Autolog adoptiv T-regulerende celleoverføring ved autoimmune sykdommer.

Autoimmune lidelser er kroniske sykdommer forårsaket av nedbryting av toleranse mot selvantigener

; en hypotese innebærer en svikt i sentral og perifer toleranse, hvor sistnevnte er assosiert med redusert Treg (CD4+CD25+FpxP3CD127-T-Regulatory) celleantall eller svikt i deres funksjon (6).

I prekliniske studier har humane CD4+CD25+CD127-Treg-celler vist seg å være effektive for å forebygge graft vs. vertssykdom (GvHD) (7, 23), autoimmune sykdommer (13,22) og forsinke graftavstøtning (19, 26) ).

De positive resultatene ga begrunnelsen for å bruke Treg-celler for behandling av menneskelige sykdommer og resultater fra de første kliniske studiene med adoptivt overførte Treg-celle-etterforskere publisert i 2009 (24).

Hva tilfører denne studien? Dette er den første intervensjonsstudien på adoptiv Treg-celleoverføring i Egypt som en terapeutisk utprøving for pasienter med refraktære autoimmune sykdommer som ikke responderer på grunnleggende behandlingsbehandling tilgjengelig i instituttet. Separasjon av disse Treg-cellene ble gjort hos egyptiske pasienter, men kun som en beskrivende studie (som nevnt nedenfor).

etterforskere velger to sykdommer for å gi en sjanse for å lykkes for å få midler til forskningen vår, siden kostnadene er dyre. Etterforskere valgte disse to sykdommene (ildfast lupus nefritis og type 1 diabetes hos voksne, siden de er de vanligste forsøkene i internasjonal publikasjon).

Forskere vil evaluere sikkerheten og effekten av autolog adoptiv Treg (CD4CD25FoxP3 CD127 lavregulerende) celleoverføring til pasienter med refraktære autoimmune sykdommer: Refraktær lupus Nefritt og voksne type 1 diabetes mellitus.

2. STUDIESPØRSMÅL/MÅL/MÅL Etterforskere vil evaluere sikkerheten og effekten av autolog adoptiv Treg (CD4CD25FoxP3 CD127low regulatory ) celleoverføring til SLE-pasienter med refraktær lupus nefritt og pasienter med type 1 diabetes mellitus hos voksne.

Overvåkingsplan for AE er dokumentert i protokollen som sjekker for systemiske og lokale uønskede hendelser ved bruk av CTCAE(5). Sikkerhetsvurderinger vil bestå av kontinuerlig overvåking og rapportering av uønskede hendelser (AE) (med månedlige besøk eller som klinisk indikert ved mobilkontakt eller ut) pasientbesøk); overvåking av vitale tegn, fysiske undersøkelser og laboratorievurderinger. Nøyaktig dokumentasjon og riktig håndtering vil bli gjort for alle AE som kan oppstå (i polikliniske og stasjonære enheter som angitt). Pasienter vil bli sett månedlig for påvisning av enhver uønsket hendelse eller som klinisk evaluert av Mobil-kontakt. Følgende vil bli vurdert:

1. Antall hvite blodlegemer (WBC) med differensialtall, røde blodlegemer (RBC), antall blodplater (PLT), hemoglobin (Hb) og hematokrit (Hct).

2. Leverfunksjoner, nyrefunksjonstester og elektrolyttmåling.

   Effektivitet av adoptiv Treg-celleoverføring:

   • Klinisk evaluering: Full anamnese og grundig klinisk undersøkelse med vurdering av sykdomsaktivitetsscore (klinisk og laboratoriemessig) for å sammenligne med baseline-data.

   • Laboratorietesting i henhold til typen autoimmun sykdom:

     1. Laboratorietester for påvisning av sykdomsforverring,
     2. CD4CD25FoxP3,CD127lavt celletall i perifer blodprøve,
     3. Serumcytokindeteksjon (INF-gama,TNF-alfa,IL1,IL2,TGF-beta,IL-10,IL-17)

   • Radiologisk evaluering ved behov i henhold til typen autoimmun sykdom:

     1. Ultralyd
     2. CT skann
   • Forskere vil oppdage effekten av infusjon av T reg-celler etter 3 måneder, etter 6 måneder og etter ett års administrering.
3. METODOLOGI:

Type studie: Ikke-randomisert åpen fase 1 pilotstudie Studiesetting: Ansvarstabell (tabell 1): se nedenfor Studiens varighet: To år.

