Toista ristiselänpunktio 24-vuotiaana vs. 48 tuntia traumaattisen ristiselänpunktion jälkeen vastasyntyneillä

TUTKIMUSSUUNNITTELU Avoin satunnaistettu kontrollikoe, jossa kerrotaan ja estetään. OPINTOJEN ASETUS Lääketieteen koulutuksen ja tutkimuksen instituutin vastasyntyneiden ja vastasyntyneiden päivystysyksikkö (PGIMER).

Edellinen on tason 3 vastasyntyneiden tehohoitoyksikkö (NICU). OPINTAKAUSI Mainittu muualla KELPOISUUSPERUSTEET Mainittu muualla SUOSTUMUS Vanhemman tietolomake toimitettiin. Tietoinen kirjallinen suostumus saatiin potilaan vanhemmilta, minkä jälkeen koehenkilöt otettiin mukaan tutkimukseen. Suostumus sisälsi tiedot menettelystä ja siihen liittyvästä tutkimuksesta. Se sisälsi myös toimenpiteeseen ja sen jälkeen liittyvät riskitekijät. Kaikki koehenkilöt otettiin mukaan saatuaan tahallisen suostumuksen vastaavilta vanhemmilta.

MENETTELY Rekisteröinnin jälkeinen korjaamaton valkosolu (WBC), korjattu valkosolujen määrä, punaisten verisolujen (RBC) määrä, glukoosipitoisuus, proteiinipitoisuus, CSF:n prokalsitoniinipitoisuus, Gram-värjäys ja viljely sekä mikro-organismin herkkyys.

LP:n jälkeen koehenkilö satunnaistettiin ja toistuva LP suoritettiin joko 24 tunnin tai 48 tunnin kuluttua, ja korjaamatonta valkosolujen määrää, korjattua valkosolujen määrää, punasolujen määrää, glukoosipitoisuutta, proteiinipitoisuutta, Gram-värjäystä ja mikro-organismin viljelmää ja herkkyyttä tutkittiin.

PERUSPARAMETRIT Raskaus, Syntymäpaino, Sukupuoli, Synnytyksen jälkeinen ikä, Nykyinen paino, Alkuperäisen lannepunktion indikaatio vastasyntyneellä, Ensimmäisen lannepunktion tekevän henkilön ikätaso, Verihiutalemäärä, mikäli saatavilla ennen ensimmäistä lannepunktiota, Hyytymistutkimusraportti, jos saatavilla, ennen ensimmäistä lannepunktiota ja toista lannepunktiota, Kokoveren glukoosi mitattu glukometrillä ennen ensimmäistä LP:tä.

Alkuperäisessä lannepunktiossa mitatut parametrit

o Korjaamaton ja korjattu valkosolujen määrä: Solut laskettiin kahdella menetelmällä. Yksi oli Neubauer-kammiossa 30 minuutin sisällä LP:n esittämisestä. 60 µl CSF:ää jaettiin 2 Eppendorf-putkeen, jotka oli merkitty A:lla ja B:llä. 27 µl CSF:ää ensimmäisessä Eppendorf-putkessa eli A:lla laimennettiin metyleenisinisellä käyttäen laboratorion standardimikropipettejä ja käytettiin kammion lataamiseen. Sekä valkosolujen että punasolujen solumäärä suoritettiin standardimenettelynä.

Toinen 27 µl CSF Eppendorf-putkesta, joka oli merkitty B:llä, laimennettiin käyttämällä 3 µl Turkin nestettä, joka koostui Gentian Violetista ja jääetikkaasta. Turkin neste olennaisesti hajottaa punasolut. Tämän jälkeen kammion toinen puoli latautuu ja valkosolut lasketaan vaaleanharmaissa neliöissä (n). Valkosolujen määrä mikrolitraa kohti = n x 25/9. Punasolumäärää varten - 3 µl metyleenisinistä lisättiin 27 µl:aan CSF:ää 30 µl:n saamiseksi. Kammion toinen puoli ladattiin ja punasolut laskettiin tummanharmaista neliöistä (n). Laskettu punasolujen kokonaismäärä mikrolitraa kohti = n x 500/9. Kuten mainittiin, valkosolut ja punasolut laskettiin myös automaattisissa laitteissa, joita oli saatavilla päähematologian laboratoriossa sekä hätälaboratoriossa. Täysin automatisoitu koneanalysaattori on Sysmex XN-1000 (Sysmex-Kobe, Japani). XN-sarjan analysaattorissa on tutkimustila, joka käyttää fluoresenssivirtaussytometriaa ja impedanssimittauksia valkosolujen ja punasolujen määrän laskemiseen CSF:ssä. Punasolujen mittaamiseen käytettiin sekä optista (pienemmille pitoisuusalueille) että impedanssille (suuremmille pitoisuuksille) tekniikoita. WBC-differentiaalifluoresenssikanavassa valkosolujen kokonaismäärä ja differentiaalinen valkosolujen määrä perustuu virtaussytometrian mittauksiin (esim. sivusironta, eteenpäinsironta ja DNA/RNA-fluoresenssi). Ennen analyysiä XN hsA -tutkimusmoodilla näyte ei vaatinut esikäsittelyä.

