Intermedyna pochodzenia przysadkowego jest modulowanym estrogenem czynnikiem obniżającym ciśnienie krwi

Konkretny cel:

Potwierdzenie, że intermedyna reprezentuje regulowany estrogenem hormon wazoaktywny z przysadki mózgowej

Hipoteza:

Intermedyna jest mediatorem wazoregulacyjnego działania estrogenów.

Racjonalne uzasadnienie:

W badaniu wstępnym wykazaliśmy, że intermedyna jest czynnikiem hipotensyjnym pochodzenia przysadkowego, sygnalizującym poprzez kompleksy receptora CRLR/RAMP w śródbłonku naczyń. Na podstawie badań pokrewnych hormonów, adrenomeduliny i CGRP, intermedyna prawdopodobnie obniża ciśnienie krwi, wywierając działanie rozszerzające naczynia krwionośne na łożyska naczyniowe. Wcześniejsze badania wykazały, że neuropeptyd αCGRP jest wytwarzany głównie w neuronie czuciowym, a serotonina może selektywnie zmniejszać wydzielanie CGRP poprzez aktywację endogennego receptora serotoniny (typu 1 5-HT1) poprzez wapniowy szlak sygnałowy. Delecja genu CGRP u zmutowanych myszy (αCGRP-/-) prowadzi do podwyższenia średniego ciśnienia tętniczego, częstości akcji serca, obwodowego oporu naczyniowego i współczulnej aktywności nerwowej w porównaniu z myszami typu dzikiego. Wykazano, że inny pokrewny peptyd, adrenomedulina (ADM), początkowo zidentyfikowany w guzie chromochłonnym, ulega ekspresji w różnych tkankach, w tym w rdzeniu nadnerczy, tkankach sercowo-naczyniowych, płucach, nerkach i łożysku. ADM w osoczu jest podwyższony w różnych stanach, w tym w zaburzeniach sercowo-naczyniowych i nerek oraz wstrząsie septycznym, i postawiono hipotezę, że ADM może być zaangażowany w kontrolę krążenia i dynamikę płynów ustrojowych w różnych narządach. Badania myszy z niedoborem ADM wykazały, że ADM jest niezbędna do rozwoju układu sercowo-naczyniowego. Homozygotyczne myszy z nokautem (Adm-/-) wykazywały zarodkowy letalny fenotyp.

Wcześniejsze badania promotora genu ADM wykazały, że oprócz dwóch czynników transkrypcyjnych, jądrowego czynnika ekspresji interleukiny-6 (NF-IL6) i białka aktywatora 2 (AP-2), ekspresja genu ADM jest regulowana przez indukowaną hipoksją czynnik-1 (HIF-1). W warunkach niedotlenienia HIF-1 wiąże się z elementami odpowiedzi na hipoksję (HRE) w promotorze genu ADM, aby promować ekspresję genu ADM. Chociaż poza przedmiotem niniejszego badania, wykryliśmy również domniemane sekwencje HRE w promotorze genu intermedyny i wykazaliśmy, że warunki niedotlenienia stymulują aktywność promotora genu intermedyny, co sugeruje, że HIF-1 może odgrywać rolę w regulacji ekspresji genu intermedyny. W przeciwieństwie do intermedyny, ekspresja CGRP i ADM nie jest aktywnie stymulowana przez estrogeny, co sugeruje, że te dwa pokrewne peptydy nie są bezpośrednio związane z działaniem estrogenów na układ sercowo-naczyniowy. U kobiet 17β-estradiol wytwarzany przez jajniki jest głównym krążącym estrogenem, który zwiększa rozszerzenie naczyń i hamuje reakcję naczyń krwionośnych na uszkodzenie. Badania Mercuro i in. wykazali, że menopauza wywołana chirurgicznie powoduje wzrost obwodowego oporu naczyniowego i ciśnienia krwi. Podobnie badanie przekrojowe wykazało czterokrotny wzrost częstości występowania nadciśnienia tętniczego u kobiet po menopauzie w porównaniu z osobami przed menopauzą (40% u kobiet po menopauzie vs 10% u kobiet przed menopauzą). Wzrost skurczowego ciśnienia krwi na dekadę był o około 5 mmHg większy u kobiet w okresie okołomenopauzalnym i pomenopauzalnym w porównaniu z kobietami przed menopauzą. Oprócz badań demograficznych, badania wykazały, że estrogen może rozszerzać tętnice wieńcowe i ramienne u kobiet po menopauzie. Część rozszerzających naczynia krwionośne i hipotensyjnych działań 17β-estradiolu można wytłumaczyć jego zdolnością do modulowania ekspresji genów, o których wiadomo, że wpływają na napięcie i strukturę naczyń, takich jak ACE, renina i receptory angiotensyjne typu I (AT1). Jednak żaden z tych genów nie okazał się specyficznym bezpośrednim celem dla receptorów estrogenowych i nie jest odpowiedzialny za ochronne działanie estrogenów na naczynia krwionośne. Opierając się na naszych ustaleniach, że intermedyna jest czynnikiem hipotensyjnym i zawiera przypuszczalną sekwencję ERE w regionie promotora, proponujemy, że intermedyna jest czynnikiem modulującym ciśnienie krwi pochodzącym z przysadki mózgowej, bezpośrednio regulowanym przez estrogeny jajnikowe. Opierając się na tym zrozumieniu, stawiamy dalej hipotezę, że obniżenie poziomu intermedyny u starzejących się osób z niedoborem estrogenu może być odpowiedzialne za nadciśnienie pomenopauzalne. Ponieważ nie ma ustalonego modelu zwierzęcego odpowiedniego do badania naturalnie występującej menopauzy, przetestujemy naszą hipotezę, badając związek między stężeniem intermedyny w osoczu a ciśnieniem krwi u kobiet na różnych etapach rozrodczych.

