Gjenta lumbalpunksjon ved 24 versus 48 timer etter traumatisk lumbalpunksjon hos nyfødte

STUDIEDESIGN En åpen randomisert kontrollprøve, med stratifisering og blokkering. STUDIEINNSTILLING Newborn-enheten og Neonatal-enheten for Pediatric Emergency ved Postgraduate Institute of Medical Education and Research (PGIMER).

Førstnevnte er en nivå 3 neonatal intensivavdeling (NICU). STUDIEPERIODE Nevnt annet sted KVALIFIKASJONSKRITERIER Nevnt andre steder SAMTYKKE Et overordnet informasjonsark ble levert. Informert skriftlig samtykke ble innhentet fra foreldrene til pasienten etter hvilke forsøkspersoner som ble inkludert i studien. Samtykket inneholdt informasjon om prosedyren og studie knyttet til den. Den inkluderte også risikofaktorene knyttet til og etter inngrepet. Alle forsøkspersonene ble inkludert etter å ha innhentet forsettlig samtykke fra respektive foreldre.

PROSEDYRE Etter registrering ukorrigert hvite blodlegemer (WBC), korrigert antall hvite blodlegemer, antall røde blodlegemer (RBC), Glukosekonsentrasjon, Proteinkonsentrasjon, CSF Procalcitonin-konsentrasjon, Gramfarging og kultur og følsomhet av mikroorganismer ble utført.

Etter LP ble forsøkspersonen randomisert og gjentatt LP ble utført enten etter 24 timer eller 48 timer, og ukorrigert WBC, korrigert WBC-telling, RBC-telling, Glukosekonsentrasjon, Proteinkonsentrasjon, Gramfarging og Kultur og sensitivitet til mikroorganismer ble studert.

BASELINE PARAMETRE Gestasjon, Fødselsvekt, Kjønn, Postnatal alder, Nåværende vekt, Indikasjon for initial lumbalpunksjon hos nyfødt, Ansiennitetsnivå for personen som utfører den initiale lumbalpunksjonen, Blodplateantall når tilgjengelig før initial lumbalpunksjon, Koagulasjonsstudierapporten, hvis tilgjengelig, før innledende lumbalpunksjon og gjentatt lumbalpunksjon, Fullblodsukker målt med glukometer før initial LP.

Parametre målt i den innledende lumbalpunksjonen

o Ukorrigert og korrigert WBC-telling: Celler ble talt ved hjelp av to metoder. Den ene var i Neubauer-kammeret innen 30 minutter etter fremføring av en LP. 60 μL CSF ble delt i 2 Eppendorf-rør, merket A og B. 27 μL CSF i det første Eppendorf-røret, dvs. merket A ble fortynnet med Methylene Blue ved bruk av laboratoriestandard mikropipetter og ble brukt til å lade kammeret. Celletall av både WBC og RBC ble utført som standard prosedyre.

Ytterligere 27 μL CSF fra Eppendorf-rør merket B ble fortynnet med 3 μL Turks væske med sammensatt av Gentian Violet og Iseddik. Tyrkens væske lyserer i hovedsak RBC-ene. Deretter lades den ene siden av kammeret og WBC-er beregnes i de lysegrå rutene (n). Antall WBC per mikroliter = n x 25/9. For RBC-telling - 3 μL metylenblått ble tilsatt 27 μL CSF for å lage 30 μL. Den ene siden av kammeret ble ladet og røde blodlegemer ble talt på de mørkegrå rutene (n). Totalt RBC talt per mikroliter = n x 500/9. Som nevnt ble hvite blodlegemer og røde blodlegemer også talt i automatiserte maskiner tilgjengelig i hovedhematologilaboratoriet så vel som akuttlaboratoriet. Den helautomatiske maskinanalysatoren er Sysmex XN-1000 (Sysmex-Kobe, Japan). XN-seriens analysator har forskningsmodus som bruker fluorescensstrømningscytometri og impedansmålinger for å telle antall WBC og RBC i CSF. For å måle RBC ble både optiske (for lavere konsentrasjonsområder) og impedans (for høyere konsentrasjon) teknikker brukt. I WBC Differential Fluorescence-kanalen er de totale WBC og differensielle WBC-tellinger basert på flowcytometrimålinger (f.eks. sidespredning, foroverspredning og DNA/RNA-fluorescens). Før analyse ved bruk av XN hsA-forskningsmodus, krevde ikke prøven noen forberedelse.

