Повторите люмбальную пункцию через 24 часа по сравнению с 48 часами после травматической люмбальной пункции у новорожденных

ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ Открытое рандомизированное контрольное исследование со стратификацией и блокировкой. УЧЕБНЫЕ НАСТРОЙКИ Отделение новорожденных и неонатальное отделение педиатрической неотложной помощи Института последипломного медицинского образования и исследований (PGIMER).

Первый представляет собой отделение интенсивной терапии новорожденных (ОИТН) 3-го уровня. ПЕРИОД ИЗУЧЕНИЯ Упоминается в другом месте КРИТЕРИИ СООТВЕТСТВИЯ Упоминается в другом месте СОГЛАСИЕ Информационный лист для родителей был предоставлен. От родителей пациента было получено информированное письменное согласие, после чего испытуемые были включены в исследование. Согласие включало информацию о процедуре и исследовании, связанном с ней. Он также включал факторы риска, связанные с процедурой и после нее. Все субъекты были включены после получения добровольного согласия от соответствующих родителей.

ПРОЦЕДУРА После регистрации были проведены нескорректированные лейкоциты (WBC), скорректированное количество лейкоцитов, количество эритроцитов, концентрация глюкозы, концентрация белка, концентрация прокальцитонина в спинномозговой жидкости, окраска по Граму, посев и определение чувствительности микроорганизмов.

После LP субъект был рандомизирован, и повторная LP была выполнена либо через 24 часа, либо через 48 часов, и были изучены нескорректированные лейкоциты, скорректированное количество лейкоцитов, количество эритроцитов, концентрация глюкозы, концентрация белка, окраска по Граму и культура и чувствительность микроорганизмов.

ИСХОДНЫЕ ПАРАМЕТРЫ Беременность, Масса тела при рождении, Пол, Постнатальный возраст, Текущий вес, Показания для начальной люмбальной пункции у новорожденного, Уровень стажа человека, выполняющего начальную люмбальную пункцию, Количество тромбоцитов, если доступно до первичной люмбальной пункции, Отчет об исследовании коагуляции, если доступный, перед начальной люмбальной пункцией и повторной люмбальной пункцией, глюкоза цельной крови, измеренная глюкометром до первоначального LP.

Параметры, измеренные при начальной люмбальной пункции

o Нескорректированный и скорректированный подсчет лейкоцитов: Клетки подсчитывались с использованием двух методов. Один был в камере Нойбауэра в течение 30 минут после исполнения LP. 60 мкл спинномозговой жидкости разделяли на 2 пробирки Эппендорфа, обозначенные буквами А и В. 27 мкл спинномозговой жидкости в первой пробирке Эппендорфа, обозначенной буквой А, разбавляли метиленовым синим с использованием лабораторных стандартных микропипеток и использовали для зарядки камеры. Подсчет клеток как лейкоцитов, так и эритроцитов выполняли по стандартной процедуре.

Еще 27 мкл ЦСЖ из пробирки Эппендорфа, обозначенной В, разбавляли 3 мкл жидкости Турка, состоящей из горечавки фиолетовой и ледяной уксусной кислоты. Жидкость Турка по существу лизирует эритроциты. После чего заряжается одна сторона камеры и вычисляются лейкоциты в светло-серых квадратах (n). Количество лейкоцитов на микролитр = n x 25/9. Для подсчета эритроцитов к 27 мкл ЦСЖ добавляли 3 мкл метиленового синего, чтобы получить 30 мкл. Одна сторона камеры была заряжена, и количество эритроцитов было подсчитано на темно-серых квадратах (n). Общее количество эритроцитов, подсчитанное на микролитр = n x 500/9. Как уже упоминалось, лейкоциты и эритроциты также подсчитывались на автоматических машинах, имеющихся в Главной гематологической лаборатории, а также в лаборатории неотложной помощи. Полностью автоматизированным машинным анализатором является Sysmex XN-1000 (Sysmex-Kobe, Япония). Анализатор серии XN имеет режим исследования, который использует флуоресцентную проточную цитометрию и измерения импеданса для подсчета количества лейкоцитов и эритроцитов в спинномозговой жидкости. Для измерения эритроцитов использовали как оптический (для более низких диапазонов концентраций), так и импедансный (для более высоких концентраций) методы. В канале дифференциальной флуоресценции лейкоцитов общее количество лейкоцитов и дифференциальное количество лейкоцитов основаны на измерениях проточной цитометрии (например, боковое рассеяние, прямое рассеяние и флуоресценция ДНК/РНК). Перед анализом в режиме исследования XN hsA образец не требовал никакой подготовки.

