Spersonalizowana medycyna na chorobliwą otyłość

PRZEDMIOTY i PRÓBKI

Pacjenci otyli (n=2000) zgłaszający się do Kliniki Otyłości, Endokrynologii i Kliniki Medycznej w Imperial College Healthcare NHS Trust będą rekrutowani przy pierwszym zgłoszeniu do służby. Do tego badania zostaną włączeni pacjenci z BMI >28 kg/m2 w wieku od 18 do 65 lat.

Badani będą pobierać próbki krwi, śliny, moczu i kału. Pacjenci będą również proszeni o wyrażenie zgody na pobranie tkanki tłuszczowej z mięśni, wątroby, podskórnej i trzewnej tkanki tłuszczowej w czasie operacji. Jeśli któryś z pacjentów będzie musiał przejść reoperację, konieczne będzie ponowne pobranie próbki krwi, tkanki mięśniowej, wątrobowej, podskórnej i trzewnej tkanki tłuszczowej.

Zbiory próbek z innych ośrodków (np. Göteborga) mogą być analizowane w podobny sposób obok próbek określonych tutaj.

METODY

Badacze zastosują metody reprezentujące aktualny stan wiedzy w momencie przeprowadzania analizy. Aktualne plany przedstawiono poniżej:

Do ekstrakcji DNA ze śliny lub krwi zostaną użyte standardowe metody, a wszyscy pacjenci zostaną przebadani pod kątem otyłości monogenowej i cukrzycy.

RNA zostanie wyekstrahowane z krwi i tkanek w celu przeprowadzenia analizy ekspresji całego genomu.

DNA zostanie wykorzystane do przeprowadzenia ukierunkowanego genotypowania SNP obejmującego cały genom w celu identyfikacji eQTL oraz zmienności genetycznych wpływających na wyniki operacji bariatrycznych.

DNA zostanie wyekstrahowane z krwi i tkanek przy użyciu standardowych metod przeprowadzania analiz epigenetycznych.

Pacjenci zostaną poproszeni o przyniesienie próbki moczu wcześnie rano oraz próbki kału do późniejszych analiz metabonomicznych/metagenomicznych.

Próbki krwi będą również wykorzystywane do pomiaru peptydu C, glukozy na czczo i insuliny oraz innych biomarkerów, gdy staną się dostępne. Waga osobnika będzie mierzona podczas każdej z wizyt kontrolnych. Uczestnicy zostaną również przeanalizowani pod kątem szeregu fenotypów związanych z otyłością i jej współzachorowalnością, a także pod kątem wyników psychologicznych i pokrewnych.

PROTOKÓŁ

Pierwszy punkt kontaktu (podczas grupowej sesji informacyjnej):

1. Werbalne wprowadzenie do nauki
2. Karta informacyjna uczestnika (załącznik 2)
3. Pacjenci otrzymają pojemniki na próbki moczu i kału
4. 1-tygodniowy kontakt telefoniczny w celu uzyskania zgody na przystąpienie do pierwszej wizyty studyjnej

Wizyta 1: Wizyta przesiewowa (w ramach oceny przedoperacyjnej (część wizyty rutynowej)):

1. Dalsze wyjaśnienie badania i potwierdzenie zrozumienia
2. Podpisany formularz zgody (załącznik 3)
3. Kwestionariusze historii rodziny
4. Pomiar wzrostu, wagi, obwodu głowy, rozmiaru stopy i dłoni (wspomagany dokumentacją fotograficzną)
5. Kwestionariusze psychologiczne (wypełniają je wszyscy pacjenci przed pierwszą wizytą studyjną po wstępnym skierowaniu do służby zajmującej się otyłością w celach audytowych. Zgoda na ich wykorzystanie będzie prośba podczas pierwszej wizyty studyjnej)
6. Krew lub ślina
7. Rutynowe badanie krwi w celu pomiaru peptydu C, glukozy na czczo i insuliny
8. Próbka moczu i kału wcześnie rano

Wizyta 2 (podczas właściwej operacji):

1. Tkanka tłuszczowa krwi, mięśni, wątroby, podskórnej i trzewnej

Wizyta 3 (2 dni po zabiegu):

1. Krew
2. Waga

Wizyta 4 (10 dni po operacji):

1. Krew
2. Waga
3. Mocz

Wizyta 5 (6 miesięcy po operacji):

1. Krew
2. Waga

3. Mocz

   Wizyta 6 (12 miesięcy po operacji - część rutynowej wizyty kontrolnej):

1 Krew 2 Waga 3 Kwestionariusze psychologiczne

Wizyta 7 (18 miesięcy po operacji):

1. Próbka moczu i kału wcześnie rano
2. Waga

KWESTIONARIUSZE

Przed pierwszą wizytą studyjną i 12 miesięcy po operacji uczestnicy wypełnią następujące kwestionariusze w celu oceny zachowań żywieniowych i pomiarów osobowości:

1. Eating Disorder Examination Questionnaire (EDEQ) - w celu określenia liczby napadów napadów objadania się w ciągu 28 dni (Fairburn CG, Beglin S Int Jour. Eat Dis 16:363370, 1994) (Dodatek 4).
2. Holenderski kwestionariusz zachowań żywieniowych (DEBQ) do pomiaru powściągliwości, emocjonalnych i zewnętrznych wpływów na zachowania żywieniowe (Wardle J Psychosom Res 31:1619, 1987) (Załącznik 5).

