Livelli di IL-6, IL-17 e IL-35 nel fluido crevicolare gengivale di pazienti con parodontite e controlli sani

IL-35 è una molecola di segnalazione di nuova generazione appartenente alla famiglia delle citochine IL 12. È prodotto dalle cellule T-regolatrici (Treg) costituite dalla catena Α (p35). Studi recenti hanno dimostrato che IL-35 è una citochina antinfiammatoria. Sopprime la risposta immunitaria attraverso l'espansione di Treg e la soppressione della crescita delle cellule Th17.

L'interleuchina-17 (IL-17) è una citochina proinfiammatoria secreta dalle cellule T-17. È un potente attivatore dei neutrofili in quanto regola il G-CSF e l'espressione del recettore e delle chemochine. Il suo livello aumentato è stato documentato nella parodontite cronica. In presenza di P. gingivalis si osserva un aumento di IL-17 e IL-23. Sebbene l'infezione parodontale (P. gingivalis) induce IL-17, è stato anche suggerito un ruolo protettivo di IL-17 contro il riassorbimento osseo. IL-17 produce IL-6, IL-8 influenzando i fibroblasti.

IL-6 è prodotto da molte cellule in risposta a LPS e ha ruoli sia pro-infiammatori che anti-infiammatori. È coinvolto nei processi infiammatori, rigenerativi, metabolici e neurali. Il livello di IL-6 è stato studiato in diversi studi nel siero, nella saliva e nei fluidi del solco gengivale. Sono stati segnalati studi con livelli aumentati di IL-6 nel fluido del solco gengivale nella parodontite cronica e studi con diminuzioni significative nel siero dopo il trattamento non chirurgico della parodontite cronica. Tuttavia, ci sono anche studi che non mostrano una differenza significativa nei livelli di varie citochine nella saliva della parodontite cronica e degli individui sani.

Le misurazioni cliniche includono l'indice di placca (PI), l'indice gengivale (GI), il sanguinamento al sondaggio (BOP), la profondità di sondaggio (PD), il livello di attacco clinico (CAL), la posizione del margine gengivale (DKK) e i parametri di mobilità. Le misurazioni saranno registrate da sei diversi punti di tutti i denti dallo stesso ricercatore con una sonda parodontale di tipo Williams (Hu-Friedy, USA).

1. Gruppi di controllo sani:

   Consisteva in individui con gengiva clinicamente sana su un parodonto intatto che avevano un punteggio BOP inferiore al 10% e PD≤3 mm, non mostravano perdita di attacco o perdita ossea radiografica.

2. Gruppi di parodontite di grado B-C / stadio III-IV:

Grado B: tasso di progressione moderato Si osserva una perdita ossea moderata rispetto al biofilm e la percentuale di perdita ossea radicolare/età da 0,25 a 1,0 è determinata come grado B.

Stadio III: parodontite grave con possibilità di ulteriore perdita dei denti Costituito da individui con AL interdentale ≥5 mm, perdita ossea radiografica che si estende al terzo medio o apicale della radice, PD≥6 mm e perdita dei denti dovuta a parodontite ≤4.

Grado C: rapido tasso di progressione Si osserva una rapida perdita ossea rispetto al biofilm e la percentuale di perdita ossea radicolare/età >1,0 è determinata come grado C.

Stadio IV: parodontite avanzata con estesa perdita dei denti e potenziale perdita della dentizione Costituito da individui con AL interdentale ≥5 mm, perdita ossea radiografica che si estende al terzo medio o apicale della radice, PD≥6 mm e perdita dei denti dovuta a parodontite ≥ 5. Necessità di riabilitazione complessa a causa di: disfunzione masticatoria, trauma occlusale secondario (grado di mobilità dei denti ≥2) grave difetto della cresta, collasso del morso, deriva, allargamento. Meno di 20 denti rimanenti (10 coppie opposte)

Gruppo parodontite:

