Taxa catabólica de albumina medida por um isótopo estável

Este estudo faz parte de um programa de pesquisa maior que investiga o uso clínico de infusões de albumina em cirurgia, doença hepática e estados de doença crítica. As indicações ainda estão em debate após mais de 70 anos de uso. Uma boa metodologia para avaliação de síntese ou degradação pode ser de imenso valor nessas situações.

O padrão-ouro para avaliar a renovação da albumina é usar albumina marcada com radioiodo e colher amostras de sangue durante várias semanas. Este método está, no entanto, associado a muitas dificuldades regulatórias e possíveis falhas metodológicas.

A injeção intravenosa de D5-fenilalanina marcada com deutério foi usada para avaliação instantânea da síntese de albumina, mas neste estudo daremos este marcador de isótopo estável por via oral. A ideia é que uma grande dose de fenilalanina marcada transborde todos os compartimentos do corpo e, assim, seja incorporada no fígado às moléculas de albumina recém-sintetizadas. Após um curto período de tempo, não há mais marcador no pool de aminoácidos e o desaparecimento das moléculas de albumina marcadas pode então ser usado para medir a taxa de desaparecimento da albumina, que é igual à taxa catabólica e em estado estacionário também igual à taxa de síntese.

Acreditamos que, com este novo método, podemos superar alguns dos problemas da albumina radioiodada: 1) sem radiação, 2) sem risco de que o marcador saia da molécula de albumina antes do catabolismo da molécula de albumina, 3) sem risco de que a meia-vida da molécula de albumina seja danificada pelo processo de rotulagem, 4) um potencial para medir a renovação de outras proteínas de longa duração.

A medição quantitativa do enriquecimento de fenilalanina marcada isotopicamente é feita usando cromatografia gasosa-espectrometria de massa no Karolinska Stable Isotope Core, onde Olav Rooyackers é o diretor do laboratório. A quantificação da fenilalanina total (o precursor) é realizada por espectrometria de massa contra um padrão interno.

A molécula de albumina liga-se aos radicais livres de ácido (função necrófaga) com seu grupo sulfidrila na posição Cys-34 (mercaptoalbumina humana). Durante o estresse oxidativo, o grupo sulfidrila é oxidado a ácido sulfínico (não-mercaptoalbumina humana 1, HNA 1). Este é um processo reversível. Após oxidação contínua, forma-se ácido sulfônico, que parece ser irreversível (não mercaptoalbumina humana 2, HNA2). O resultado é uma molécula de albumina danificada que perdeu sua função de eliminação. O estresse oxidativo com altos níveis de HNA2 pode ter papel decisivo na patogênese da insuficiência hepática grave.

Não há dados na literatura sobre mudanças na albumina oxidada ao longo do tempo. Queremos tentar modelar a renovação da albumina observando como essas frações e as proporções entre elas mudam ao longo do tempo. Também queremos ver se podemos reproduzir resultados anteriores sugerindo que a quantidade de albumina oxidada é maior em pacientes com cirrose hepática [Oettl 2013]. Por fim, investigaremos a associação entre a oxidação da albumina e a taxa catabólica da albumina.

O plano de análise estatística, incluindo a determinação do número de sujeitos do estudo, está incluído no plano de estudo anexo.