Poziomy IL-6, IL-17 i IL-35 w płynie dziąsłowym pacjentów z zapaleniem przyzębia i zdrowych osób z grupy kontrolnej

IL-35 to cząsteczka sygnałowa nowej generacji należąca do rodziny cytokin IL 12. Jest wytwarzany przez komórki regulatorowe T (Treg) składające się z łańcucha Α (p35). Ostatnie badania wykazały, że IL-35 jest cytokiną przeciwzapalną. Hamuje odpowiedź immunologiczną poprzez ekspansję Treg i hamowanie wzrostu komórek Th17.

Interleukina-17 (IL-17) jest prozapalną cytokiną wydzielaną przez komórki T-17. Jest silnym aktywatorem neutrofili, ponieważ reguluje G-CSF oraz ekspresję receptorów i chemokin. Jego podwyższony poziom udokumentowano w przewlekłym zapaleniu przyzębia. W obecności P. gingivalis obserwuje się wzrost IL-17 i IL-23. Chociaż zapalenie przyzębia (P. gingivalis) indukuje IL-17, sugerowano również ochronną rolę IL-17 przed resorpcją kości. IL-17 wytwarza IL-6, IL-8 poprzez oddziaływanie na fibroblasty.

IL-6 jest wytwarzana przez wiele komórek w odpowiedzi na LPS i pełni rolę zarówno prozapalną, jak i przeciwzapalną. Bierze udział w procesach zapalnych, regeneracyjnych, metabolicznych i nerwowych. Poziom IL-6 badano w różnych badaniach w surowicy, ślinie i płynach dziąsłowych. Zgłaszano badania nad zwiększonym poziomem IL-6 w płynie z bruzd dziąsłowych w przewlekłym zapaleniu przyzębia oraz badania ze znacznym spadkiem stężenia w surowicy po niechirurgicznym leczeniu przewlekłego zapalenia przyzębia. Istnieją jednak również badania, które nie wykazują istotnej różnicy w poziomach różnych cytokin w ślinie osób z przewlekłym zapaleniem przyzębia i osób zdrowych.

Pomiary kliniczne obejmują wskaźnik płytki nazębnej (PI), wskaźnik dziąseł (GI), krwawienie podczas sondowania (BOP), głębokość sondowania (PD), poziom przyczepu klinicznego (CAL), położenie krawędzi dziąseł (DKK) i parametry ruchliwości. Pomiary będą rejestrowane z sześciu różnych punktów wszystkich zębów przez tego samego badacza za pomocą sondy periodontologicznej typu Williamsa (Hu-Friedy, USA).

1. Zdrowe grupy kontrolne:

   Badanie obejmowało osoby z klinicznie zdrowymi dziąsłami na nienaruszonym przyzębiu, u których wskaźnik BOP wynosił mniej niż 10% i PD≤3 mm, u których nie wykazano utraty przyczepu ani utraty kości na zdjęciu radiograficznym.

2. Grupy stopnia B-C / stadium III-IV zapalenia przyzębia:

Stopień B: Umiarkowane tempo progresji Obserwuje się umiarkowaną utratę kości w porównaniu z biofilmem, a % utraty kości korzenia/wiek od 0,25 do 1,0 określa się jako stopień B.

Stopień III: Ciężkie zapalenie przyzębia z możliwością utraty dodatkowych zębów Badanie obejmowało osoby z AL międzyzębowym ≥5 mm, radiograficznym ubytkiem kości sięgającym do środkowej lub wierzchołkowej trzeciej części korzenia, PD≥6 mm i utratą zębów spowodowaną zapaleniem przyzębia ≤4.

Stopień C: Szybkie tempo progresji Obserwuje się szybką utratę kości w porównaniu z biofilmem, a % utraty kości korzenia/wiek >1,0 określa się jako stopień C.

Stopień IV: Zaawansowane zapalenie przyzębia z rozległą utratą zębów i możliwością utraty uzębienia Badanie obejmowało osoby z AL międzyzębowym ≥5 mm, radiograficznym ubytkiem kości sięgającym do środkowej lub wierzchołkowej trzeciej części korzenia, PD≥6 mm i utratą zębów z powodu zapalenia przyzębia ≥ 5. Konieczność kompleksowej rehabilitacji z powodu: Dysfunkcji narządu żucia, Wtórnego urazu okluzyjnego (stopień ruchomości zębów ≥2) Ciężkiej wady wyrostka zębodołowego, Zapadania się zgryzu, dryfowania, rozbłysków. Mniej niż 20 pozostałych zębów (10 przeciwstawnych par)

Grupa chorób przyzębia:

• 18-65 lat
• Brak jakiejkolwiek choroby ogólnoustrojowej (choroby, które nie wpływają na stan przyzębia)
• Niepalący
• W ciągu ostatnich 6 miesięcy nie otrzymywał antybiotyków i/lub nie stosował leków immunosupresyjnych
• Nie był wcześniej leczony periodontologicznie
• Brak statusu ciąży i karmienia piersią
• Niestosowanie regularnie żadnych leków
• Posiadanie co najmniej 20 zębów
• Osoby z chorobą przyzębia stopnia B-C w stopniu III-IV według Klasyfikacji chorób i schorzeń przyzębia i okolic implantów z 2017 r.

