Személyre szabott gyógyszer a kóros elhízás kezelésére

TÁRGYAK és MINTÁK

Az Imperial College Healthcare NHS Trust obesity, endokrin és orvosi klinikákon jelentkező elhízott betegeket (n=2000) a szolgálatnak való kezdeti bemutatáskor toborozzák. A vizsgálatba 28 kg/m2 feletti BMI-vel rendelkező és 18-65 év közötti betegeket vonnak be.

Az alanyoktól vér-, nyál-, vizelet- és székletmintát vesznek. A betegek beleegyezését is kérik a műtét során gyűjtött izom-, máj-, bőr alatti és zsigeri zsírszövetekhez. Ha valamelyik betegnél ismételt műtétet kell végezni, akkor ismét vérmintát, izom-, máj-, bőr alatti és zsigeri zsírszövetet kell venni.

Más központokból (pl. Göteborgból) származó mintagyűjtemények is elemezhetők hasonló módon az itt meghatározott minták mellett.

MÓD

A vizsgálók olyan módszereket alkalmaznak, amelyek az elemzés időpontjában a legkorszerűbbet képviselik. A jelenlegi terveket az alábbiakban ismertetjük:

A DNS nyálból vagy vérből történő kinyerésére szabványos jelenlegi módszereket alkalmaznak, és minden beteget megvizsgálnak monogén elhízás és cukorbetegség szempontjából.

Az RNS-t a vérből és a szövetekből vonják ki a genomszintű expressziós elemzés elvégzéséhez.

A DNS-t az eQTL-ek és a bariátriai műtétek kimenetelét befolyásoló genetikai variációk azonosítása érdekében genom-szerte célzott SNP genotipizálás elvégzésére fogják használni.

A DNS-t a vérből és a szövetekből standard módszerekkel vonják ki az epigenetikai elemzések elvégzésére.

A betegeket felkérik, hogy hozzanak magukkal egy kora reggeli vizeletmintát, valamint egy székletmintát a későbbi metabonómiai/metagenómiai elemzésekhez.

A vérmintákat a C-peptid, az éhgyomri glükóz és az inzulin és egyéb biomarkerek mérésére is használják majd, amint elérhetővé válnak. Az alany súlyát minden utóellenőrző látogatás alkalmával megmérik. Az alanyokat az elhízással és társbetegségeivel kapcsolatos fenotípusok, valamint pszichológiai és kapcsolódó kimenetelek tekintetében is elemzik.

JEGYZŐKÖNYV

Első kapcsolattartó (a csoportos információs ülésen):

1. Szóbeli bevezetés a tanuláshoz
2. Résztvevői tájékoztató (2. melléklet)
3. A vizelet- és székletminták tárolására szolgáló konténereket átadják a betegeknek
4. 1 hetes telefonos kapcsolatfelvétel az első tanulmányútra való hozzájárulás érdekében

1. vizit: Szűrő látogatás (műtét előtti értékeléskor (a rutin vizit része)):

1. A tanulmány további magyarázata és a megértés megerősítése
2. Aláírt hozzájárulási űrlap (3. melléklet)
3. Családtörténeti kérdőívek
4. Magasság, súly, fejkörfogat, láb és kéz méretének mérése (fényképi dokumentációval alátámasztva)
5. Pszichológiai kérdőívek (ezeket minden beteg kitölti az első vizsgálati látogatás előtt, az elhízással foglalkozó szolgálathoz való kezdeti beutalással auditálás céljából. Ezek használatához az első tanulmányi látogatás alkalmával hozzájárulást kell kérni)
6. Vér vagy nyál
7. Rutin vérvizsgálat a C-peptid, az éhomi glükóz és az inzulin mérésére
8. Kora reggeli vizelet- és székletminta

2. látogatás (a tényleges műtét során):

1. Vér-, izom-, máj-, szubkután- és zsigeri zsírszövet

3. látogatás (2 nappal a műtét után):

1. Vér
2. Súly

4. látogatás (10 nappal a műtét után):

1. Vér
2. Súly
3. Vizelet

5. látogatás (6 hónappal a műtét után):

1. Vér
2. Súly

3. Vizelet

   6. vizit (12 hónappal a műtét után – a rutin követési vizit része):

1 Vér 2 Súly 3 Pszichológiai kérdőívek

7. látogatás (18 hónappal a műtét után):

1. Kora reggeli vizelet- és székletminta
2. Súly

KÉRDŐÍVEK

Az első tanulmányi látogatás előtt és a műtét után 12 hónappal az alanyok a következő kérdőíveket töltik ki az étkezési viselkedés és a személyiség mérésére:

1. Étkezési zavar vizsgálati kérdőív (EDEQ) – a 28 naponkénti falások számának meghatározására (Fairburn CG, Beglin S Int Jour. Eat Dis 16:363370, 1994) (4. függelék).
2. Holland Eating Behavior Questionnaire (DEBQ) a visszafogottság, az étkezési viselkedésre gyakorolt ​​érzelmi és külső hatások mérésére (Wardle J Psychosom Res 31:1619, 1987) (5. melléklet).