Glukosekonsentrasjon - Glukosekonsentrasjon i CSF ble estimert ved hjelp av en kolorimetribasert metode etter enzymatisk oksidasjon i nærvær av glukoseoksidase, men brøt ikke ned proteinet. Hydrogenperoksidet som produseres under reaksjonen reagerer med fenol og 4-aminofenazon for å danne et rødfiolett quiononiminfargestoff som fungerer som en indikator. Intensiteten til fargen som produseres er direkte proporsjonal med glukosekonsentrasjonen og måles ved en bølgelengde på 505 nm. Maskinmodellen er Adiva 1800 fra Siemens.

Proteinkonsentrasjon- Dette er også en kvantitativ bestemmelse ved en fotometrisk fargetest utført i en Beckman Coulter-analysator. Pyrogallolrød kombineres med molybdat for å danne et rødt kompleks med maksimal absorpsjon ved en bølgelengde på 470 nm. Analysen er basert på skiftabsorpsjonen som oppstår når pyrogallolrød-molybdatkomplekset binder grunnleggende aminosyregrupper i proteinmolekyler. Et blålilla kompleks dannes med maksimal absorbans ved en bølgelengde på 600 nm. Absorbansen til dette komplekset er direkte proporsjonal med proteinkonsentrasjonen i prøven.

Prokalsitoninkonsentrasjon - CSF prokalsitonin ble bestemt ved å bruke en totrinns sandwich elektrokjemiluminescens immunoassay ved bruk av biotinmerket prokalsitonin spesifikt antistoff og et monoklonalt prokalsitonin spesifikt antistoff merket med et Ruthenium kompleks (Roche Diagnostics, Tyskland). 200 μL av CSF-prøven ble inkubert ved 37 grader C med Biotin- og Ruthenium-merkede anti-prokalsitonin-antistoffer. I den andre inkubasjonen ble streptavidinbelagte antimikropartikler tilsatt som binder komplekset via biotin-streptavidin-interaksjonen. Reaksjonsblandingen aspireres inn i en målecelle hvor mikropartikler fanges magnetisk på overflaten av elektroden. Ubundne stoffer fjernes ved vasking og ved påføring av en spenning til elektroden vil kjemiluminescens bli indusert som måles med en fotomultiplikator. Måleområdet for analysen er 2 ng/dl - 10000 ng/dl med en funksjonell sensitivitet på 6ng/dl og analytisk sensitivitet på 2 ng/dl.

Gramfarging av traumatisk lumbalpunksjon Kultur og følsomhet ved traumatisk lumbalpunksjon I henhold til enhetspolicy ble telling av CSF-celler utført innen 30 minutter etter LP i mikroskopet i NICU-sidelaboratoriet av personell som var opplært i CSF-celletall. Dette ble gjort for å unngå degenerasjon av hvite blodlegemer og røde blodlegemer og fall i antall hvite blodlegemer på grunn av forsinkelser i analysen.

RANDOMISERINGSSEKVENS Kvalifiserte forsøkspersoner ble registrert innen mindre enn 24 timer etter den første LP. En blokkrandomiseringssekvens ble generert fra nettstedet www.randomization.com. Permuterte, partalls, tilfeldig varierende blokkstørrelser med et tildelingsforhold på 1:1 ble brukt i denne studien.

