Szybkość katabolizmu albumin mierzona stabilnym izotopem

To badanie jest częścią większego programu badawczego badającego kliniczne zastosowanie infuzji albumin w chirurgii, chorobach wątroby i stanach krytycznych. Wskazania są nadal przedmiotem dyskusji po ponad 70 latach stosowania. Dobra metodologia oceny syntezy lub degradacji może mieć w takich sytuacjach ogromną wartość.

Złotym standardem oceny obrotu albuminą jest użycie albuminy znakowanej radioizotopem i pobieranie próbek krwi przez kilka tygodni. Metoda ta wiąże się jednak z wieloma trudnościami regulacyjnymi i możliwymi również wadami metodologicznymi.

Dożylne wstrzyknięcie D5-fenyloalaniny znakowanej deuterem zostało użyte do szybkiej oceny syntezy albuminy, ale w tym badaniu podamy ten stabilny znacznik izotopowy doustnie. Pomysł polega na tym, że duża dawka znakowanej fenyloalaniny przeleje się przez wszystkie przedziały ciała, a tym samym w wątrobie zostanie włączona do nowo zsyntetyzowanych cząsteczek albuminy. Po krótkim czasie w puli aminokwasów nie ma już znacznika, a zanikanie znakowanych cząsteczek albuminy można następnie wykorzystać do pomiaru szybkości zanikania albuminy, która jest równa szybkości katabolicznej, aw stanie ustalonym również równa szybkości syntezy.

Wierzymy, że dzięki tej nowej metodzie możemy przezwyciężyć niektóre problemy związane z radiojodem albuminy: 1) brak promieniowania, 2) brak ryzyka, że ​​znacznik opuści cząsteczkę albuminy przed katabolizmem cząsteczki albuminy, 3) brak ryzyka, że ​​okres półtrwania cząsteczki albuminy zostanie uszkodzony przez proces znakowania, 4) możliwość pomiaru obrotu innych długotrwałych białek.

Ilościowy pomiar wzbogacenia fenyloalaniny znakowanej izotopowo odbywa się za pomocą chromatografii gazowej ze spektrometrią mas w Karolinska Stable Isotope Core, gdzie Olav Rooyackers jest dyrektorem laboratorium. Oznaczenie ilościowe całkowitej fenyloalaniny (prekursora) przeprowadza się za pomocą spektrometrii mas względem wzorca wewnętrznego.

Cząsteczka albuminy wiąże się z wolnymi rodnikami kwasowymi (funkcja wychwytująca) swoją grupą sulfhydrylową w pozycji Cys-34 (ludzka merkaptoalbumina). Podczas stresu oksydacyjnego grupa sulfhydrylowa jest utleniana do kwasu sulfinowego (ludzka niemerkaptoalbumina 1, HNA 1). Jest to proces odwracalny. Podczas dalszego utleniania powstaje kwas sulfonowy, który wydaje się być nieodwracalny (ludzka niemerkaptoalbumina 2, HNA2). Rezultatem jest uszkodzona cząsteczka albuminy, która utraciła swoją funkcję wychwytującą. Stres oksydacyjny z wysokim poziomem HNA2 może odgrywać decydującą rolę w patogenezie ciężkiej niewydolności wątroby.

W piśmiennictwie brak jest danych dotyczących zmian utlenionej albuminy w czasie. Chcemy spróbować modelować obrót albuminami, obserwując, jak te frakcje i proporcje między nimi zmieniają się w czasie. Chcemy również sprawdzić, czy uda nam się odtworzyć wcześniejsze wyniki sugerujące, że ilość utlenionej albuminy jest wyższa u pacjentów z marskością wątroby [Oettl 2013]. Na koniec zbadamy związek między utlenianiem albumin a szybkością katabolizmu albumin.

Plan analiz statystycznych wraz z określeniem liczby osób objętych badaniem zawarty jest w załączonym planie badań.