Glukoosikonsentraatio – Glukoosikonsentraatio CSF:ssä arvioitiin kolorimetriaan perustuvalla menetelmällä entsymaattisen hapetuksen jälkeen glukoosioksidaasin läsnä ollessa, mutta se ei hajottanut proteiinia. Reaktion aikana syntyvä vetyperoksidi reagoi fenolin ja 4-aminofenatsonin kanssa muodostaen punaisen violetin kinonimiinivärin, joka toimii indikaattorina. Syntyneen värin intensiteetti on suoraan verrannollinen glukoosipitoisuuteen ja mitataan aallonpituudella 505 nm. Konemalli on Siemensin Adiva 1800.

Proteiinipitoisuus – Tämä on myös kvantitatiivinen määritys fotometrisellä väritestillä, joka suoritetaan Beckman Coulter -analysaattorilla. Pyrogallolipunainen yhdistetään molybdaatin kanssa punaisen kompleksin muodostamiseksi, jonka suurin absorptio aallonpituudella 470 nm. Määritys perustuu siirtymäabsorptioon, joka tapahtuu, kun pyrogallolipuna-molybdaattikompleksi sitoo proteiinimolekyylien emäksisiä aminohapporyhmiä. Muodostuu sininen violetti kompleksi, jonka suurin absorbanssi aallonpituudella 600 nm. Tämän kompleksin absorbanssi on suoraan verrannollinen näytteen proteiinipitoisuuteen.

Prokalsitoniinipitoisuus - CSF:n prokalsitoniini määritettiin käyttämällä kaksivaiheista kerroselektrokemiluminesenssi-immunomääritystä käyttämällä biotiinileimattua prokalsitoniinispesifistä vasta-ainetta ja monoklonaalista prokalsitoniinispesifistä vasta-ainetta, joka oli leimattu ruteenikompleksilla (Roche Diagnostics, Saksa). 200 µl CSF-näytettä inkuboitiin 37 asteessa biotiinilla ja ruteenilla leimattujen anti-prokalsitoniinivasta-aineiden kanssa. Toisessa inkubaatiossa lisättiin streptavidiinilla päällystettyjä antimikrohiukkasia, jotka sitovat kompleksin biotiini-streptavidiini-vuorovaikutuksen kautta. Reaktioseos imetään mittauskennoon, jossa mikropartikkelit siepataan magneettisesti elektrodin pinnalle. Sitoutumattomat aineet poistetaan pesemällä, ja kun elektrodiin kohdistetaan jännite, indusoituisi kemiluminesenssi, joka mitataan fotomonistimella. Määrityksen mittausalue on 2 ng/dl - 10 000 ng/dl, toiminnallinen herkkyys 6 ng/dl ja analyyttinen herkkyys 2 ng/dl.

Traumaattisen lannepunktion Gram-värjäys Traumaattisen lannepunktion viljely ja herkkyys Yksikkökäytännön mukaisesti CSF-solujen määrään koulutettu henkilöstö suoritti CSF-solujen määrän 30 minuutin sisällä LP:stä NICU-sivulaboratorion mikroskoopissa. Tämä tehtiin valkosolujen ja punasolujen rappeutumisen ja valkosolujen määrän laskun välttämiseksi analyysin viivästymisen vuoksi.

SATUNNISTUSJÄRJESTELMÄ Tukikelpoiset koehenkilöt otettiin mukaan alle 24 tunnin kuluessa alkuperäisestä LP:stä. Lohkosatunnaistamissekvenssi luotiin verkkosivustolta www.randomization.com. Tässä tutkimuksessa käytettiin permutoituja, parillisia, satunnaisesti vaihtelevia lohkokokoja 1:1-allokaatiosuhteella.

