Katabolische snelheid van albumine gemeten door een stabiele isotoop

Deze studie maakt deel uit van een groter onderzoeksprogramma waarin het klinische gebruik van albumine-infusies bij operaties, leveraandoeningen en toestanden van kritieke ziekte wordt onderzocht. Indicaties staan ​​na meer dan 70 jaar gebruik nog steeds ter discussie. Een goede methodologie voor het beoordelen van synthese of afbraak kan in deze situaties van grote waarde zijn.

De gouden standaard om de albumine-omzet te beoordelen, is het gebruik van met radioactief jodium gelabeld albumine en het nemen van bloedmonsters gedurende meerdere weken. Deze methode gaat echter gepaard met veel regelgevingsproblemen en mogelijk ook methodologische tekortkomingen.

Intraveneuze injectie van met deuterium gelabeld D5-fenylalanine is gebruikt voor momentopname van de albuminesynthese, maar in deze studie zullen we deze stabiele isotoop-tracer oraal toedienen. Het idee is dat een grote dosis gelabeld fenylalanine alle lichaamscompartimenten zal overstromen en zo in de lever zal worden opgenomen in de nieuw gesynthetiseerde albuminemoleculen. Na korte tijd is er geen tracer meer in de aminozuurpool en het verdwijnen van gelabelde albuminemoleculen kan dan worden gebruikt om de albumine-verdwijnsnelheid te meten, die gelijk is aan de katabolische snelheid en in stabiele toestand ook gelijk is aan de synthesesnelheid.

Wij zijn van mening dat we met deze nieuwe methode enkele van de problemen van radioactief gejodeerd albumine kunnen overwinnen: 1) geen straling, 2) geen risico dat de tracer van het albuminemolecuul weggaat vóór het katabolisme van het albuminemolecuul, 3) geen risico dat de halfwaardetijd van het albuminemolecuul wordt beschadigd door het labelingsproces, 4) een mogelijkheid om de omzetting van andere langdurige eiwitten te meten.

Kwantitatieve meting van de verrijking van isotopisch gelabeld fenylalanine wordt gedaan met behulp van gaschromatografie-massaspectrometrie in de Karolinska Stable Isotope Core waar Olav Rooyackers de laboratoriumdirecteur is. Kwantificering van totaal fenylalanine (de voorloper) wordt uitgevoerd door massaspectrometrie tegen een interne standaard.

Het albuminemolecuul bindt zich aan vrije zuurradicalen (scavenger-functie) met zijn sulfhydrylgroep op de Cys-34-positie (humaan mercaptoalbumine). Tijdens oxidatieve stress wordt de sulfhydrylgroep geoxideerd tot sulfinezuur (humaan niet-mercaptoalbumine 1, HNA 1). Dit is een omkeerbaar proces. Bij voortgezette oxidatie wordt sulfonzuur gevormd, dat onomkeerbaar lijkt te zijn (humaan niet-mercaptoalbumine 2, HNA2). Het resultaat is een beschadigd albuminemolecuul dat zijn wegvangende functie heeft verloren. Oxidatieve stress met hoge niveaus van HNA2 kan een beslissende rol spelen in de pathogenese van ernstig leverfalen.

Er zijn geen gegevens in de literatuur over veranderingen in geoxideerd albumine in de loop van de tijd. We willen de omzetting van albumine proberen te modelleren door te kijken hoe deze fracties en de verhoudingen daartussen in de loop van de tijd veranderen. We willen ook kijken of we eerdere resultaten kunnen reproduceren die suggereren dat de hoeveelheid geoxideerd albumine hoger is bij patiënten met levercirrose [Oettl 2013]. Ten slotte zullen we het verband tussen de oxidatie van albumine en de katabole snelheid van albumine onderzoeken.

Het statistisch analyseplan inclusief de bepaling van het aantal proefpersonen is opgenomen in het bijgevoegde studieplan.