Концентрация глюкозы. Концентрацию глюкозы в спинномозговой жидкости оценивали с использованием метода, основанного на колориметрии, после ферментативного окисления в присутствии глюкозооксидазы, но без расщепления белка. Пероксид водорода, образующийся в ходе реакции, реагирует с фенолом и 4-аминофеназоном с образованием красно-фиолетового хиониминового красителя, который действует как индикатор. Интенсивность полученного цвета прямо пропорциональна концентрации глюкозы и измеряется при длине волны 505 нм. Модель машины Adiva 1800 от Siemens.

Концентрация белка. Это также количественное определение с помощью фотометрического цветового теста, проводимого на анализаторе Beckman Coulter. Пирогаллоловый красный соединяется с молибдатом с образованием красного комплекса с максимальным поглощением при длине волны 470 нм. Анализ основан на смещении поглощения, которое происходит, когда комплекс пирогаллоловый красный-молибдат связывает основные аминокислотные группы белковых молекул. Образуется сине-фиолетовый комплекс с максимальным поглощением при длине волны 600 нм. Поглощение этого комплекса прямо пропорционально концентрации белка в образце.

Концентрацию прокальцитонина - прокальцитонин в спинномозговой жидкости определяли с помощью двухэтапного сэндвич-электрохемилюминесцентного иммуноанализа с использованием меченных биотином прокальцитонин-специфических антител и моноклональных прокальцитонин-специфических антител, меченных комплексом рутения (Roche Diagnostics, Германия). 200 мкл образца спинномозговой жидкости инкубировали при 37°С с меченными биотином и рутением антителами против прокальцитонина. При второй инкубации добавляли покрытые стрептавидином антимикрочастицы, которые связывают комплекс посредством взаимодействия биотин-стрептавидин. Реакционная смесь всасывается в измерительную ячейку, где микрочастицы магнитно захватываются на поверхность электрода. Несвязанные вещества удаляются промывкой, и при подаче напряжения на электрод индуцируется хемилюминесценция, которая измеряется фотоумножителем. Диапазон измерения анализа составляет от 2 нг/дл до 10000 нг/дл с функциональной чувствительностью 6 нг/дл и аналитической чувствительностью 2 нг/дл.

Окраска по Граму после травматической люмбальной пункции Посев и чувствительность после травматической люмбальной пункции В соответствии с политикой отделения подсчет клеток спинномозговой жидкости проводился в течение 30 минут после люмбальной пункции под микроскопом в лаборатории отделения интенсивной терапии интенсивной терапии персоналом, обученным подсчету клеток спинномозговой жидкости. Это было сделано, чтобы избежать дегенерации лейкоцитов и эритроцитов и снижения количества лейкоцитов из-за задержки анализа.

ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ РАНДОМИЗАЦИИ Подходящие субъекты были включены менее чем через 24 часа после первоначального LP. Последовательность рандомизации блоков была сгенерирована с веб-сайта www.randomization.com. В этом исследовании использовались переставленные, четные, случайно меняющиеся размеры блоков с соотношением распределения 1: 1.