Studiepopulasjon:

• Ti systemisk lupus erythematosus (SLE) pasienter med refraktær lupus nefritis: inklusjons- og eksklusjonskriterier
• Ti type 1 diabetespasienter: inklusjons- og eksklusjonskriterier

Prøvemetode:

Målrettede prøver etter forhåndsinnstilte inkluderings- og eksklusjonskriterier.

Eksempelstørrelse:

Forskere vil inkludere ti pasienter i hver autoimmun sykdom som en pilotstudie.

Studieprosedyrer:

• Første besøk: Revmatologisk team og endokrinologisk team vil velge pasienter i henhold til de ovennevnte kriteriene fra indremedisinsk avdeling ved ASU sykehus. Full laboratorie- og immunologiske undersøkelser vil bli utført i ASU Hospitals sentrale laboratorier. Sykepleiere i medisinsk utpasientklinikk ved ASU-sykehus vil trekke blodprøvene fra alle tilfeller. Pasienter vil gjøre alle nødvendige bildediagnostiske modaliteter i radiodiagnoseavdelingen, ASU Hospital. Revmatologisk team og endokrinologisk team vil ta et skriftlig samtykke fra alle pasienter som er inkludert i studien.
• Andre besøk: Etter første besøk med en uke. Pasienten kommer til indremedisinsk avdeling. Alle pasienter vil bli evaluert klinisk, laboratoriemessig og radiologisk som indisert for påvisning av alvorlighetsgrad eller aktivitet av sykdommen. Pasienten vil gå til medisinsk forskningssenter for perifer blodprøvetaking under sterile forhold for separasjon av Treg-celler. Avstanden mellom forskningssenteret og medisinske avdelinger er ca. 200 m. Sykehusets overføringsbil vil overføre pasient (golfbil) i 150 m etter å ha gått 50 m.
• Tredje besøk: (etter det andre besøket innen seks uker):pasienten vil komme til medisinsk forskningssenter for opptak under tilsyn av Allergi- og immunologiteamet for administrering av T reg-celleinfusjon. Allergi- og immunologiteamet vil følge opp pasienten i 24 timer etter infusjon.
• Påvisning av uønskede hendelser vil bli kontrollert månedlig. Mobil kontakt mellom pasient og både revmatologiske, endokrinologiske og kliniske immunologiske team vil bli holdt for registrering av eventuelle bivirkninger.
• Fjerde besøk: (etter tre måneder med tredje besøk): Medisinsk team vil gjøre full laboratorie-, immunologisk og radiologisk oppfølging i ASU sentrallab og ASU radiologiavdeling etter tre måneder med T reg infusjon. Klinisk skåring og påvisning av aktivitet og alvorlighetsgrad av sykdommen vil bli registrert.
• Femte besøk etter seks måneders infusjon. Det samme vil bli gjort som besøk 4.
• Siste besøk etter ett år for påvisning av uønskede hendelser.
• Den etiske komiteen vil bli informert av en fullstendig rapport som inkluderer alle kliniske og laboratoriedata om de siste seks trinnene for hver pasient som mottok t reg-celleinfusjonen som registrert av immunologiske revmatologiske og endokrinologiske team. Figur 2 viser skjema for prosedyrer og oppfølging.

Alle pasienter vil bli utsatt for følgende:

