Персонализированная медицина при патологическом ожирении

ПРЕДМЕТЫ И ОБРАЗЦЫ

Пациенты с ожирением (n = 2000), обращающиеся в клиники ожирения, эндокринной и медицинской помощи Имперского колледжа здравоохранения NHS Trust, будут набраны при первоначальном обращении в службу. В это исследование будут включены пациенты с ИМТ> 28 кг/м2 в возрасте от 18 до 65 лет.

У субъектов будут взяты образцы крови, слюны, мочи и кала. Пациентов также попросят дать согласие на забор мышечной ткани, печени, подкожной и висцеральной жировой ткани во время операции. Если кому-то из пациентов предстоит повторная операция, то необходимо будет снова собрать образцы крови, мышц, печени, подкожной и висцеральной жировой ткани.

Коллекции образцов из других центров (например, Гётеборга) могут быть проанализированы аналогичным образом наряду с образцами, указанными здесь.

МЕТОДЫ

Исследователи будут использовать методы, соответствующие современному уровню техники на момент проведения анализа. Текущие планы изложены ниже:

Для извлечения ДНК из слюны или крови будут использоваться стандартные современные методы, и все пациенты будут обследованы на наличие моногенного ожирения и диабета.

РНК будет извлечена из крови и тканей для проведения полногеномного анализа экспрессии.

ДНК будет использоваться для проведения полногеномного целевого генотипирования SNP для идентификации eQTL и генетических вариаций, влияющих на результаты бариатрической хирургии.

ДНК будет извлечена из крови и тканей с использованием стандартных методов для проведения эпигенетического анализа.

Пациентов попросят принести образец утренней мочи, а также образец кала для последующего метабономического/метагеномного анализа.

Образцы крови также будут использоваться для измерения С-пептида, уровня глюкозы натощак и инсулина, а также других биомаркеров по мере их поступления. Вес субъекта будет измеряться при каждом последующем посещении. Субъекты также будут проанализированы на наличие ряда фенотипов, связанных с ожирением и сопутствующими ему заболеваниями, а также психологических и связанных с ними результатов.

ПРОТОКОЛ

Первое контактное лицо (на групповой информационной сессии):

1. Устное введение в учебу
2. Информационный лист участника (Приложение 2)
3. Контейнеры для образцов мочи и кала будут переданы пациентам
4. Последующий телефонный контакт в течение 1 недели для получения согласия на первый исследовательский визит

Визит 1: Скрининговый визит (при предоперационной оценке (часть обычного визита)):

1. Дальнейшее объяснение изучения и подтверждение понимания
2. Подписанная форма согласия (Приложение 3)
3. Анкеты по семейной истории
4. Измерение роста, веса, окружности головы, размера стопы и руки (подтверждается фотодокументацией)
5. Психологические опросники (заполняются всеми пациентами до первого визита в рамках исследования при первоначальном направлении в службу борьбы с ожирением для целей аудита. Будет запрошено согласие на их использование во время первого учебного визита)
6. Кровь или слюна
7. Рутинный анализ крови для измерения С-пептида, глюкозы натощак и инсулина
8. Образец утренней мочи и кала

Визит 2 (во время фактической операции):

1. Кровь, мышцы, печень, подкожная и висцеральная жировая ткань

Визит 3 (через 2 дня после операции):

1. Кровь
2. Масса

Визит 4 (10 дней после операции):

1. Кровь
2. Масса
3. Моча

Визит 5 (через 6 месяцев после операции):

1. Кровь
2. Масса

3. Моча

   Визит 6 (через 12 месяцев после операции - часть обычного контрольного визита):

1 Кровь 2 Вес 3 Психологические опросники

Визит 7 (18 месяцев после операции):

1. Образец утренней мочи и кала
2. Масса

АНКЕТЫ

Перед 1-м исследовательским визитом и через 12 месяцев после операции испытуемые заполнят следующие анкеты для оценки пищевого поведения и личностных показателей:

1. Анкета исследования расстройств пищевого поведения (EDEQ) — для определения количества приступов переедания за 28 дней (Fairburn CG, Beglin S Int Jour. Eat Dis 16:363370, 1994) (Приложение 4).
2. Голландский опросник пищевого поведения (DEBQ) для измерения ограничений, эмоциональных и внешних воздействий на пищевое поведение (Wardle J Psychosom Res 31:1619, 1987) (Приложение 5).

