DNA-amplifikasjon i Blastocoel-væske

Introduksjon Målet med assistert reproduksjonsteknologi (ART) er levering av et sunt enkeltbarn, med behandlingsstrategien i IVF som har størst sjanse er overføring av det mest levedyktige enkeltembryoet fra en pasients embryokohort. Embryovalg er derfor avgjørende for å lykkes med dette målet. Den mikroskopiske vurderingen og skåringen av embryomorfologi ble utviklet som en embryoseleksjonsteknikk i de første årene av IVF (Veeck, 1991) og har siden den gang vært den mest praktiserte embryoseleksjonsteknikken. Imidlertid har teknikkens begrensede evne til å maksimere embryoimplantasjonshastigheter lenge vært beklaget, og derfor har det lenge vært søkt etter mer forbedrede embryoseleksjonsteknikker. Time-lapse-overvåking og skåring (Paulson et al., 2018) og euploid embryooverføring ved bruk av PGT-A (preimplantasjonsgenetisk testing for aneuploidi; Gleicher et al., 2017) er nyere innovasjoner som har blitt utfordrende for å erstatte konvensjonell mikroskopisk vurdering og skåring av embryomorfologi. En fordel med PGT-A er dens uavhengighet av embryoutvikling og morfologiske funksjonsvurderinger, da euploide blastocyster implanteres med samme hastighet uavhengig av blastocystmorfologisk poengsum (Capalbo et al., 2014). Dessuten, foruten PGT-As tekniske og biologiske begrensninger, kan kostnadene ved implementering av PGT-A som en embryoseleksjonsteknikk anses som uoverkommelige av mange.

I utviklingen av PGT i human IVF har PGT utviklet seg fra PGT-v1 til PGT-v2 basert på de ugunstige resultatene av biopsi av 1-2 blastomerer fra embryoer i spaltningsstadiet (PGT-v1) og forbedringen i blastocystutviklingsforholdene. Bevisene antydet at PGT-v.1 utgjorde en betydelig risiko for embryoets levedyktighet, uten noen fordel som følge av overføring av euploide embryoer (Gleicher et al., 2017). Flertallet av studiene har rapportert at PGT-v2, som krever biopsiing av 5-10 trophectoderm (TE) celler, utgjør ingen signifikant risiko for utviklingspotensialet (implantasjonslevedyktighet) til biopsierte blastocyster. Imidlertid har det nylig vært rapporter som antyder at TE-biopsi kanskje ikke er helt fri for risiko (Gleicher et al., 2017, Ozgur et al., 2019). For tiden står PGT-A overfor fire utfordringer som forhindrer rutinemessig bruk som blastocystseleksjonsteknikk; (1) behovet for høy teknisk ekspertise, (2) invasiviteten til TE-biopsi, (3) kostnaden for hele teknikken, og (4) at TE-biopsien er gjenstand for prøvetakingsbias - en enkelt TE-biopsi på 5-10 celler representerer kanskje ikke nøyaktig ploidien til hele blastocysten.

En spin-off av konvensjonell PGT er analysen av DNA i blastocoel væske (BF). Dette fenomenet ble først rapportert av Palini et al. (2013). Opprinnelsen til DNA i BF har blitt foreslått å være et resultat av embryoeuploidisering, dvs. eliminering av aneuploid-DNA eller aneuploidiske celler gjennom regulatoriske prosesser som apoptose og/eller nekrose (Leaver og Wells, 2019). Praksisen med blastocystkollaps før forglasning (Mukaida et al., 2006, Iwayama et al., 2011) gir muligheten til å utføre minimalt invasiv PGT-A (miPGT-A), dvs. biopsi-BF. I en studie for å undersøke ploiditetskonkordans mellom PGT-A med TE-biopsi og PGT-A med BF-biopsi, fant forfatterne at den kliniske graviditetsraten var 77 % for blastocyster uten DNA-amplifikasjon ble overført og 37 % for blastocyster med DNA-amplifikasjon ( Magli et al., 2018). Bare akkumulering av DNA i BF kan derfor brukes som et tilleggstiltak for å prioritere blastocyster for overføring. Implementering av BF-biopsi og helgenomisk amplifikasjon (WGA) som et supplerende seleksjonstiltak begrenser/reduserer tre av PGT-As hovedutfordringer; (1) teknisk ekspertise, (2) invasivitet og (3) kostnader.

I den nåværende randomiserte kontrollerte studien (RCT) vil etterforskerne undersøke DNA-amplifikasjon i blastocystvæskebiopsier (BF-biopsi) som en supplerende seleksjonsteknikk for å velge blastocyster for overføring i forbindelse med blastocystmorfologiscore. De kliniske implantasjonsresultatene til FET-er der score-selekterte enkeltblastocyster uten DNA-amplifikasjon og score-selekterte enkeltblastocyster ble overført vil bli sammenlignet.