I det første besøket

• Full anamnese og klinisk undersøkelse inkludert vurdering av alvorlighetsgrad og klinisk sykdomsaktivitet i henhold til typen autoimmun sykdom.
• Forbehandlingsundersøkelser CBC med differensielt antall WBCS, totalt antall lymfocytter, antall røde blodlegemer (RBC), antall blodplater (PLT), hemoglobin (Hb) og hematokrit (Hct)
• leverfunksjoner, nyrefunksjonstester og elektrolytter (Na, K og Ca) evaluering.
• Leverfunksjonstester: serumalbumin, PT og INR .bilirubin total og direkte .AST ,ALT, alkalisk fosfatase ,serumalbumin.
• Nyrefunksjonstester (serumkreatinin, BUN) og elektrolytter (serum Na,K og, Ca)
• ESR og CRP.
• Evaluering av CD4+CD25+FoxP3+CD127- celletall før intervensjon, etter tre måneder og etter 6 måneder etter intervensjon ved flowcytometer.
• Serologiske tester for alle pasienter: INF-gamma, TNF-alfa, IL-17, IL-2, IL-10 og TGF-beta. Alle cytokiner vil bli utført med ELISA-test før adoptiv T reg transfusjon, etter 3 måneder og etter 6 måneders transfusjon.
• Radiologiske undersøkelser i henhold til type autoimmun sykdom og hvis indisert.
• Laboratorietester i henhold til autoimmun sykdom:

SLE pasienter:

• Fastende og 2-timers postprandial blodsukker, fullstendig blodtelling (CBC), fullstendig urinanalyse,
• Måling av proteiner i 24 timers urin (g/24 timer).
• Antinukleære antistoffer (ANA) titer og mønster og anti-dobbeltstrengede DNA-antistoffer (anti-dsDNA-måling vil bli utført ved immunfluorescensteknikk, der titer på 1/40 eller mer anses som positiv)
• Serumkomplementnivå (C3 og C4).

T1D-pasienter:

• Fastende C-peptidnivåer,
• fastende glukose, HbA1c og
• T1D autoantistoff [glutaminsyre dekarboksylase autoantistoff (anti-GAD65), insulin autoantistoff (IAA), insulin antigen 2 antistoff (IA2) eller sink transporter 8 autoantistoff (anti-ZnT8)] vil bli målt.

Når det gjelder blodprøver: vår plan med hensyn til frekvens og mengde blodprøver som følger:

A- Frekvens:

• Baselinje for CBC, KFT, LFT, elektrolytter, etter 3 måneder og etter 6 måneders intervensjon.
• Påvisning av T reg-tall før infusjon, etter tre måneder og etter 6 måneder
• Ved grad 2 eller flere uønskede hendelser.

B- Beløp:

• For baseline-evaluering og klargjøring: 6 ml (2ml * 3 rør). Samme mengde etter 3 måneder og etter seks måneder med T reg infusjon.
• Påvisning av T reg-tall: 4 ml (2ml* 2 rør) for hematologi og kjemi.
• Separasjon av T reg-celler For dyrking og ekspansjon: ( 400ml )
• Ved uønskede hendelser: som klinisk indisert, fra 2 ml til 4 ml. Regulatoriske T-celler (Tregs) identifikasjon og telling(10) Identifikasjon og telling, ved hjelp av flowcytometri, for humane Tregs vil være basert på både positive og negative cellemarkører, humane Tregs er (CD4+, CD25+, CD127-, Foxp3+).

Kryokonservering av utvidede tregs:

For å tillate infusjon av celleproduktet flere ganger, vil muligheten for Treg kryokonservering bli brukt. Kryokonservering av Tregs gir fleksibilitet i administrasjonen for å hjelpe til med kliniske veier og letter fullføring av alle nødvendige frigjøringsanalyser. ( 10 ) Administrering av T reg-celler og oppfølging av uønskede hendelser. Resultater av blodkjemi og hematologi vil bli gjennomgått, og en historie med eventuell nylig sykdom eller feber vil bli innhentet før infusjon av cellene. Pasientene vil få premedisinering med paracetamol og difenhydramin. Poly t regs vil bli infundert via en perifer intravenøs linje over 10 til 30 minutter.

Vitale tegn vil bli tatt før og etter infusjon, deretter hvert 15. minutt i minst 1 time, deretter hver time de første 4 timene og hver 4. time i 20 timer. Kjemi og fullstendig blodtelling med differensiell blodtelling gjentas neste dag før utskrivning fra klinisk forskningsenhet. Pasienter vil bli sett for oppfølgingsvurderinger på dag 4 etter infusjon, deretter ukentlig i 4 uker, deretter etter 13 uker og deretter etter 26 uker. Telefonovervåking for uønskede hendelser vil fortsette ett år etter infusjon etterfulgt av et siste klinikkbesøk.