ETIIKKAKOMITEEN HYVÄKSYNTÄ Tutkimuksen hyväksyi Institutional Ethics Committee of PGIMER, Chandigarh (INT/IEC/2019/000557) SATUNNISTUKSEN JÄLKEISET POIKKEUKSET Mainittu muualla. MYÖNTÄMISEN SILITYS Satunnaisallokointisekvenssi, joka oli piilotettu läpinäkyvästi sinetöidyllä numerolla. paperi, jossa mainitaan satunnaistuksen ryhmä. Ilmoittautumisen jälkeen kirjekuoreen kirjoitettiin potilaan nimi. Vasta nimen kirjoittamisen jälkeen kirjekuori revittiin ja kirjekuoren sisällä kohdistettu interventio toteutettiin myöhemmin.

INTERVENTIÖRYHMÄT Koehenkilöt jaettiin satunnaisesti kahteen ryhmään. Yksi ryhmä koostui potilaista, joille toistuva LP tehtiin 24 tuntia alkuperäisen traumaattisen LP:n jälkeen. Toinen ryhmä koostui potilaista, joille LP toistettiin 48 tuntia alkuperäisen traumaattisen LP:n jälkeen.

SOKOUTUMINEN Niculassa työskenteleviä lääkäreitä ja sairaanhoitajia ei ollut mahdollista sokeuttaa. Mikrobiologian, hematologian ja biokemian laboratorion henkilökunta oli kuitenkin sokeutunut allokaatioryhmälle.

TULOKSET MITATTUNA TOISTUVASSA LP:ssä:

Verensokeri ennen LP:tä, onko otettu CSF-näyte, CSF-näyte: onko puhdasta verta, näkyvästi veren väristä, mikrotraumaattista tai ei-traumaattista, CSF:n punasolujen määrä, CSF:n valkosolujen määrä (korjaamaton ja korjattu), CSF-glukoosi, CSF-proteiini, CSF Gramin tahra, viljely ja herkkyys. Ensimmäisen LP:n tapaan CSF-solujen määrään koulutettu henkilökunta suoritti CSF-solumäärän 30 minuutin sisällä LP:stä mikroskoopissa NICU:n sivulaboratoriossa.

VIITESTANDARDI Selkeä aivokalvontulehdus CSF-viljelmä ja/tai gramvärjäyspositiivinen Todennäköinen aivokalvontulehdus CSF-prokalsitoniini (PCT) -positiivinen. CSF-PCT-positiivisen määrittämiseksi otimme 33 ng/dl:n tai suuremman rajan. Tämä perustui Reshin et al:n tutkimukseen(18). Tutkimus suoritettiin SKIMS:n vastasyntyneiden tehohoitoyksikössä Neonatology and Pediatrics -osastolla Srinagarissa 2 vuoden ajan (tammikuusta 2014 joulukuuhun 2015). Tutkimus oli prospektiivinen tutkimus, joka sisälsi 28 päivän ikäisiä lapsia, jotka hyväksyivät LP:n osaksi sepsiksen hoitoa. He määrittelivät traumaattisen lannepunktion CSF-näytteeksi, jonka ⩾500 punasolua/mm3, ja leukosyyttien määrän säädöt tehtiin keskimäärin 500 punasolua ja 1 valkosolua kohti. Bakteeriperäinen aivokalvontulehdus diagnosoitiin vastasyntyneillä, joilla oli sepsis joko positiivisella CSF- ja/tai veriviljelyllä tai positiivisella gramvärjäyksellä. Ne eivät sisällä yli 28 päivän ikäisiä imeväisiä tai vastasyntyneitä, jotka olivat saaneet antibiootteja ennen sairaalahoitoa, ja vastasyntyneet, joille oli tehty äskettäin aivoleikkaus, jos aivokalvontulehduksen tai virusperäisen aivokalvontulehduksen (herpes simplex -virus) lisäksi oli olemassa toinen infektiokohta. Poissulkemiskriteerit Tutkimus päätettiin 168 vastasyntyneellä. He havaitsivat, että arvolla 0,33 ng/ml, CSF PCT:n herkkyys on 92 %, spesifisyys 87 %, positiivinen ennustearvo (PPV) 85,2 % ja negatiivinen ennustearvo (NPV) 93 %. Emme sisällyttäneet tutkimukseemme muita CSF:n tavanomaisia ​​parametreja todennäköiselle aivokalvontulehdukselle, kuten CSF WBC, CSF Sugar ja CSF Protein todennäköisen aivokalvontulehduksen määrittelyyn, koska aioimme tutkia näitä testejä indeksitesteinä, joten ne eivät voineet myös olla osa viitestandardia.

TULOSTOIMIEN VERTAILU Mainittu muualla