Wybór przypadku, pomiar i analiza właściwości biofizycznych i biochemicznych

Grupa przedmenopauzalna i pomenopauzalna:

Kwalifikujące się kobiety odwiedzające lekarzy położników/ginekologów zostaną zaproszone na rozmowę kwalifikacyjną. Zostaną zapytani o ogólną charakterystykę, nawyki związane ze stylem życia (palenie tytoniu, spożywanie alkoholu, aktywność fizyczna) oraz historię medyczną. Podczas wywiadu ciśnienie krwi będzie mierzone trzykrotnie na prawym ramieniu, gdy uczestnik siedzi. Kobieta jest uważana za pomenopauzalną, jeśli jej miesiączka w naturalny sposób ustała na 12 miesięcy (lub dłużej) lub jeśli ma obustronne wycięcie jajników lub histerektomię bez obustronnego wycięcia jajników i jest w wieku powyżej 55 lat. BP w gabinecie będzie mierzone za pomocą sfigmomanometru rtęciowego zgodnie z zaleceniami Amerykańskiego Towarzystwa Nadciśnienia Tętniczego (średnia z trzech odczytów BP po 5 minutach spokojnej pozycji siedzącej). Zmierzone zostaną cechy biofizyczne i biochemiczne, w tym okres ostatniej miesiączki, wiek, BMI, poziom glukozy w surowicy (AC i PC), kreatynina w surowicy i moczu, cholesterol całkowity w osoczu, HDL, LDL, trójglicerydy, FSH, LH, 17β-estradiol, progesteron, TSH, intermedyna i prolaktyna. Próbki krwi od poszczególnych osób zostaną przeanalizowane w jednym teście, aby zminimalizować różnice. Iloraz szans (OR) podwyższonego ciśnienia krwi i odpowiadające mu 95% przedziały ufności (CI) zostaną obliczone po uwzględnieniu wieku. Ponadto, w celu uwzględnienia potencjalnego wzajemnego zakłócającego wpływu rozważanych zmiennych, czynniki istotnie związane z podwyższonym ryzykiem ciśnienia krwi w analizie dostosowanej do wieku zostaną następnie uwzględnione w modelach wielokrotnej regresji logistycznej dopasowanych metodą największej wiarygodności. Do tej grupy badawczej kwalifikują się kobiety proszące o coroczne regularne badania cytologiczne bez żadnych chorób.

Etapy reprodukcyjne zostaną przypisane jako:

• Okres przedmenopauzalny: brak zgłoszonych zmian we wzorcu cyklu miesiączkowego;
• Wczesny okres okołomenopauzalny: odnotowana zmiana częstości cyklu miesiączkowego w poprzednim roku z krwawieniem w ciągu ostatnich 3 miesięcy;
• Późny okres okołomenopauzalny: brak miesiączki w ciągu ostatnich 3-11 miesięcy;
• Postmenopauza: brak miesiączki w ciągu ostatnich 12 miesięcy.

Grupa menopauzy indukowanej chirurgicznie:

Protokół ten obejmie płodne kobiety, które cierpią na patologię jajników bez innych chorób i mają zostać poddane obustronnemu wycięciu jajników połączonemu z histerektomią lub bez niej. Pacjenci, którzy cierpią na patologię macicy i przechodzą jedynie histerektomię, będą służyć jako grupa kontrolna. Ciśnienie krwi i wszystkie parametry biochemiczne będą mierzone na tydzień przed operacją oraz 1, 3, 6 i 12 miesięcy po operacji. Wszystkie indywidualne pomiary będą zaślepione co do statusu pacjentek po histerektomii/jajników. Cała grupa danych zostanie przedstawiona jako średnia ± SE. Różnice w parametrach naczyniowych między kobietami po wycięciu jajników a grupą kontrolną oraz między wartościami zarejestrowanymi przed operacją i po operacji zostaną ocenione przy użyciu sparowanych i niesparowanych testów t-Studenta.

Grupa ART:

Uwzględnione zostaną kobiety w leczeniu ART z powodu czynnika męskiego lub jajowodowego. Poziom hormonów w 3. dniu (E2, progesteron, FSH, LH, TSH, prolaktyna, inhibina A, inhibina B i aktywina) oraz ciśnienie krwi zostaną zmierzone na miesiąc przed rozpoczęciem leczenia ART. Po podaniu gonadotropin wszystkie zmiany hormonów i ciśnienia krwi będą mierzone i rejestrowane w dniu 3, dniu 7 i dniu przed wstrzyknięciem hCG oraz w dniu pobrania komórki jajowej. Wszystkie cechy biofizyczne i biochemiczne będą kontynuowane w 15. dniu po transferze zarodka i do końca pierwszego trymestru w grupie ciężarnej.