4. Опросник трех факторов пищевого поведения (TFEQ) — для измерения сдержанности, расторможенности и голода (Stunkard & Messick. J Psychosom Res 29:7183, 1985) (Приложение 6).

8. Шкала импульсивности Барратта для измерения импульсивности, связанной с перееданием (Patton JM et al. J Clin Psych 51: 76874, 1995; Yeomans MR et al. Аппетит. 50:46976, 2008) (Приложение 7).

9. PANAS – опросник для измерения положительного и отрицательного аффекта (Watson, Clark & ​​Tellegen. J Pers Soc Psych 54(6): 10631070, 1988) (Приложение 8).

10. Тест Fagerstrom на никотиновую зависимость — опросник, оценивающий текущее поведение в отношении курения (Heatherton et al. British Journal of Addiction 86: 1119-1127, 1991) (Приложение 9).

11. Опросник «Влияние веса на качество жизни» (IWQOLLite) — опросник, измеряющий изменение субъективного качества жизни после бариатрической операции (Колоткин и соавт. Obesity Research 9: 102111, 2001) (Приложение 10).

12. SF-36 - для оценки состояния здоровья отдельных пациентов, оценки экономической эффективности лечения, а также для мониторинга и сравнения бремени болезни (McHorney and Ware, 1995) (Приложение 11).

13. Госпитальная шкала тревоги и депрессии – для выявления психического расстройства или депрессии (Спинховен и др., 1997) (Приложение 12).

14. Анкета AUDIT о наркотиках и алкоголе (для выявления ранних признаков опасного и вредного употребления алкоголя и выявления легкой зависимости (Saunders et al., 1993) (Приложение 13).

ЗАБОР СЛЮНЫ

Образцы слюны будут собираться с использованием флаконов для ДНК Oragene. Приобретение образца слюны осуществляется в соответствии с инструкциями производителя. Пациент не должен есть, пить, курить или жевать резинку в течение 30 минут до сдачи образца слюны. Пациент должен плевать в контейнер до тех пор, пока количество жидкой слюны (не пузырьков) не достигнет хотя бы уровня, указанного в инструкции производителя. Сотрудник ставит контейнер на ровную поверхность, завинчивает крышку на контейнер и должен убедиться, что крышка плотно закрыта. Контейнер необходимо осторожно перемешивать в течение не менее 10 секунд и хранить при комнатной температуре.

ЗАБОР КРОВИ

Во время учебного визита 1-7 будут взяты образцы венозной крови. У каждого участника в течение всего исследования будет взято не более 100 мл крови (не более 15 мл в каждое посещение). Для получения ДНК, РНК и сыворотки из крови будут использоваться стандартные методы. Уровни глюкозы, инсулина и С-пептида в плазме будут измеряться с помощью иммуноанализа.

ЗАБОР ПРОБ МОЧИ И КАЛА

Пациенты будут собирать мочу и фекалии для метаболомического анализа в контейнеры Sterilin объемом 10 мл и 20 мл. образцы фекалий будут собираться в стерильные контейнеры, содержащие 10 мл фосфатно-солевого буфера (PBS) (содержащего на литр 8 г NaCl, 0,2 г KCl, 1,44 г Na2HPO4 и 0,24 г KH2PO4 [pH 7,2]) и хранились в домашних морозильных камерах до доставки в лабораторию, где образцы хранились при температуре -80°C до дальнейшей обработки.

ЗАБОР ТКАНЕЙ ВО ВРЕМЯ ОПЕРАЦИИ

Все биопсии будут взяты ножницами и/или скальпелем Harmonic (ультразвуковой инструмент для диссекции). Мышечная ткань будет взята из брюшной стенки в месте троахара. Ткань печени будет взята из края левой доли печени с помощью пункционной биопсии. Подкожно-жировая ткань может быть взята из разреза для троахара (около 2 г), а висцеральная жировая ткань может быть взята из большого сальника на большой кривизне желудка. Это будет сделано во время операции, а также у всех пациентов, нуждающихся в повторной операции. Стандартные методы будут использоваться для хранения тканей, а также для стабилизации и очистки ДНК и РНК из тканей для целей нашего исследования.