Ismételje meg a lumbálpunkciót 24 órával szemben a traumás lumbálpunkciót követő 48 órában újszülötteknél

TANULMÁNY TERVEZÉSE Nyílt címke, véletlenszerű kontrollvizsgálat, rétegződéssel és blokkolással. TANULMÁNY BEÁLLÍTÁSA Posztgraduális Orvosi Oktatási és Kutatási Intézet (PGIMER) Újszülöttek és Neonatális Gyermeksürgősségi Osztálya.

Az előbbi egy 3. szintű újszülött intenzív osztály (NICU). TANULMÁNYI IDŐSZAK Máshol megemlítve ALKALMASSÁGI KRITÉRIUMOK Másutt megemlítve BEJELENTKEZÉS A szülői adatlapot biztosítottuk. A beteg szüleitől tájékozott írásos beleegyezést kaptunk, amelyet követően az alanyokat bevontuk a vizsgálatba. A hozzájárulás az eljárásról és az azzal kapcsolatos tanulmányról tájékoztatást tartalmazott. Tartalmazta az eljárással kapcsolatos és azt követő kockázati tényezőket is. Az összes alanyt a megfelelő szülők szándékos beleegyezése után vettük fel.

ELJÁRÁS A beiratkozás után korrigált fehérvérsejt (WBC), korrigált fehérvérsejtszám, vörösvérsejt (RBC) szám, glükózkoncentráció, fehérjekoncentráció, CSF-prokalcitonin-koncentráció, Gram-festés és tenyésztés, valamint a mikroorganizmusok érzékenysége történt.

Az LP után az alanyt randomizálták, és 24 vagy 48 óra elteltével ismételt LP-t végeztek, és tanulmányozták a korrigált fehérvérsejtszámot, a korrigált fehérvérsejtszámot, a vörösvértestek számát, a glükózkoncentrációt, a fehérjekoncentrációt, a Gram-festést, valamint a mikroorganizmusok tenyésztését és érzékenységét.

ALAPVETŐ PARAMÉTEREK Terhesség, születési súly, nem, születés utáni életkor, jelenlegi testsúly, újszülöttkori lumbálpunkció indikációja, a kezdeti lumbálpunkciót végző személy életkora, vérlemezkeszám, ha rendelkezésre áll a kezdeti lumbálpunkció előtt, a véralvadási vizsgálati jelentés, ha elérhető, a kezdeti lumbálpunkció és az ismételt lumbálpunkció előtt, a teljes vércukorszint glükométerrel mérve a kezdeti LP előtt.

A kezdeti lumbálpunkcióban mért paraméterek

o Nem korrigált és korrigált fehérvérsejtszám: A sejteket két módszerrel számoltuk meg. Az egyik a Neubauer-kamrában volt 30 percen belül egy nagylemez előadása után. 60 μl CSF-et osztottak szét 2 Eppendorf-csőben, amelyeket A-val és B-vel jelöltek. 27 μL CSF-et az első Eppendorf-csőben, azaz A-val jelöltük, metilénkékkel hígítottuk laboratóriumi standard mikropipetták segítségével, és a kamra feltöltésére használtuk. Mind a WBC, mind a RBC sejtszámát standard eljárásként végeztük.

Egy másik 27 μL CSF-et a B-vel jelölt Eppendorf-csőből 3 μL Turk-folyadékkal hígítottunk enciánibolyából és jégecetből. A török ​​folyadék lényegében lizálja a vörösvértesteket. Ezt követően a kamra egyik oldala feltöltődik, és a fehérvérsejteket a világosszürke négyzetekben (n) számítják ki. A fehérvérsejtszám mikroliterenként = n x 25/9. A vörösvértestek számának meghatározásához - 3 μL metilénkéket adtunk 27 μl CSF-hez, hogy 30 μl legyen. A kamra egyik oldalát feltöltöttük, és a vörösvértesteket megszámoltuk a sötétszürke négyzeteken (n). A mikroliterenként számolt összes vörösvértest = n x 500/9. Mint említettük, a fehérvérsejteket és a vörösvértesteket a fő hematológiai laborban és a sürgősségi laborban rendelkezésre álló automata gépekben is megszámolták. A teljesen automatizált gépelemző a Sysmex XN-1000 (Sysmex-Kobe, Japán). Az XN sorozatú analizátor kutatási móddal rendelkezik, amely fluoreszcens áramlási citometriát és impedancia méréseket használ a fehérvérsejtek és vörösvértestek számának megszámlálására a cerebrospinalis folyadékban. A vörösvértestek mérésére mind az optikai (alacsonyabb koncentráció-tartományokhoz), mind az impedancia (nagyobb koncentrációkhoz) technikát alkalmaztak. A WBC differenciális fluoreszcencia csatornában a teljes WBC és a differenciális fehérvérsejtek száma áramlási citometriás méréseken alapul (pl. oldalszórás, előrefelé szórás és DNS/RNS fluoreszcencia). Az XN hsA kutatási móddal végzett elemzés előtt a minta nem igényelt semmilyen előkészítést.