УТВЕРЖДЕНИЕ КОМИТЕТА ПО ЭТИКЕ Исследование было одобрено Институциональным комитетом по этике PGIMER, Чандигарх (INT/IEC/2019/000557) ИСКЛЮЧЕНИЯ ПОСЛЕ РАНДОМИЗАЦИИ Упоминается в другом месте документ, упоминающий группу рандомизации. После регистрации на конверте было написано имя пациента. Только после написания имени конверт был разорван, а выделенное вмешательство внутри конверта реализовано впоследствии.

ГРУППЫ ВМЕШАТЕЛЬСТВА Субъекты были случайным образом распределены на 2 группы. Одну группу составили пациенты, которым повторная ЛП была проведена через 24 часа после первоначальной травматической ЛП. 2-ю группу составили пациенты, у которых ЛП повторили через 48 часов после исходной травматической ЛП.

ОСЛЕПАНИЕ Ослепить врачей и медсестер, работающих в отделении интенсивной терапии, не представлялось возможным. Однако сотрудники лабораторий микробиологии, гематологии и биохимии не знали о группе распределения.

РЕЗУЛЬТАТЫ, ИЗМЕРЯЕМЫЕ В ПОВТОРНОЙ LP:

Глюкоза крови перед выполнением LP, получен ли образец СМЖ, образец СМЖ: явная ли кровь, явно окрашенная кровью, микротравматическая или нетравматическая, количество эритроцитов в СМЖ, количество лейкоцитов в СМЖ (нескорректированное и скорректированное), глюкоза СМЖ, белок СМЖ, СМЖ Окраска по Граму, посев и чувствительность. Подобно первому LP, подсчет клеток спинномозговой жидкости был выполнен в течение 30 минут после LP под микроскопом в боковой лаборатории отделения интенсивной терапии интенсивной терапии персоналом, обученным подсчету клеток спинномозговой жидкости.

ЭТАЛОННЫЙ СТАНДАРТ Определенный менингит Положительный результат посева СМЖ и/или окрашивания по Граму Вероятный менингит Положительный прокальцитонин (ПКТ) СМЖ. Чтобы определить положительный ПКТ ЦСЖ, мы взяли пороговое значение 33 нг/дл или более. Это было основано на исследовании Reshi et al (18). Исследование проводилось в отделении интенсивной терапии новорожденных отделения неонатологии и педиатрии SKIMS, Шринагар, в течение 2 лет (с января 2014 г. по декабрь 2015 г.). Исследование было проспективным и включало младенцев в возрасте 28 дней, которые квалифицировали LP как часть обследования на сепсис. Они определили травматическую люмбальную пункцию как образец спинномозговой жидкости с ⩾500 эритроцитов/мм3, а корректировка количества лейкоцитов была выполнена при среднем соотношении 500 эритроцитов на 1 лейкоцит. Диагноз бактериального менингита был поставлен у новорожденных с сепсисом либо при положительном результате СМЖ и/или посевах крови, либо при положительном окрашивании по Граму. Они исключали младенцев в возрасте старше 28 дней или новорожденных, получавших антибиотики до госпитализации, новорожденных, перенесших недавнюю операцию на головном мозге, если помимо менингита или вирусного менингита (вирус простого герпеса) присутствовал другой очаг инфекции. По критериям исключения исследование было завершено на 168 новорожденных. Они обнаружили, что при значении 0,33 нг/мл ПКТ СМЖ имеет чувствительность 92%, специфичность 87%, положительную прогностическую ценность (PPV) 85,2% и отрицательную прогностическую ценность (NPV) 93%. Мы в нашем исследовании не включали другие обычные параметры ЦСЖ для вероятного менингита, такие как лейкоциты в ЦСЖ, сахар в ЦСЖ и белок ЦСЖ для определения вероятного менингита, потому что мы намеревались изучить эти тесты как индексные тесты, и, следовательно, они не могли также быть частью эталонного стандарта.

СРАВНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ РЕЗУЛЬТАТОВ Упоминается в другом месте