Dosen av ex-vivo utvidet T reg vil være den samme for alle pasienter. Det vil bli administrert i økende doser på 5x10^6-1x10^8 celler I V infusjon I V infusjon. Det er minimumsdosen i tidligere internasjonale terapeutiske kohorter for å oppnå sikkerhet (14).

ETISKE VURDERINGER

1. RISIKO OG MINIMERING AV RISIKO:

   • Mulige risikoer ved medisinsk ultralydavbildning: Medisinsk ultralydavbildning er en rask og sikker måte å evaluere pasienter som ikke representerer noen risiko og ikke fører til bivirkninger. De fører ikke til noen endring i pasientens opprinnelige tilstand, men det kan være sjeldne problemer som: smerte eller blåmerker.
   • Komplikasjoner ved venepunktur: hematomdannelse, nerveskade, smerte, hemokonsentrasjon, ekstravasasjon, iatrogen anemi, arteriell punktering, petekkier, infeksjon, synkope og besvimelse, overdreven blødning, ødem og trombe. For å minimere disse risikoene vil det bli tatt under aseptiske forhold av kvalifiserte sykepleiere.

   • Risiko for infeksjon: T reg celle isolasjon og ekspansjon vil bli gjort under strengt sterilisert miljø. Hyppige sterilitetsteknikker vil bli fulgt under ekspansjon og kvalitetskontroll, og frigjøringsanalyser vil bli utført før adoptiv T-celleoverføring.

     ● Bivirkninger ved å ta 400 cc blod fra pasienter: som bloddonasjon som er sjeldne og inkluderer utvikling av et lokalt traumatisk hematom når nålen fjernes fra venen. Å holde lokalt trykk og påføre is eller kalde kompresser på området kan bidra til å forhindre utvikling eller progresjon av hematomer. Disse hematomene er vanligvis små og forårsaker ikke store problemer. Utvikling av svimmelhet, svette og synkope kan også forekomme, og kan unngås ved å kreve at pasienten sitter i tilbakelent stilling i noen minutter, og når den er i stand, beveger han seg sakte til oppreist stilling og beveger seg til et område hvor de vil bli gitt. noe å spise og drikke. Økt væskeinntak vil bli oppmuntret i løpet av få timer etter inntak av blodet. Pasientens Hb-nivå må ikke være mindre enn 11 g/dl før uttak av blod for Treg-isolasjon. Undersøkere vil forberede pakkede røde blodlegemer før bloduttak for å kunne gis hvis det er klinisk indisert.

   • Risiko for infeksjon/betennelse: Treg-celleisolering og ekspansjon vil skje under strengt sterilisert miljø. Hyppige sterilitetsteknikker vil bli fulgt under ekspansjon og kvalitetskontroll, og frigjøringsanalyser vil bli utført før adoptiv T-celleoverføring. De aksepterte frigjøringskriteriene inkluderer: Fenotype>60 %, , levedyktighet:> 70 %, sterilitet og negativ mykoplasma.

2. AVSLUTNINGSKRITERIER (STUDIE OG AVSLUTNING AV PÅMELDING) Sikkerhetsstoppregler for individuelle emner

   Behandlingen vil bli avbrutt hos alle personer som opplever ett av følgende:

   • Enhver SAE, eller en klinisk signifikant grad 4 AE eller bekreftet grad 4 laboratorieavvik for et individ, som av etterforskeren anses å ha en rimelig mulighet for relatert til T reg infusjon. Subjektive kliniske symptomer som ikke reflekterer alvorlig organdysfunksjon, slik som alvorlig hodepine, kan eller kan ikke berettige seponering av behandlingen etter utforskerens vurdering.
   • Forsøkspersoner kan når som helst frivillig avbryte behandlingen eller trekke seg fra studien.
   • De kan også fjernes fra studien når som helst hvis etterforskeren fastslår at å fortsette studien vil resultere i en betydelig sikkerhetsrisiko for forsøkspersonen.
   • Vedvarende manglende overholdelse av protokollkrav Forsøkspersoner som for tidlig avbryter studiebehandling bør oppmuntres til å opprettholde samme protokollplan og vurderinger som beskrevet for fortsatt oppfølging av nøkkeldata for studieresultater.

