Medicina personalizzata per l'obesità patologica

SOGGETTI e CAMPIONI

I pazienti obesi (n = 2000) che si presentano alle cliniche mediche, endocrine e di obesità dell'Imperial College Healthcare NHS Trust saranno reclutati alla presentazione iniziale al servizio. I pazienti che saranno inclusi in questo studio sono pazienti con BMI >28 kg/m2 e di età compresa tra 18 e 65 anni.

I soggetti verranno sottoposti a prelievo di sangue, saliva, urine e feci. Ai pazienti verrà inoltre chiesto il consenso per il tessuto adiposo muscolare, epatico, sottocutaneo e viscerale raccolto al momento dell'intervento chirurgico. Se uno qualsiasi dei pazienti deve sottoporsi a un nuovo intervento, sarà necessario prelevare nuovamente il campione di sangue, muscolo, fegato, tessuto adiposo sottocutaneo e viscerale.

Le raccolte di campioni provenienti da altri centri (ad es. Göteborg) possono essere analizzate in modo simile insieme ai campioni qui specificati.

METODI

I ricercatori utilizzeranno metodi che rappresentano lo stato dell'arte al momento dell'analisi. I piani attuali sono descritti di seguito:

Verranno utilizzati metodi standard attuali per estrarre il DNA dalla saliva o dal sangue e tutti i pazienti saranno sottoposti a screening per l'obesità monogenica e il diabete.

L'RNA sarà estratto dal sangue e dai tessuti per eseguire l'analisi dell'espressione dell'intero genoma.

Il DNA verrà utilizzato per eseguire la genotipizzazione di SNP mirati a livello di genoma per l'identificazione di eQTL e di variazioni genetiche che influenzano i risultati della chirurgia bariatrica.

Il DNA verrà estratto dal sangue e dai tessuti utilizzando metodi standard per eseguire analisi epigenetiche.

Ai pazienti verrà chiesto di portare un campione di urina del primo mattino e un campione di feci per successive analisi metabonomiche/metagenomiche.

I campioni di sangue verranno utilizzati anche per misurare il peptide C, il glucosio a digiuno e l'insulina e altri biomarcatori non appena saranno disponibili. Il peso del soggetto verrà preso in ciascuna delle visite di follow-up. I soggetti saranno inoltre analizzati per una serie di fenotipi relativi all'obesità e alla sua comorbilità, nonché per gli esiti psicologici e correlati.

PROTOCOLLO

Primo punto di contatto (alla sessione informativa di gruppo):

1. Introduzione verbale allo studio
2. Scheda informativa del partecipante (Appendice 2)
3. Saranno consegnati ai pazienti contenitori per campioni di urine e feci
4. Contatto telefonico di follow-up di 1 settimana per il consenso a procedere alla prima visita di studio

Visita 1: visita di screening (durante la valutazione preoperatoria (parte della visita di routine)):

1. Ulteriore spiegazione dello studio e conferma della comprensione
2. Modulo di consenso firmato (Appendice 3)
3. Questionari di storia familiare
4. Misurazione di altezza, peso, circonferenza cranica, misura del piede e della mano (supportata da documentazione fotografica)
5. Questionari psicologici (questi sono completati da tutti i pazienti prima della prima visita di studio al momento del rinvio iniziale al servizio di obesità a fini di audit. Verrà richiesto il consenso per utilizzarli durante la prima visita di studio)
6. Sangue o saliva
7. Analisi del sangue di routine per misurare il peptide C, il glucosio a digiuno e l'insulina
8. Campione di urine e feci del primo mattino

Visita 2 (durante l'intervento vero e proprio):

1. Tessuto adiposo sanguigno, muscolare, epatico, sottocutaneo e viscerale

Visita 3 (2 giorni dopo l'intervento):

1. Sangue
2. Peso

Visita 4 (10 giorni dopo l'intervento):

1. Sangue
2. Peso
3. Urina

Visita 5 (6 mesi dopo l'intervento):

1. Sangue
2. Peso

3. Urina

   Visita 6 (12 mesi dopo l'intervento - parte della visita di follow-up di routine):

1 Sangue 2 Peso 3 Questionari psicologici

Visita 7 (18 mesi post-intervento):

1. Campione di urine e feci del primo mattino
2. Peso

QUESTIONARI

Prima della prima visita di studio e 12 mesi dopo l'intervento, i soggetti completeranno i seguenti questionari per valutare il comportamento alimentare e le misure della personalità:

1. Eating Disorder Examination Questionnaire (EDEQ) - per identificare il numero di abbuffate per 28 giorni (Fairburn CG, Beglin S Int Jour. Eat Dis 16:363370, 1994) (Appendice 4).
2. Questionario olandese sul comportamento alimentare (DEBQ) per misurare la moderazione, le influenze emotive ed esterne sul comportamento alimentare (Wardle J Psychosom Res 31:1619, 1987) (Appendice 5).

