Lactobacillus Acidophilus L92 na markery zapalenia alergicznego przez prowokację donosową pyłkiem trawy

Ogólnym celem tego badania jest ustalenie korzyści ze stosowania produktu bakteryjnego Lactobacillus acidophilus szczep L-92 (CALPIS USA, Inc., Torrance, CA) u pacjentów z alergicznym zapaleniem błony śluzowej nosa. Zostanie to zrobione poprzez odnotowanie:

• Progowa dawka ekstraktu pyłkowego wymagana do prowokacji donosowej, potrzebna do wywołania niedrożności nosa, mierzona za pomocą rynometrii akustycznej przed leczeniem, a następnie porównanie odpowiedzi nosa z tą samą dawką pod koniec leczenia.
• Dawka ekstraktu pyłku kwiatowego potrzebna (poprzez stopniowe zwiększanie dawki) do wywołania niedrożności nosa pod koniec leczenia, jeśli nie uzyskano znacznej niedrożności nosa przy dawce stosowanej przed leczeniem.
• Zmiany profilu cytokin i chemokin uzyskane na podstawie analizy próbek wydzieliny z nosa przed i po leczeniu.
• Zmiany w profilu cytokinowym hodowanych komórek jednojądrzastych krwi obwodowej stymulowanych PHA przed i po leczeniu.
• PHADIA ImmunoCAP miano pyłku życicy trwałej przed i po zabiegu.
• Stężenie progowe standaryzowanego ekstraktu z życicy trwałej potrzebne do uzyskania pozytywnego wyniku punktowego testu skórnego przed i po zabiegu
• Całkowite IgE w surowicy przed i po

Produktem aktywnym do stosowania jest tabletka sporządzona z wysuszonego szczepu Lactobacillus acidophilus L-92 i wypełniaczy. Bakterie te są obecne w przewodzie pokarmowym większości zdrowych ludzi. Są niepatogenne i od wieków stosowane są w przemyśle spożywczym do przygotowywania produktów fermentowanych. Obniżają pH środowiska, przekształcając cukier w kwas mlekowy, który hamuje rozwój niektórych patogenów. Lactobacilli to pierwszy rodzaj bakterii, o których podejrzewa się, że mają korzyści zdrowotne. Większość badań nad probiotykami przeprowadzono na żywych kulturach i rzeczywiście istnieje literatura na temat modeli zwierzęcych, która potwierdza większe korzystne działanie immunomodulacyjne żywych bakterii w porównaniu z organizmami zabitymi. Jednak sugeruje się, że niektóre korzystne efekty Lactobacilli wynikają z wychwytu i przetwarzania składników ściany komórkowej i bakteryjnego DNA, dlatego interakcja z żywymi bakteriami może nie być wymagana dla wszystkich korzystnych efektów. Jeśli jednak forma tabletki może dostarczyć żywych bakterii, pod względem łatwości spożycia przez konsumentów, byłaby preferowana przez wiele osób, a także umożliwiłaby łatwiejsze zaślepienie suplementu w badaniach klinicznych. Proponowane tutaj badanie będzie pierwszym dużym badaniem tego produktu z użyciem żywego, ale wysuszonego preparatu bakterii w postaci tabletek. Jeśli ten produkt ma korzystny wpływ, to fakt, że jest w postaci tabletki, znacznie poprawi spójność produkcji, a także ułatwi przechowywanie i ostateczne wykorzystanie produktu przez konsumentów.

Firma CALPIS wybrała szczep bakterii kwasu mlekowego, L. acidophilus (L92), na podstawie efektu obniżania poziomu IgE w badaniach eksperymentalnych na myszach. Ten produkt w postaci płynnego sfermentowanego mleka został przetestowany w następujących badaniach klinicznych:

