Mikrobiota wokół zębów przyzębia i implantów dotkniętych chorobą okołoimplantową.

Pobrano za pomocą sterylnych sączków papierowych, do użytku endodontycznego, płyn dziąsłowy obecny wokół elementu zębowego dotkniętego zapaleniem przyzębia oraz, u tego samego pacjenta, płyn obecny w bruździe wokół implantu w zapaleniu okołowszczepowym dotkniętym implantem. Jeśli więcej implantów zostanie uznanych za dotkniętych perimplantitis, uczestnik wybierze najgorsze jako miejsce pobierania próbek. Ta sama zasada będzie obowiązywać w przypadku zęba dotkniętego chorobą przyzębia. Próbki muszą zostać poddane metaanalizie genomu bakterii w celu dokładnej identyfikacji bakterii. Dla lepszego porównania flory nawet zdrowy ząb od tego samego pacjenta zostanie wybrany jako miejsce badania i pobrany zostanie z niego płyn dziąsłowy.

Badacze uważają, że doskonała znajomość gatunku patogenu jest punktem wyjścia do prawidłowej strategii terapeutycznej. Ale naprawdę ważne jest, aby wziąć pod uwagę indywidualne cechy mikroflory jamy ustnej.

Dane, na które należy zwrócić uwagę na wstępie to:

Oznaki i objawy chorób przyzębia, z dokładnym ujęciem w ramach Klasyfikacji Armitage 1999, oraz choroby wokół implantów. Na potrzeby pracy definicja perimplantitis dotyczy implantu o minimalnej głębokości zgłębnika 4 mm z krwawieniem przy sondowaniu i/lub ropieniem (BOP i Supp) oraz radiograficznym ubytkiem kości (BL).

Dowody BL zarejestrowane zgodnie z definicją 8th European Consensus Conference of Periodontology Grupa robocza 4: BL > 2 mm od oczekiwanego poziomu kości, jeśli nie było wstępnego rx; Rx 2-3 krotność odchylenia standardowego zapisu pomiarowego (1-1,5 mm) w przypadku obecności wstępnego rx.

1. Wykrycia diagnostyczne radiograficzne i przedinterwencyjne wykonywane techniką równoległą (opcjonalnie CBCT).
2. Fotografie przed, w trakcie i po operacji (jeśli są)
3. Obserwacja do 6 miesięcy / 1 rok (opcjonalnie) Badanie zapewnia GCF zebrany wokół bruzdy przyzębnej i wokół implantu u pacjentów rekrutowanych do badań mikrobiologicznych. Analizy próbek przeprowadza się „na ślepo”. Stosowana sonda to UNC15 i tylko jeden skalibrowany klinicysta wykonuje sondę. Mikroflora patogenu zostanie porównana z mikroflorą zdrowego zęba zebraną wokół zdrowego zęba u tego samego pacjenta.

Wstępna obróbka miejsc pobierania próbek w celu uniknięcia kontaminacji próbek naddziąsłową płytką bakteryjną przebiega w następujący sposób:

- 2 dni przed pobraniem próbki pacjent poddawany jest profesjonalnemu czyszczeniu kubków i szczoteczek, którego jedynym celem jest wyeliminowanie płytki nazębnej poddziąsłowej. otrzymamy również odpowiedni instruktaż higieny jamy ustnej ze szczotkowaniem 2 razy dziennie i używaniem innych instrumentów w razie potrzeby.

Procedura pobierania próbek: Materiał pobrany zostanie przeprowadzony przez sterylny bibułowy punkt o długości do końcówki 30 i zbieżności ISO 4%. Technika pobierania próbek będzie taka, jak pokazano na rysunku i oznaczona literą c (metoda głębokiego badania śródczaszkowego), aż do wyczucia minimalnego oporu. Każdy papierowy punkt pozostanie na miejscu przez 5 sekund, następnie będzie łatwo przechowywany w specjalnym sterylnym pojemniku, przechowywany w lodówce i dostarczany w ciągu 60 minut do środowiska Instytutu, które przeprowadzi badanie. Każdy pobrany materiał wykazujący zanieczyszczenie krwią zostanie wykluczony z badania.

Protokół mikrobiologiczny

1. Pobieranie próbek i izolacja DNA Do analizy metagenomicznej próbki paska papieru / bibuły od pacjentów włączonych do badania zostaną wymyte przez noc w PBS (roztwór soli buforowany fosforanami) w temperaturze 4 ° C. Następnie próbki zostaną odwirowane w 10 000 obr./min przez 15 min w 4°C. Po usunięciu sączka papierowego supernatant zostanie użyty do ekstrakcji DNA przy użyciu zestawu QIAamp DNA Mini. DNA będzie oznaczane ilościowo za pomocą fluorometru Qubit® 2.0 (Thermo Fisher) przy użyciu zestawu QUBIT Kit dsDNA HS ASSAY KIT (Life Technologies).
2. Analiza 16S rRNA - Metagenomika Analizy metagenomiczne będą prowadzone na platformie MiSeq Illumina. Biblioteki genów zostaną zsekwencjonowane za pomocą zestawów odczynników MiSeq v3. Regiony hiperzmienne 16S rRNA będą amplifikowane przy użyciu DNA o stężeniu 5 ng/l ze starterami V5-V7.

Biblioteki zostaną oczyszczone za pomocą kulek magnetycznych (AgencourtAmpure XP, Beckman), a stężenie i rozmieszczenie fragmentów bibliotek zostanie ocenione na DNA Chip 1000 w mikroanalizatorze 2100 (Agilent Technologies). Analiza sekwencji (zbiory danych amplikonów) oraz określenie OTU (OperationalTaxonomicUnits) zostanie przeprowadzone za pomocą potoku QIIME z wykorzystaniem Green genów jako bazy danych genów 16S rRNA.

Kryteria przyjęcia:

• Aktywa użytkowane przez co najmniej jeden rok bez technicznego GBR (w związku z tym wykluczone z badania również poekstrakcyjne)
• wszedł Działa na rodzimej kości
• Wypełnij formularz historii medycznej i tablicę periodontologiczną poświęconą zdarzeniu, a także kartę dla klinicysty, która opiera się na pracy opublikowanej w J ClinPeriodontol 2012; 39 (Suplement 12): 224-244
• Raportowanie typu płyty systemowej (opcjonalnie technika chirurgiczna)

Kryteria wyłączenia:

• Pacjenci w stanach ogólnoustrojowych, które są przeciwwskazaniami do wszczepienia implantów
• Pacjenci w ciągu ostatnich trzech miesięcy po operacji przyjmowali antybiotyki lub stosowali jakąkolwiek terapię mającą na celu ustąpienie ostrych zdarzeń. To samo może kwalifikować się do badania później.
• Kobiety w ciąży lub karmiące piersią lub przechodzące terapie hormonalne