• 18-65 anni
• Non avere alcuna malattia sistemica (malattie che non influenzano lo stato parodontale)
• Non fumatore
• Non ha ricevuto cure antibiotiche e/o non ha usato farmaci immunosoppressori negli ultimi 6 mesi
• Non hanno ricevuto alcun trattamento parodontale prima
• Nessuno stato di gravidanza e allattamento
• Non usare regolarmente alcun farmaco
• Avere almeno 20 denti
• Quelli con malattia parodontale di grado B-C stadio III-IV secondo la Classificazione 2017 delle malattie e condizioni parodontali e perimplantari

Gruppo sano:

Nei pazienti che hanno presentato domanda alla Facoltà di Odontoiatria, Dipartimento di Parodontologia dell'Università di Istanbul, verranno inclusi nello studio individui parodontalmente sani che non soddisfano i criteri di malattia di cui sopra, che non hanno in alcun modo una storia di parodontite.

Campioni di strisce di carta (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) posizionati nel crevicolo gengivale verranno inseriti in tubi eppendorf per l'esame di laboratorio nella sessione 1 settimana dopo che l'esatto stato parodontale è stato determinato dalle misurazioni parodontali. I campioni saranno prelevati dalle aree con la maggiore profondità di sondaggio. Durante l'ottenimento di campioni di fluido crevicolare gengivale, l'area verrà isolata con tamponi di cotone, la placca dentale microbica sul dente verrà rimossa con pellet di cotone e verrà eseguito un processo di asciugatura a breve termine con deodorante per ambienti da una distanza di 20 cm a un angolo retto. Quindi, strisce di carta assorbente standard da 2x8 mm verranno posizionate dalle regioni approssimali all'ingresso del crevicolare con una leggera resistenza e lasciate per 30 secondi, quindi ciascuna striscia di carta verrà posizionata nella stessa provetta eppendorf per ciascun paziente e conservata a -80 °C. (Nuovo congelatore Brunswick Scientific a temperatura ultra bassa). I campioni saranno prelevati da 4 denti in ciascun paziente. In caso di sanguinamento nel crevicolo gengivale durante la raccolta del campione, la striscia di carta verrà eliminata. I campioni saranno isolati dal crevicolo gengivale con l'ausilio di strisce di carta assorbente (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) e le analisi biochimiche saranno effettuate nei campioni mediante metodo ELISA secondo i protocolli inclusi nel kit.

I dati descrittivi ottenuti nello studio saranno forniti come media ± deviazione standard (mediana (min-max) per ciascun gruppo. Testare l'ipotesi di normalità con il test di ipotesi, il test di ipotesi sarà analizzato con i test di Kolmogorov - Smirnov o Shapiro-Wilk.

Le differenze medie per ciascun gruppo nei confronti dei due gruppi nelle analisi; t-test in gruppi indipendenti nei casi in cui i dati mostrano una distribuzione normale, nei casi in cui i dati non mostrano una distribuzione normale; Verrà utilizzato il test U di Mann-Whitney.

In più di due gruppi, verrà utilizzato One Way ANOVA nei casi in cui i dati sono normalmente distribuiti; Verranno effettuati confronti multipli con il Tukey test. Nei casi in cui i dati non mostrano una distribuzione normale, verrà analizzato il test Kruskal-Wallis H e verranno analizzati confronti multipli con il metodo S-N-K non parametrico (test di Student Newman-Keuls). La significatività statistica sarà considerata come p<0.05 e bidirezionale.

Secondo la Classificazione delle malattie e delle condizioni parodontali e perimplantari del 2017, una differenza media di 11 unità tra i risultati ottenuti dai biomarcatori dell'interleuchina nel gruppo di individui con parodontite di stadio III-IV di grado B-C e individui sani, e un campione minimo da trova la dimensione significativa della deviazione standard stimata di 15 unità (assumendo un errore di tipo I del 5%, errore di tipo II del 20% assumendo una potenza di 0,80): 30 persone per ogni gruppo. Considerando i campioni sbagliati, verranno prese 30+30 persone in ciascun gruppo (30 controlli sani, 30 casi di parodontite).