Glükózkoncentráció – A CSF glükózkoncentrációját kolorimetriás módszerrel becsülték meg glükóz-oxidáz jelenlétében végzett enzimatikus oxidáció után, de nem bontotta le a fehérjét. A reakció során keletkező hidrogén-peroxid fenollal és 4-amino-fenazonnal reagálva vörös-ibolya quiononimin festéket képez, amely indikátorként működik. A képződött szín intenzitása egyenesen arányos a glükózkoncentrációval, és 505 nm hullámhosszon mérjük. A gép modellje a Siemens Adiva 1800.

Fehérjekoncentráció – ez is egy Beckman Coulter analizátorral végzett fotometriás színteszttel végzett mennyiségi meghatározás. A pirogallolvörös molibdáttal kombinálva vörös komplexet képez, amelynek maximális abszorpciója 470 nm hullámhosszon. A vizsgálat az eltolódáson alapuló abszorpción alapul, amely akkor következik be, amikor a pirogallol-vörös-molibdát komplex megköti a fehérjemolekulák bázikus aminosavcsoportjait. Kék lila komplex képződik, amelynek maximális abszorbanciája 600 nm hullámhosszon. Ennek a komplexnek az abszorbanciája egyenesen arányos a mintában lévő fehérjekoncentrációval.

Prokalcitonin-koncentráció – A prokalcitonint kétlépcsős szendvics elektrokemilumineszcens immunoassay-vel határoztuk meg, biotinnal jelölt prokalcitonin-specifikus antitesttel és egy ruténium-komplexszel jelölt monoklonális prokalcitonin-specifikus antitesttel (Roche Diagnostics, Németország). A CSF-mintából 200 μl-t 37 °C-on biotinnal és ruténiummal jelölt anti-prokalcitonin antitestekkel inkubáltunk. A második inkubáció során sztreptavidinnel bevont antimikrorészecskéket adtunk hozzá, amelyek a biotin-sztreptavidin kölcsönhatáson keresztül megkötik a komplexet. A reakcióelegyet egy mérőcellába szívják, ahol a mikrorészecskéket mágnesesen rögzítik az elektróda felületén. A meg nem kötött anyagokat mosással távolítják el, és az elektródára feszültség hatására kemilumineszcencia indukálódik, amit fotosokszorozóval mérnek. Az assay mérési tartománya 2 ng/dl - 10000 ng/dl, funkcionális érzékenysége 6 ng/dl, analitikai érzékenysége 2 ng/dl.

Traumatikus lumbálpunkció Gram-festése A traumás lumbálpunkció tenyésztése és érzékenysége Az egységszabályoknak megfelelően a CSF-sejtszámot az LP-től számított 30 percen belül végezték el a mikroszkópban a NICU melléklaborjában, a CSF-sejtszámra képzett személyzet segítségével. Ezt azért tették, hogy elkerüljék a fehérvérsejtek és vörösvértestek degenerációját, valamint a fehérvérsejtek számának csökkenését az elemzés késése miatt.

RANDOMISÁCIÓS SZEKVENCIA A jogosult alanyokat a kezdeti LP után kevesebb mint 24 órán belül felvették. A www.randomization.com webhelyről egy blokk randomizációs szekvenciát hoztak létre. Ebben a vizsgálatban permutált, páros számú, véletlenszerűen változó blokkméreteket használtunk 1:1 kiosztási aránnyal.

