING EXCLUSIONS Nævnt andetsteds FORBJULLING AF TILDELING Den tilfældige tildelingssekvens blev skjult ved hjælp af en forseglet antal, som indeholdt slyngede numre. et papir, der nævner en gruppe af randomisering. Efter tilmeldingen blev patientens navn skrevet på kuverten. Først efter at have skrevet navnet blev konvolutten revet i stykker, og det tildelte indgreb inde i konvolutten blev efterfølgende implementeret.

INTERVENTIONSGRUPPER Forsøgspersonerne blev tilfældigt fordelt i 2 grupper. En gruppe bestod af patienter, hvor en gentagelse af LP blev udført 24 timer efter den indledende traumatiske LP. Den 2. gruppe bestod af patienter, hvor LP blev gentaget 48 timer efter den initiale traumatiske LP.

BLINDING Det var ikke muligt at blinde læger og sygeplejersker, der arbejdede på NICU. Mikrobiologi, hæmatologi og biokemi laboratoriepersonale blev imidlertid blindet for gruppen af ​​tildeling.

RESULTATER MÅLT I GENTAGET LP:

Blodsukker, før du laver LP, om CSF-prøven er opnået, CSF-prøve: om det er ærligt blod, synligt blodfarvet, mikrotraumatisk eller ikke-traumatisk, CSF RBC-tal, CSF WBC-tal (ukorrigeret og korrigeret), CSF-glukose, CSF-protein, CSF Gramfarvning, kultur og følsomhed. I lighed med den første LP blev CSF-celletælling udført inden for 30 minutter efter LP i mikroskopet i NICU sidelaboratoriet af personale, der var uddannet i CSF-celletælling.

REFERENCESTANDARD Absolut meningitis CSF-kultur og/eller gram-farve positiv Sandsynlig meningitis CSF procalcitonin (PCT) positiv. For at definere CSF PCT positiv tog vi en cut-off på 33 ng/dL eller mere. Dette var baseret på undersøgelsen af ​​Reshi et al.(18). Undersøgelsen blev udført på neonatalintensiv afdeling på afdelingen for neonatologi og pædiatri på SKIMS, Srinagar, over en periode på 2 år (januar 2014 til december 2015). Undersøgelsen var en prospektiv undersøgelse, der omfattede spædbørn 28 dage gamle, som kvalificerede LP som en del af sepsis-oparbejdning. De definerede traumatisk lumbalpunktur som en CSF-prøve med ⩾500 røde blodlegemer/mm3, og justeringer af leukocyttal blev udført ved et gennemsnitligt forhold på 500 røde blodlegemer til 1 hvide blodlegemer. Diagnosen bakteriel meningitis blev stillet hos nyfødte med sepsis med enten positiv CSF og/eller blodkultur eller positiv gramfarvning. De udelukkede spædbørn, der var mere end 28 dage gamle eller nyfødte, der havde modtaget antibiotika før hospitalsindlæggelse, nyfødte, der for nylig havde gennemgået en hjerneoperation, hvis et andet infektionsfokus var til stede ud over meningitis eller viral meningitis (herpes simplex-virus). Efter eksklusionskriterier blev undersøgelsen afsluttet på 168 nyfødte. De observerede ved en værdi på 0,33 ng/ml, at CSF PCT har en sensitivitet på 92 %, en specificitet på 87 %, en positiv prædiktiv værdi (PPV) på 85,2 % og en negativ prædiktiv værdi (NPV) på 93 %. Vi i vores undersøgelse inkluderede ikke andre CSF-konventionelle parametre for sandsynlig meningitis, såsom CSF WBC, CSF Sugar og CSF Protein til definitionen af ​​sandsynlig meningitis, fordi vi havde til hensigt at studere disse tests som indekstest, og de kunne derfor ikke også være en del af referencestandarden.

SAMMENLIGNING AF RESULTATMÅL Nævnt andetsteds