Zdrowa grupa:

U pacjentów, którzy zgłosili się na Wydział Stomatologii Uniwersytetu w Stambule, Zakład Periodontologii, do badania zostaną włączone osoby zdrowe pod względem przyzębia, które nie spełniają powyższych kryteriów chorobowych, u których nie występowały żadne choroby przyzębia w wywiadzie.

Próbki pasków papieru (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) umieszczone w dziąśle zostaną umieszczone w probówkach Eppendorfa do badań laboratoryjnych w sesji 1 tydzień po dokładnym określeniu stanu przyzębia na podstawie pomiarów periodontologicznych. Próbki będą pobierane z obszarów o największej głębokości sondowania. Podczas pobierania próbek płynu dziąsłowego obszar zostanie odizolowany płatkami kosmetycznymi, płytka bakteryjna nazębna na zębie zostanie usunięta za pomocą płatków bawełnianych oraz zostanie przeprowadzony proces krótkotrwałego suszenia odświeżaczem powietrza z odległości 20 cm w temp. kąt prosty. Następnie standardowe chłonne paski bibuły o wymiarach 2x8 mm zostaną umieszczone z niewielkim oporem od obszarów stycznych do wejścia szczeliny i pozostawione na 30 sekund, następnie każdy pasek bibuły zostanie umieszczony w tej samej probówce Eppendorfa dla każdego pacjenta i będzie przechowywany w -80 °C. (Nowa zamrażarka naukowa firmy Brunswick o bardzo niskiej temperaturze). Próbki zostaną pobrane z 4 zębów każdego pacjenta. W przypadku krwawienia z szczeliny dziąsłowej podczas pobierania próbki, pasek papieru zostanie wyrzucony. Próbki zostaną wyizolowane z kieszonki dziąsłowej za pomocą pasków bibuły chłonnej (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) i przeprowadzone zostaną analizy biochemiczne w próbkach metodą ELISA zgodnie z protokołami zawartymi w zestaw.

Dane opisowe uzyskane w badaniu zostaną podane jako średnia ± odchylenie standardowe (mediana (min-max) dla każdej grupy. Testowanie Założenia Normalności za pomocą Testowania Hipotez, Testowanie Hipotez będzie analizowane za pomocą testów Kołmogorowa - Smirnowa lub Shapiro-Wilka.

Średnie różnice dla każdej grupy w porównaniach dla dwóch grup w analizach; test t w grupach niezależnych w przypadkach, gdy dane wykazują rozkład normalny, w przypadkach, gdy dane nie wykazują rozkładu normalnego; Zastosowany zostanie test U Manna-Whitneya.

W więcej niż dwóch grupach zostanie zastosowana jednokierunkowa ANOVA w przypadkach, gdy dane mają rozkład normalny; Z testem Tukeya zostaną wykonane wielokrotne porównania. W przypadkach, gdy dane nie wykazują rozkładu normalnego, zostanie przeanalizowany test H Kruskala-Wallisa, a porównania wielokrotne zostaną przeanalizowane za pomocą metody nieparametrycznej S-N-K (test Studenta Newmana-Keulsa). Istotność statystyczna zostanie uznana za p<0,05 i dwukierunkową.

Według Klasyfikacji Chorób i Schorzeń Przyzębia i Periimplantów z 2017 r. średnio 11 jednostek różnicy między wynikami uzyskanymi z biomarkerów interleukinowych w grupie osób z zapaleniem przyzębia stopnia B-C w stopniu III-IV i osobami zdrowymi oraz minimalną próbą do znaleźć szacunkową wielkość odchylenia standardowego wynoszącą 15 jednostek (przyjmując błąd I rodzaju 5%, błąd II rodzaju 20% przy założeniu potęgi 0,80): 30 osób w każdej grupie. Biorąc pod uwagę niewłaściwe próbki, do każdej grupy zostanie przydzielonych 30+30 osób (30 zdrowych osób kontrolnych, 30 przypadków zapalenia przyzębia).