1. Badanie alergii na pyłki cedru (2003). Wykryto znaczącą poprawę w ocenie leczenia objawowego (ISHIDA i wsp. BIOSCI. BIOTECHNOLOGIA. BIOCHEMIA. 1652-60, 2005). Produkt: Mleko płynnej fermentacji L acidophilus L-92, poddane obróbce cieplnej w temperaturze 75°C przez 10 minut w objętości 100 ml.
2. Całoroczny alergiczny nieżyt nosa (2002/03). Zaobserwowano znaczącą poprawę w ocenie leczenia objawowego (ISHIDA i wsp. J. Dairy Sci. 528-33, 2005). Produkt: 100 ml poddanego obróbce cieplnej mleka sfermentowanego przez L acidophilus L-92 (około 3x1010 zliczeń/100 ml)

3. Atopowe zapalenie skóry (2005). Wykryto poprawę w ocenie leczenia objawowego. Niepublikowane dane. Produkt: 100 ml sfermentowanego mleka z L acidophilus L-92.

   Przeprowadzono wstępne badanie z użyciem wysuszonej postaci w tabletkach:

4. Badanie alergii na sztuczne pyłki (2005). Odnotowano poprawę jakości życia. Produkt: suszone bakterie i wypełniacze w tabletkach. Badano 20 mg, 60 mg i 180 mg. Najskuteczniejsza była dawka 180 mg/dzień. Niepublikowane dane.

METODY

FAZA 1

W pierwszej fazie osoby z historią pyłkowicy traw, z pozytywnymi testami skórnymi na trawę, będą badane poza sezonem i losowo przydzielane do grupy otrzymującej placebo i aktywne leczenie przez 4 miesiące. Randomizacja będzie oparta na retrospektywnym kwestionariuszu jakości życia dotyczącym nieżytu nosa, dotyczącym ich wspomnień z najgorszego tygodnia ostatniego sezonu pylenia. Celem jest randomizacja pacjentów w taki sposób, aby rozkład osób z ciężkimi i łagodnymi objawami alergii był równy w obu grupach. Osobnicy będą oceniani pod kątem funkcji nosa (drożność za pomocą rynometrii akustycznej) i poddawani nosowemu testowi prowokacyjnemu oraz zbieraniu wydzieliny z nosa na początku i na końcu badania. Na początku i na końcu badania zostanie pobrana krew i przeprowadzone zostaną testy skórne.

Podstawowy cel:

Aby ocenić skuteczność L-92 w porównaniu z placebo, porównując zmianę w niedrożności nosa za pomocą rynometrii akustycznej od linii podstawowej, po prowokacji donosowej z tą samą dawką ekstraktu z pyłku trawy, która wywoływała niedrożność podczas rejestracji.

Cele drugorzędne:

1. Porównanie zmiany dawki progowej dla testu prowokacji donosowej (NPT) z pyłkiem traw wymaganym do wywołania niedrożności nosa.
2. Porównanie zmiany poziomu IgE w surowicy z pyłkiem trawy (wykonywane przez PHADIA ImmunoCAP) i całkowitego IgE.
3. Porównanie zmiany cytokin IFN-gamma, IL-2, IL-4, IL-5, IL-9 i IL-13 oraz chemokiny, eotaksyny, w wydzielinie z nosa przy użyciu tej samej dawki pyłku, która wywołała niedrożność nosa na linii bazowej.
4. Porównanie zmiany cytokin IFN-gamma, IL-2, IL-4, IL-5, IL-9 i IL-13 w supernatancie z jednojądrzastych komórek krwi obwodowej (PBMC) stymulowanych PHA przed i po traktowaniu.

FAZA 2

W drugiej fazie:

Uczestnicy otrzymają możliwość udziału w fazie 2 badania. W tej fazie uczestnicy będą nadal przyjmować placebo lub produkt aktywny przez cały następny sezon pylenia, począwszy od stycznia 2008 r., i wypełniać kwestionariusze jakości życia związane z zapaleniem błony śluzowej nosa, gdy odbiorą badane tabletki na początku kwietnia, maja i czerwca. Zostaną poproszeni o wypełnienie dzienników leków/objawów w ciągu pierwszych dwóch tygodni maja (dokładne daty mogą ulec zmianie w zależności od czynników klimatycznych). Szczyt sezonu pylenia traw trwa od kwietnia do czerwca. Krew zostanie pobrana podczas ostatniej wizyty pod koniec czerwca 2008 r. na oznaczenie swoistych i całkowitych IgE metodą ImmunoCAP.