病的肥満に対する個別化医療

件名とサンプル

インペリアル・カレッジ・ヘルスケアNHSトラストの肥満・内分泌・内科クリニックを受診する肥満患者(n=2000)は、このサービスへの最初の受診時に採用される。 この研究に含まれる患者は、BMI > 28 kg/m2 で年齢が 18 ～ 65 の患者です。

被験者は血液、唾液、尿、糞便のサンプリングを受けます。 また、手術時に筋肉、肝臓、皮下脂肪、内臓脂肪の組織を採取することについても患者様に同意をいただきます。 患者のいずれかが再手術を受けなければならない場合、血液サンプル、筋肉、肝臓、皮下脂肪組織、内臓脂肪組織を再度採取する必要があります。

他のセンター (ヨーテボリなど) からのサンプルのコレクションも、ここで指定したサンプルと同様の方法で分析できます。

方法

研究者は、分析時点での最先端の手法を使用します。 現在の計画の概要は以下のとおりです。

現在の標準的な方法が唾液または血液から DNA を抽出するために使用され、すべての患者は単一遺伝子性肥満と糖尿病についてスクリーニングされます。

RNA は血液および組織から抽出され、ゲノム全体の発現解析が行われます。

DNA は、eQTL および肥満手術の結果に影響を与える遺伝的変異を同定するために、ゲノム全体を対象とした SNP ジェノタイピングを実行するために使用されます。

エピジェネティック分析を実行するための標準的な方法を使用して、血液および組織から DNA が抽出されます。

患者は、後のメタボノミクス/メタゲノム分析のために、早朝の尿サンプルと糞便サンプルを持参するように求められます。

血液サンプルは、C ペプチド、空腹時血糖、インスリン、その他のバイオマーカーの測定にも使用可能になり次第使用されます。 被験者の体重は、フォローアップ訪問のたびに測定されます。 対象者は、肥満とその併存疾患に関するさまざまな表現型、心理的および関連する結果についても分析されます。

プロトコル

最初の連絡先（グループ説明会時）：

1. 口頭での勉強の紹介
2. 参加者情報シート (付録 2)
3. 尿と便のサンプルを入れる容器が患者に渡されます
4. 最初の研究訪問に進むことに同意するための1週間後のフォローアップ電話連絡

訪問 1: スクリーニング訪問 (手術前評価時 (定期訪問の一部)):

1. 学習内容のさらなる説明と理解の確認
2. 署名済みの同意書 (付録 3)
3. 家族歴アンケート
4. 身長、体重、頭囲、足と手のサイズの測定（写真付​​きドキュメントでサポート）
5. 心理学的アンケート（これらは監査目的で肥満サービスへの最初の紹介時に最初の研究来院前にすべての患者によって記入されます。 これらの使用については、最初の治験訪問時に同意が求められます)
6. 血液とか唾液とか
7. Cペプチド、空腹時血糖、インスリンを測定するための定期的な血液検査
8. 早朝の尿と便のサンプル

訪問 2 (実際の手術中):

1. 血液、筋肉、肝臓、皮下脂肪、内臓脂肪組織

訪問 3 (手術の 2 日後):

1. 血
2. 重さ

訪問 4 (手術後 10 日):

1. 血
2. 重さ
3. 尿

訪問 5 (手術後 6 か月):

1. 血
2. 重さ

3. 尿

   訪問 6 (手術後 12 か月 - 定期的なフォローアップ訪問の一部):

1 血液 2 体重 3 心理学的アンケート

訪問 7 (手術後 18 か月):

1. 早朝の尿と便のサンプル
2. 重さ

アンケート

最初の研究訪問前および手術後 12 か月目に、被験者は食行動と性格の尺度を評価するために次のアンケートに回答します。

1. 摂食障害検査アンケート (EDEQ) - 28 日あたりの過食回数を特定する (Fairburn CG、Beglin S Int Jour. Eat Dis 16:363370、1994) (付録 4)。
2. 食事行動に対する抑制、感情的および外的影響を測定するためのオランダの食事行動アンケート (DEBQ) (Wardle J Psychosom Res 31:1619, 1987) (付録 5)。