   Studer stopperegler

   Denne kliniske utprøvingen vil bli satt på pause av en av følgende årsaker:

   • Dødsfall i ethvert emne der dødsårsaken vurderes å ha en rimelig mulighet for å være relatert til studieintervensjonen fra etterforskeren.
   • >20 % av de registrerte forsøkspersonene opplever klinisk signifikante grad 3/4 AE eller bekreftet grad 3/4 laboratorieavvik som av utforskeren vurderes å ha en rimelig mulighet for tilknytning til studieintervensjonen.
   • Etterforskerne vil informere den etiske komiteen med alle detaljer om hver pasient som er inkludert i studien vil stoppe studien når den etiske komiteen informerte oss om å stoppe i henhold til komiteens regler.

3. FORDELER:

   Direkte fordeler for pasienter:

   • Remisjon av pasienters autoimmune lidelse direkte av infunderte T-regulatoriske celler. Det vil bli sjekket ved å oppdage sykdomsgrad og aktivitetsskår og følge opp undersøkelser.
   • Adoptiv T-celleoverføring vil gi en sjanse for pasienter med refraktær autoimmun sykdom for kontroll.

   Indirekte fordeler

   • Adoptiv T reg-celleoverføring muliggjør autoimmun sykdomskontroll uten global undertrykkelse av immunsystemet med immundempende medisiner.
   • Treg-overføring hjelper med autoimmun sykdomskontroll og beskytter pasienter mot kronisk progressiv sykelighet og dødelighet.
   • Det å være lite dyrt sammenlignet med andre behandlingsalternativer gjør det rimelig.
   • Adoptive Treg-celler er autologe med mindre mottakelighet for uønskede hendelser (oppnår sikkerhet).
   • Å være et stort håp for pasienter med avanserte autoimmune sykdommer som er motstandsdyktige mot konvensjonell tilgjengelig behandling, og som ikke kan nå andre utilgjengelige behandlingsalternativer oppført i de internasjonale retningslinjene. I slike avanserte stadier kan adoptive T-celler tilby mer forbedring av pasientenes livskvalitet, tolerabilitet og etterlevelse.
   • Positive resultater av denne studien bidrar sterkt til velferden til egyptiske borgere
   • Hjelp en betydelig undergruppe av pasienter med avanserte autoimmune sykdommer med en rimelig behandling vil redusere den økonomiske byrden på den egyptiske regjeringen.
   • Å tilby en slik innovativ behandlingslinje for autoimmune pasienter vil heve rangeringen av landets universiteter blant deres kolleger over hele verden
   • Å flytte brede skritt på dette feltet kan drive oss til stasjonen for å bruke adoptiv T-celleoverføring for å forhindre autoimmune sykdommer før vi fullfører kriteriene for sykdomsdiagnose, eller til og med bevare sentral toleranse og forhindre forekomsten av disse sykdommene. Dette vil bli ansett som et gigantisk skritt innen autoimmune sykdommer.
4. PERSONVERN OG KONFIDENSIALITET etterforskere vil behandle fullstendig konfidensialitet, og ingen har rett til å lese vår pasientmedisinske informasjon bortsett fra hovedforskeren. Etter at forskningen er fullført, vil vår pasients forskningsresultater og også ytterligere informasjon om vår pasients helsestatus bli informert. Individers konfidensialitet vil bli opprettholdt i alle publiserte og skriftlige data som er resultatet av studien.

5. Alternativer til å delta:

   Pasienten har rett til å nekte eller trekke seg fra studien når som helst. Ved avslag på å delta i denne forskningen vil pasienten bli fulgt opp og vil få sin behandling som planlagt. Pasienten kan stoppe deltakelsen i studien når som helst uten rikelig eller tap av medisinsk behandling.

6. SAMTYKKEPROSEDYRER:

Revmatologiske og endokrinologiske etterforskere (ASU) sykehus vil innhente et skriftlig samtykke. Samtykket vil bli gitt til pasienten av den nevnte utrederen under det første besøket. Personer som er litterære vil bli overlatt til å lese samtykket etterfulgt av dets forklaring av den nevnte etterforskeren, mens analfabeter vil få samtykket lest og forklart for seg også.