4. Háromfaktoros étkezési kérdőív (TFEQ) – a visszafogottság, a gátlástalanság és az éhség mérésére (Stunkard és Messick. J Psychosom Res 29:7183, 1985) (6. függelék).

8. Barratt Impulzivitás Skála a túlevéssel összefüggésbe hozható impulzivitás mérésére (Patton JM és munkatársai, J Clin Psych 51: 76874, 1995; Yeomans MR et al. Étvágy. 50:46976, 2008) (7. melléklet).

9. PANAS - pozitív és negatív hatást mérő kérdőív (Watson, Clark és Tellegen. J Pers Soc Psych 54(6): 10631070, 1988) (8. függelék).

10. Fagerstrom teszt nikotinfüggőségre – egy kérdőív, amely felméri az aktuális dohányzási magatartást (Heatherton et al. British Journal of Addiction 86: 1119-1127, 1991) (9. melléklet).

11. Impact of Weight on Life Quality Questionnaire (IWQOLLite) – egy kérdőív, amely a bariátriai műtét utáni szubjektív életminőség változását méri (Kolotkin et al. Obesity Research 9: 102111, 2001) (10. melléklet).

12. SF-36 - az egyes betegek egészségi állapotának felmérése, a kezelés költséghatékonyságának értékelése, valamint a betegségteher monitorozása és összehasonlítása (McHorney és Ware, 1995) (11. melléklet).

13. Kórházi szorongás és depresszió skála – a pszichiátriai rendellenesség vagy depresszió azonosítására (Spinhoven et al., 1997) (12. melléklet).

14. AUDIT kábítószer és alkohol kérdőív (a veszélyes és ártalmas ivás korai jeleinek felismerésére és az enyhe függőség azonosítására (Saunders et al., 1993) (13. melléklet).

NYÁLMINTAVETÉS

A nyálmintákat Oragene DNS fiolák segítségével gyűjtik. A nyálminta vétele a gyártó utasításai szerint történik. A nyálminta leadása előtt 30 percig nem szabad enni, inni, dohányozni vagy rágni a gumit. A páciensnek addig kell köpnie a tartályba, amíg a folyékony nyál (nem buborékok) mennyisége el nem éri legalább a gyártó utasításaiban megadott szintet. A személyzet tagja sima felületre helyezi a tartályt, rácsavarja a kupakot a tartályra, és meg kell győződnie arról, hogy a kupak szorosan le van zárva. A tartályt óvatosan kell keverni legalább 10 másodpercig, és szobahőmérsékleten kell tartani.

VÉRVETÉS

Az 1-7. vizsgálati látogatáson vénás vérmintákat vesznek. A teljes vizsgálat során minden résztvevőtől legfeljebb 100 ml vért vesznek le (egy vizit alkalmával legfeljebb 15 ml-t). A DNS, RNS és szérum vérből történő kinyerésére standard módszereket kell alkalmazni. A glükóz, inzulin és C-peptid plazmaszintjét immunoassay-vel mérjük.

VIZELET- ÉS SZÉKLET MINTAVÉTEL

A betegek a vizeletet és a székletet 10 ml-es és 20 ml-es Sterilin tartályokban gyűjtik össze metabolomikus elemzés céljából. a székletmintákat steril tartályokba gyűjtik, amelyek 10 ml foszfáttal pufferolt sóoldatot (PBS) tartalmaznak (literenként 8 g NaCl-t, 0,2 g KCl-t, 1,44 g Na2HPO4-et és 0,24 g KH2PO4-et [pH 7,2]) és házi mélyhűtőben tárolták a laboratóriumba szállításig, ahol a mintákat -80°C-on tárolták a további feldolgozásig.

SZÖVETI MINTAVÉTEL MŰTÉT ALATT

Minden biopsziát ollóval és/vagy Harmonic szikével (ultrahangos műszerrel) vesznek. Izomszövetet vesznek ki a hasfalból egy troachar helyről. A májszövetet a bal májlebeny széléről tűbiopsziával veszik. A troachar (kb. 2 g) bemetszéséből szubkután zsírszövetet, a gyomor nagyobb görbületénél pedig a zsigeri zsírszövetet a fő omentumból vehetjük ki. Ezt a műtét során kell elvégezni, és minden olyan betegnél, akinél ismételt műtétre van szükség. Vizsgálatunk céljaira standard módszereket alkalmazunk a szövetek tárolására, valamint a DNS és RNS stabilizálására és a szövetekből való tisztítására.