AZ ETIKAI BIZOTTSÁG JÓVÁHAGYÁSA A tanulmányt a PGIMER, Chandigarh intézményi etikai bizottsága hagyta jóvá (INT/IEC/2019/000557) RANDOMIZÁCIÓ UTÁNI KIZÁRÁSOK Másutt említve AZ ELTÁVOLÍTÁS ELTITKOZÁSA A véletlenszerű kiosztási szekvenciát a véletlenszerű kiosztási szekvencia elrejtve, opcionálisan lezárt sorszámú titkosítással történt egy papír, amely a randomizáció egy csoportját említi. A beiratkozás után a borítékra ráírták a beteg nevét. Csak a név beírása után szakadt fel a boríték, és utólag hajtották végre a borítékon belüli beavatkozást.

BEAVATKOZÁSI CSOPORTOK Az alanyokat véletlenszerűen 2 csoportba osztották. Az egyik csoport olyan betegekből állt, akiknél a kezdeti traumás LP után 24 órával ismételt LP-t végeztek. A 2. csoportba azok a betegek tartoztak, akiknél az LP-t a kezdeti traumás LP után 48 órával megismételték.

VAKÍTÁS A NICU-ban dolgozó orvosokat és nővéreket nem lehetett elvakítani. A mikrobiológiai, hematológiai és biokémiai labor személyzete azonban vak volt az elosztási csoport iránt.

AZ ISMÉTELT LP-BEN MÉRT EREDMÉNYEK:

Vércukorszint LP elvégzése előtt, CSF-minta kapott-e, CSF-minta: tiszta vér, láthatóan vérszínű, mikrotraumás vagy nem traumás, CSF-vvt-szám, CSF-fehérvérsejt-szám (nem korrigált és korrigált), CSF-glükóz, CSF-fehérje, CSF Gram-folt, tenyésztés és érzékenység. Az első LP-hez hasonlóan a CSF-sejtszámot az LP-től számított 30 percen belül végezték el a mikroszkópban a NICU melléklaborjában, a CSF-sejtszámra képzett személyzet segítségével.

REFERENCIA SZABVÁNY Határozott agyhártyagyulladás CSF tenyészet és/vagy Gram festés pozitív Valószínű agyhártyagyulladás CSF prokalcitonin (PCT) pozitív. A CSF PCT-pozitív meghatározásához 33 ng/dl-es vagy nagyobb határértéket vettünk fel. Ez Reshi és munkatársai tanulmányán alapult (18). A vizsgálatot a srinagari SKIMS Neonatológiai és Gyermekgyógyászati ​​Osztályának Újszülött Intenzív Osztályán végezték, 2 éven át (2014. januártól 2015. decemberig). A tanulmány egy prospektív vizsgálat volt, amelybe 28 napos csecsemőket vontak be, akik az LP-t a szepszis kezelésének részeként minősítették. A traumás lumbálpunkciót CSF-mintaként határozták meg 500 vörösvérsejt/mm3 értékkel, és a leukocitaszám beállítását átlagosan 500 vörösvérsejt/1 fehérvérsejt arányban végezték. A bakteriális agyhártyagyulladást szepszisben szenvedő újszülötteknél állapították meg, pozitív CSF és/vagy vértenyészet vagy pozitív Gram festődés esetén. Kizárták a 28 naposnál idősebb csecsemőket vagy az újszülötteket, akik a kórházi felvétel előtt antibiotikumot kaptak, valamint azokat az újszülötteket, akik nemrégiben agyműtéten estek át, ha az agyhártyagyulladáson vagy a vírusos agyhártyagyulladáson (herpes simplex vírus) kívül más fertőzési góc is jelen volt. A kizárási kritériumok után a vizsgálatot 168 újszülötten végezték el. Megfigyelték, hogy 0,33 ng/ml értéknél a CSF PCT érzékenysége 92%, specificitása 87%, pozitív prediktív értéke (PPV) 85,2%, és negatív prediktív értéke (NPV) 93%. Tanulmányunkban nem vettünk figyelembe más hagyományos CSF-paramétereket a valószínű agyhártyagyulladásra, például a CSF WBC-t, a CSF-cukrot és a CSF-fehérjét a valószínű agyhártyagyulladás meghatározásához, mivel ezeket a teszteket indextesztként szándékoztuk tanulmányozni, és ezért nem is tudták része legyen a referenciaszabványnak.

AZ EREDMÉNY INTÉZKEDÉSEK ÖSSZEHASONLÍTÁSA Máshol említve