GODKJENNING AV ETISK KOMITÉ Studien ble godkjent av The Institutional Ethics Committee of PGIMER, Chandigarh (INT/IEC/2019/000557) UTSLUTNINGER ETTER RANDOMISERING Nevnt andre steder SKJULLING AV TILDELING Den tilfeldige tildelingssekvensen ble skjult ved bruk av serietilknyttede nummer en artikkel, som nevner en gruppe av randomisering. Etter påmeldingen ble navnet på pasienten skrevet på konvolutten. Først etter å ha skrevet navnet ble konvolutten revet og den tildelte intervensjonen inne i konvolutten ble implementert senere.

INTERVENSJONSGRUPPER Forsøkspersonene ble tilfeldig fordelt i 2 grupper. En gruppe besto av pasienter hvor en gjentatt LP ble utført 24 timer etter den initiale traumatiske LP. Den andre gruppen besto av pasienter hvor LP ble gjentatt 48 timer etter den initiale traumatiske LP.

BLINDING Det var ikke mulig å blinde leger og sykepleiere som jobbet på intensivavdelingen. Imidlertid ble laboratoriepersonell i mikrobiologi, hematologi og biokjemi blindet for gruppen av tildeling.

RESULTATER MÅLT I REPETERENDE LP:

Blodsukker før du utfører LP, om CSF-prøve er oppnådd, CSF-prøve: enten åpent blod, synlig blodfarget, mikrotraumatisk eller ikke-traumatisk, CSF RBC-telling, CSF WBC-telling (ukorrigert og korrigert), CSF-glukose, CSF-protein, CSF Gramflekker, kultur og følsomhet. I likhet med den første LP, ble CSF-celletelling utført innen 30 minutter etter LP i mikroskopet i NICU-sidelaben av personell som var opplært i CSF-celletall.

REFERANSE STANDARD Definitiv meningitt CSF-kultur og/eller gramfargepositiv Sannsynlig meningitt CSF-prokalsitonin (PCT) positiv. For å definere CSF PCT-positiv tok vi et cut-off på 33 ng/dL eller mer. Dette var basert på studien til Reshi et al(18). Studien ble utført på neonatal intensivavdeling ved avdelingen for neonatologi og pediatri ved SKIMS, Srinagar, over en periode på 2 år (januar 2014 til desember 2015). Studien var en prospektiv studie som inkluderte spedbarn 28 dager gamle, som kvalifiserte LP som en del av sepsis-arbeid. De definerte traumatisk lumbalpunksjon som en CSF-prøve med ⩾500 røde blodceller/mm3, og justeringer av leukocytttelling ble gjort med et gjennomsnittlig forhold på 500 røde blodceller til 1 hvite blodlegemer. Diagnosen bakteriell meningitt ble stilt hos nyfødte med sepsis med enten positiv CSF og/eller blodkultur eller positiv gramfarging. De ekskluderte spedbarn som var mer enn 28 dager gamle eller nyfødte som hadde fått antibiotika før sykehusinnleggelse, nyfødte som nylig hadde gjennomgått hjerneoperasjoner hvis et annet infeksjonsfokus var tilstede i tillegg til meningitt eller viral meningitt (herpes simplex-virus). Etter eksklusjonskriterier ble studien avsluttet på 168 nyfødte. De observerte, ved en verdi på 0,33 ng/ml, har CSF PCT en sensitivitet på 92 %, en spesifisitet på 87 %, en positiv prediktiv verdi (PPV) på 85,2 % og en negativ prediktiv verdi (NPV) på 93 %. Vi i vår studie inkluderte ikke andre konvensjonelle parametre for CSF for sannsynlig meningitt, som CSF WBC, CSF Sugar og CSF Protein for definisjonen av sannsynlig meningitt fordi vi hadde til hensikt å studere disse testene som indekstester, og derfor kunne de ikke også være en del av referansestandarden.

SAMMENLIGNING AV RESULTATMÅL Nevnt andre steder