4. 3 要素摂食アンケート (TFEQ) - 自制、脱抑制、空腹を測定します (Stunkard & Messick. J Psychosom Res 29:7183、1985) (付録 6)。

8. 過食と関連付けられている衝動性を測定するための Barratt 衝動性スケール (Patton JM et al J Clin Psych 51: 76874, 1995; Yeomans MR et al. 食欲。 50:46976、2008) (付録 7)。

9. PANAS - ポジティブな感情とネガティブな感情を測定するアンケート (Watson、Clark & Telegen. J Pers Soc Psych 54(6): 10631070、1988) (付録 8)。

10. ニコチン依存症のファガーストローム テスト - 現在の喫煙行動を評価するアンケート (Heatherton et al. British Journal of Addiction 86: 1119-1127、1991) (付録 9)。

11. 体重が生活の質に及ぼす影響に関するアンケート (IWQOLLite) - 肥満手術後の主観的な生活の質の変化を測定するアンケート (Kolotkin et al. 肥満研究 9: 102111、2001) (付録 10)。

12. SF-36 - 個々の患者の健康状態を評価し、治療の費用対効果を評価し、疾患負荷を監視および比較するため (McHorney and Ware、1995) (付録 11)。

13. 病院の不安およびうつ病のスケール - 精神障害またはうつ病を特定するため (Spinhoven et al., 1997) (付録 12)。

14. 薬物およびアルコールの監査アンケート（有害な飲酒の初期の兆候を見つけ出し、軽度の依存症を特定するため）（Saunders et al.、1993）（付録 13）。

唾液のサンプリング

唾液サンプルは、Oragene DNA バイアルを使用して収集されます。 唾液サンプルの取得は、製造業者の指示に従って行われます。 患者は、唾液サンプルを採取する前の 30 分間、飲食、喫煙、またはガムを噛んではなりません。 患者は、液体の唾液（泡ではない）の量が少なくともメーカーの説明書に示されているレベルに達するまで、容器に吐き出す必要があります。 スタッフは容器を平らな面に置き、キャップを容器にねじ込み、キャップがしっかりと閉まっていることを確認する必要があります。 容器は少なくとも 10 秒間穏やかに混合し、室温に保つ必要があります。

血液サンプリング

研究訪問 1 ～ 7 で、静脈血サンプルが採取されます。 研究全体を通じて各参加者から採取される血液の量は 100 ml 未満です (各訪問で 15 ml 未満)。 標準的な方法を使用して、血液から DNA、RNA、血清を取得します。 グルコース、インスリンおよびC-ペプチドの血漿レベルはイムノアッセイによって測定されます。

尿と便のサンプリング

尿と便はメタボローム分析のために患者によって 10ml と 20ml のステリリン容器に収集されます。 糞便サンプルは、10 mL のリン酸緩衝食塩水 (PBS) (1 リットルあたり、NaCl 8 g、KCl 0.2 g、Na2HPO4 1.44 g、および KH2PO4 [pH 7.2] 0.24 g を含む) を含む滅菌容器に収集されます。研究室に持ち込まれるまで家庭用冷凍庫で保管され、その後の処理までサンプルは -80°C で保管されました。

手術中の組織サンプリング

すべての生検は、ハサミおよび/またはハーモニックメス (解剖用の超音波機器) を使用して行われます。 筋肉組織は、トロアーの部位の腹壁から採取されます。 肝組織は、針生検によって肝左葉の端から採取されます。 皮下脂肪組織はトロアーの切開部から採取でき（約 2 g）、内臓脂肪組織は胃の大弯にある大網から採取できます。 これは手術時に行われ、再手術が必要な患者には再度行われます。 私たちの研究の目的のために、組織を保存し、組織から DNA と RNA を安定化および精製するために標準的な方法が使用されます。