4. Three Factor Eating Questionnaire (TFEQ) - per misurare moderazione, disinibizione e fame (Stunkard & Messick. J Psychosom Res 29:7183, 1985) (Appendice 6).

8. Barratt Impulsiveness Scale per misurare l'impulsività che è stata collegata all'eccesso di cibo (Patton JM et al J Clin Psych 51: 76874, 1995; Yeomans MR et al. Appetito. 50:46976, 2008) (Appendice 7).

9. PANAS - questionario che misura gli affetti positivi e negativi (Watson, Clark & ​​Tellegen. J Pers Soc Psych 54(6): 10631070, 1988) (Appendice 8).

10. Fagerstrom Test for Nicotine Dependence - un questionario che valuta il comportamento attuale del fumo (Heatherton et al. British Journal of Addiction 86: 1119-1127, 1991) (Appendice 9).

11. Impact of Weight on Quality of Life Questionnaire (IWQOLLite) - un questionario che misura il cambiamento nella qualità soggettiva della vita dopo la chirurgia bariatrica (Kolotkin et al. Obesity Research 9: 102111, 2001) (Appendice 10).

12. SF-36 - valutare la salute dei singoli pazienti, valutare il rapporto costo-efficacia di un trattamento e monitorare e confrontare il carico di malattia (McHorney e Ware, 1995) (Appendice 11).

13. Hospital Anxiety and Depression Scale - per identificare disturbi psichiatrici o depressione (Spinhoven et al., 1997) (Appendice 12).

14. Questionario AUDIT su droghe e alcol (per cogliere i primi segni di consumo pericoloso e dannoso e identificare una lieve dipendenza (Saunders et al., 1993) (Appendice 13).

CAMPIONAMENTO SALIVA

I campioni di saliva saranno raccolti utilizzando fiale di DNA Oragene. L'acquisizione del campione di saliva viene effettuata secondo le istruzioni del produttore. Il paziente non deve mangiare, bere, fumare o masticare gomma per 30 minuti prima di dare il campione di saliva. Il paziente deve sputare nel contenitore finché la quantità di saliva liquida (non bolle) raggiunge almeno il livello indicato nelle istruzioni del produttore. Il membro del personale appoggia il contenitore su una superficie piana, avvita il tappo sul contenitore e deve assicurarsi che il tappo sia ben chiuso. Il contenitore deve essere miscelato delicatamente per almeno 10 secondi e mantenuto a temperatura ambiente.

PRELIEVO DEL SANGUE

Alla visita di studio 1-7, verranno prelevati campioni di sangue venoso. Non verranno prelevati più di 100 ml di sangue da ciascun partecipante durante l'intero studio (non più di 15 ml per ogni visita). Verranno utilizzati metodi standard per ottenere DNA, RNA e siero dal sangue. I livelli plasmatici di glucosio, insulina e C-peptide saranno misurati mediante saggio immunologico.

PRELIEVO DI URINE E FECI

L'urina e le feci saranno raccolte dai pazienti per l'analisi metabolomica in contenitori Sterilin da 10 ml e 20 ml. i campioni di feci saranno raccolti in contenitori sterili contenenti 10 mL di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) (contenente, per litro, 8 g di NaCl, 0,2 g di KCl, 1,44 g di Na2HPO4 e 0,24 g di KH2PO4 [pH 7,2]) e conservati in congelatori domestici fino a quando non sono stati portati in laboratorio dove i campioni sono stati conservati a -80°C fino all'ulteriore elaborazione.

CAMPIONAMENTO DI TESSUTO DURANTE L'INTERVENTO

Tutte le biopsie saranno prelevate con forbici e/o bisturi Harmonic (strumento ad ultrasuoni per dissezione). Il tessuto muscolare verrà prelevato dalla parete addominale in corrispondenza di un sito di troachar. Il tessuto epatico verrà prelevato dal bordo del lobo epatico sinistro tramite agobiopsia. Il tessuto adiposo sottocutaneo può essere prelevato da un'incisione per un troachar (circa 2 g) e il tessuto adiposo viscerale può essere prelevato dall'omento maggiore in corrispondenza della maggiore curvatura dello stomaco. Questo sarà fatto al momento dell'intervento e di nuovo in tutti i pazienti che richiedono un nuovo intervento. Verranno utilizzati metodi standard per conservare i tessuti e per stabilizzare e purificare il DNA e l'RNA dai tessuti ai fini del nostro studio.