Mikrobiota um parodontale Zähne und Implantate, die von einer periimplantären Erkrankung betroffen sind.

Die Sulkusflüssigkeit, die um ein von Parodontitis betroffenes Zahnelement herum vorhanden ist, und bei demselben Patienten die Flüssigkeit, die sich in einem periimplantären Sulkus eines von Periimplantitis betroffenen Implantats befindet, wird über sterile Papierspitzen für endodontische Zwecke entnommen. Wenn davon ausgegangen wird, dass mehr Implantate von Periimplantitis betroffen sind, wählt der Teilnehmer das schlimmste als Probestelle aus. Das gleiche Prinzip wird bei einem Zahn angewendet, der von einer Parodontitis betroffen ist. Zur genauen Identifizierung von Bakterien müssen die Proben einer bakteriellen genomischen Metaanalyse unterzogen werden. Für einen besseren Vergleich der Flora wird sogar ein gesunder Zahn desselben Patienten als Teststelle ausgewählt und darauf eine Zahnfleischspaltenflüssigkeit entnommen.

Die Forscher glauben, dass die perfekte Kenntnis der Erregerart der Ausgangspunkt für eine korrekte Therapiestrategie ist. Es ist jedoch wirklich wichtig, die individuellen Eigenschaften der oralen Mikroflora zu berücksichtigen.

Die zu Beginn zu beachtenden Daten sind:

Anzeichen und Symptome einer Parodontitis, mit genauer Einordnung in die Armitage-Klassifikation von 1999, und periimplantärer Erkrankung. Für das Ziel der Studie betrifft die Definition von Periimplantitis ein Implantat mit einer minimalen Sondierungstiefe von 4 mm mit Blutung bei Sondierung und/oder Eiterung (BOP und Supp) und radiologischem Knochenverlust (BL).

Nachweis von BL, aufgezeichnet in der Reihenfolge der Definition der 8. Europäischen Konsenskonferenz für Parodontologie, Arbeitsgruppe 4: BL > 2 mm vom erwarteten Knochenniveau, wenn kein vorläufiger RX vorhanden war; Rx 2-3-fache SD des Messprotokolls (1-1,5 mm), falls ein vorläufiger Rx vorhanden war.

1. Diagnostische Röntgendiagnostik und präinterventionelle Erkennung mit paralleler Technik (CBCT optional).
2. Fotos vor, während und nach der Operation (falls vorhanden)
3. Nachbeobachtungszeit bis zu 6 Monate/1 Jahr (optional) Die Studie liefert einen GCF, der rund um den parodontalen und periimplantären Sulcus bei Patienten entnommen wird, die für eine mikrobiologische Untersuchung rekrutiert wurden. Die Analysen der Proben werden „blind“ durchgeführt. Die verwendete Sonde ist eine UNC15 und nur ein kalibrierter Arzt führt die Sondierung durch. Die pathogene Mikroflora wird mit einer gesunden Zahnmikroflora verglichen, die um einen gesunden Zahn desselben Patienten herum entnommen wurde.

Die Vorbehandlung der Probenstellen zur Vermeidung einer Kontamination der Proben durch den supragingivalen Bakterienbelag erfolgt wie folgt:

- 2 Tage vor der Probenahme unterzieht sich der Patient einer professionellen Reinigung von Bechern und Bürsten mit dem alleinigen Zweck, subgingivale Plaque zu entfernen. Außerdem erhalten wir entsprechende Anweisungen zur Mundhygiene mit zweimaligem Zähneputzen pro Tag und der Verwendung der anderen Instrumente, sofern erforderlich.

Probenahmeverfahren: Die Entnahme erfolgt durch eine sterile Papierspitze mit einem Umfang von bis zu 30 % und einem ISO-Konus von 4 %. Die Probenahmetechnik ist die in der Abbildung dargestellte und mit dem Buchstaben c gekennzeichnete Technik (intrakrevikuläre Tiefenmethode), bis ein minimaler Widerstand spürbar ist. Jede Papierspitze bleibt 5 Sekunden lang an Ort und Stelle, dann wird sie problemlos in einem speziellen sterilen Behälter aufbewahrt, gekühlt gelagert und innerhalb von 60 Minuten an das Institut geliefert, in dem die Untersuchung durchgeführt wird. Alle entnommenen Proben, die eine Blutkontamination aufweisen, werden von der Untersuchung ausgeschlossen.

Mikrobiologisches Protokoll

1. Probenentnahme und DNA-Isolierung Für die metagenomische Analyse werden Proben von Papierstreifen/Papierspitzen von in die Studie einbezogenen Patienten über Nacht in PBS (phosphatgepufferte Kochsalzlösung) bei 4 °C eluiert. Anschließend werden die Proben bei 10.000 zentrifugiert U/min für 15 min bei 4°C. Nach dem Entfernen der Papierspitze wird der Überstand für die DNA-Extraktion mit dem QIAamp DNA Mini Kit verwendet. Die DNA wird mit dem Qubit® 2.0 Fluorometer (Thermo Fisher) unter Verwendung des QUBIT Kit dsDNA HS ASSAY KIT (Life Technologies) quantifiziert.
2. Analyse von 16S-rRNA – Metagenomik Die metagenomischen Analysen werden auf der MiSeq-Plattform Illumina durchgeführt. Die Genbibliotheken werden mithilfe der MiSeq v3-Reagenzienkits sequenziert. Die hypervariablen 16S-rRNA-Regionen werden mit einer DNA-Konzentration von 5 ng/l mit den Primern V5-V7 amplifiziert.

Die Bibliotheken werden mit Magnetkügelchen (AgencourtAmpure XP, Beckman) gereinigt und die Konzentration und Verteilung der Fragmente der Bibliotheken werden auf dem DNA Chip 1000 im Mikroanalysator 2100 (Agilent Technologies) ausgewertet. Die Analyse der Sequenzen (Amplikon-Datensätze) und die Bestimmung von OTU (OperationalTaxonomicUnits) werden von der QIIME-Pipeline unter Verwendung von Green Genes als 16S-rRNA-Gendatenbank durchgeführt.

Einschlusskriterien:

• Anlagen, die seit mindestens einem Jahr ohne technische GBR im Einsatz sind (daher auch nach der Extraktion von der Studie ausgeschlossen)
• Eingetragene Arbeiten an nativem Knochen
• Füllen Sie ein Anamneseformular und eine Parodontaltafel für die Veranstaltung sowie eine Karte für den Arzt aus, die auf der in J ClinPeriodontol 2012 veröffentlichten Arbeit aufbaut; 39 (Suppl 12): 224-244
• Berichterstattung in Form einer Systemplatine (optionale Operationstechnik)

Ausschlusskriterien:

• Patienten mit subintranten systemischen Erkrankungen, die das Einsetzen von Implantaten kontraindizieren
• Patienten, die in den letzten drei Monaten nach der Operation Antibiotika eingenommen haben oder eine Therapie zur Linderung akuter Ereignisse durchlaufen haben. Das Gleiche kann sich später für das Studium qualifizieren.
• Frauen, die schwanger sind, stillen oder sich einer Hormontherapie unterziehen