4. Kwestionariusz trzech czynników odżywiania (TFEQ) – do pomiaru powściągliwości, odhamowania i głodu (Stunkard i Messick. J Psychosom Res 29:7183, 1985) (Dodatek 6).

8. Skala impulsywności Barratta do pomiaru impulsywności, która została powiązana z przejadaniem się (Patton JM i in. J Clin Psych 51: 76874, 1995; Yeomans MR i in. Apetyt. 50:46976, 2008) (dodatek 7).

9. PANAS - kwestionariusz mierzący afekt pozytywny i negatywny (Watson, Clark & ​​Tellegen. J Pers Soc Psych 54(6): 10631070, 1988) (Załącznik 8).

10. Test Fagerstroma na uzależnienie od nikotyny – kwestionariusz oceniający aktualne zachowania związane z paleniem (Heatherton et al. British Journal of Addiction 86: 1119-1127, 1991) (Dodatek 9).

11. Kwestionariusz wpływu wagi na jakość życia (IWQOLLite) – kwestionariusz mierzący zmianę subiektywnej jakości życia po operacji bariatrycznej (Kolotkin et al. Obesity Research 9: 102111, 2001) (Załącznik 10).

12. SF-36 - do oceny stanu zdrowia poszczególnych pacjentów, oceny opłacalności leczenia oraz monitorowania i porównywania obciążenia chorobą (McHorney i Ware, 1995) (Załącznik 11).

13. Szpitalna Skala Lęku i Depresji – do identyfikacji zaburzeń psychicznych lub depresji (Spinhoven i in., 1997) (Załącznik 12).

14. Kwestionariusz AUDIT dotyczący narkotyków i alkoholu (w celu wykrycia wczesnych oznak niebezpiecznego i szkodliwego picia oraz zidentyfikowania łagodnego uzależnienia (Saunders i in., 1993) (Załącznik 13).

POBIERANIE PRÓBEK ŚLINY

Próbki śliny będą pobierane przy użyciu fiolek DNA firmy Oragene. Pobranie próbki śliny odbywa się zgodnie z zaleceniami producenta. Pacjent nie powinien jeść, pić, palić ani żuć gumy przez 30 minut przed podaniem próbki śliny. Pacjent musi pluć do pojemnika, aż ilość płynnej śliny (nie bąbelków) osiągnie co najmniej poziom wskazany w instrukcji producenta. Pracownik kładzie pojemnik na płaskiej powierzchni, przykręca nakrętkę do pojemnika i musi upewnić się, że nakrętka jest szczelnie zamknięta. Pojemnik należy delikatnie mieszać przez co najmniej 10 sekund i przechowywać w temperaturze pokojowej.

POBIERANIE PRÓBEK KRWI

Podczas wizyty studyjnej 1-7 zostaną pobrane próbki krwi żylnej. Od każdego uczestnika podczas całego badania zostanie pobrane nie więcej niż 100 ml krwi (nie więcej niż 15 ml podczas każdej wizyty). Do pozyskiwania DNA, RNA i surowicy z krwi zostaną użyte standardowe metody. Poziomy glukozy, insuliny i peptydu C w osoczu będą mierzone za pomocą testu immunologicznego.

POBIERANIE PRÓBEK MOCZU I KAŁU

Mocz i kał będą pobierane przez pacjentów do analizy metabolomicznej do pojemników Sterilin o pojemności 10 ml i 20 ml. próbki kału zostaną pobrane do sterylnych pojemników zawierających 10 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) (zawierającej na litr 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na2HPO4 i 0,24 g KH2PO4 [pH 7,2]) oraz przechowywano w domowych zamrażarkach do czasu przewiezienia do laboratorium, gdzie próbki przechowywano w temperaturze -80°C do dalszej obróbki.

POBIERANIE PRÓBEK TKANEK PODCZAS ZABIEGU

Wszystkie biopsje będą pobierane za pomocą nożyczek i/lub skalpela Harmonic (instrument ultradźwiękowy do preparowania). Tkanka mięśniowa zostanie pobrana ze ściany jamy brzusznej w miejscu troachara. Tkanka wątroby zostanie pobrana z krawędzi lewego płata wątroby poprzez biopsję igłową. Podskórną tkankę tłuszczową można pobrać z nacięcia na troachara (około 2 g), a tkankę tłuszczową trzewną można pobrać z sieci większej przy krzywiźnie większej żołądka. Zostanie to zrobione w czasie operacji i ponownie u każdego pacjenta wymagającego ponownej operacji. Standardowe metody zostaną wykorzystane do przechowywania tkanek oraz do stabilizacji i oczyszczania DNA i RNA z tkanek na potrzeby naszego badania.