Niveles de IL-6, IL-17 e IL-35 en el líquido crevicular gingival de pacientes con periodontitis y controles sanos

IL-35 es una molécula de señalización de próxima generación que pertenece a la familia de citoquinas IL 12. Es producido por las células T reguladoras (Treg) que consisten en la cadena Α (p35). Estudios recientes han demostrado que la IL-35 es una citocina antiinflamatoria. Suprime la respuesta inmune a través de la expansión de Treg y la supresión del crecimiento de células Th17.

La interleucina-17 (IL-17) es una citocina proinflamatoria secretada por las células T-17. Es un potente activador de los neutrófilos ya que regula el G-CSF y la expresión de receptores y quimiocinas. Su nivel elevado se ha documentado en la periodontitis crónica. En presencia de P. gingivalis se observa un aumento de IL-17 e IL-23. Aunque la infección periodontal (P. gingivalis) induce IL-17, también se ha sugerido un papel protector de IL-17 contra la resorción ósea. IL-17 produce IL-6, IL-8 al afectar a los fibroblastos.

La IL-6 es producida por muchas células en respuesta al LPS y tiene funciones tanto proinflamatorias como antiinflamatorias. Interviene en procesos inflamatorios, regenerativos, metabólicos y neurales. El nivel de IL-6 se ha investigado en diferentes estudios en suero, saliva y fluidos del surco gingival. Se han informado estudios con niveles elevados de IL-6 en el líquido del surco gingival en la periodontitis crónica y estudios con disminuciones significativas en el suero después del tratamiento no quirúrgico de la periodontitis crónica. Sin embargo, también hay estudios que no muestran una diferencia significativa en los niveles de varias citocinas en la saliva de personas con periodontitis crónica e individuos sanos.

Las mediciones clínicas incluyen el índice de placa (PI), el índice gingival (GI), el sangrado al sondaje (BOP), la profundidad de sondaje (PD), el nivel de inserción clínica (CAL), la posición del margen gingival (DKK) y los parámetros de movilidad. Las mediciones serán registradas desde seis puntos diferentes de todos los dientes por el mismo investigador con una sonda periodontal tipo Williams (Hu-Friedy, EE. UU.).

1. Grupos de control sanos:

   Consistió en individuos con encía clínicamente sana en un periodonto intacto que tenían una puntuación BOP inferior al 10 % y PD≤3 mm, sin pérdida de inserción ni pérdida ósea radiográfica.

2. Grupos de periodontitis Grado B-C / Etapa III-IV:

Grado B: tasa de progresión moderada Se observa una pérdida ósea moderada en comparación con el biofilm y el % de pérdida de hueso radicular/edad de 0,25 a 1,0 se determina como grado B.

Etapa III: Periodontitis severa con potencial de pérdida de dientes adicional Consistió en individuos con AL interdental ≥5 mm, pérdida ósea radiográfica que se extiende al tercio medio o apical de la raíz, PD≥6 mm y pérdida de dientes debido a periodontitis de ≤4.

Grado C: tasa rápida de progresión Se observa una pérdida ósea rápida en comparación con la biopelícula y el % de pérdida de hueso radicular/edad >1,0 se determina como grado C.

Etapa IV: periodontitis avanzada con pérdida extensa de dientes y potencial de pérdida de la dentición Consistió en individuos con AL interdental ≥ 5 mm, pérdida ósea radiográfica que se extiende al tercio medio o apical de la raíz, PD ≥ 6 mm y pérdida de dientes debido a periodontitis de ≥ 5. Necesidad de rehabilitación compleja debido a: Disfunción masticatoria, Trauma oclusal secundario (grado de movilidad dental ≥2) Defecto severo de la cresta, Colapso de la mordida, deriva, ensanchamiento. Menos de 20 dientes restantes (10 pares opuestos)

Grupo Periodontitis:

• 18-65 años
• No tener ninguna enfermedad sistémica (enfermedades que no afectan el estado periodontal)
• No fumador
• No haber recibido tratamiento antibiótico y/o usado medicación inmunosupresora en los últimos 6 meses
• No haber recibido ningún tratamiento periodontal antes
• Sin estado de embarazo y lactancia
• No usar ningún medicamento regularmente
• Tener al menos 20 dientes
• Aquellos con enfermedad periodontal grado B-C estadio III-IV según la Clasificación de Enfermedades y Condiciones Periodontales y Periimplantarias de 2017

Grupo Saludable:

En los pacientes que postularon a la Facultad de Odontología de la Universidad de Estambul, Departamento de Periodoncia, se incluirán en el estudio individuos periodontalmente sanos que no cumplan con los criterios de enfermedad anteriores, que no tengan antecedentes de periodontitis de ninguna manera.

Muestras de tiras de papel (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, EE. UU.) colocadas en el surco gingival se colocarán en tubos eppendorf para examen de laboratorio en la sesión 1 semana después de determinar el estado periodontal exacto mediante mediciones periodontales. Las muestras se tomarán de las áreas con mayor profundidad de sondeo. Mientras se obtienen muestras de líquido crevicular gingival, se aislará la zona con algodón, se eliminará la placa dental microbiana del diente con bolitas de algodón y se realizará un proceso de secado breve con ambientador a una distancia de 20 cm a una distancia de 20 cm. un ángulo recto Luego, se colocarán tiras de papel absorbente estándar de 2x8 mm desde las regiones proximales hasta la entrada del crevicular con una ligera resistencia y se dejarán por 30 segundos, luego se colocará cada tira de papel en el mismo tubo eppendorf para cada paciente y se almacenará a -80 ºC (Congelador científico de ultra baja temperatura de New Brunswick). Se tomarán muestras de 4 dientes de cada paciente. En caso de sangrado en el surco gingival durante la toma de muestra, se desechará la tira de papel. Las muestras se aislarán del crevicular gingival con la ayuda de tiras de papel absorbente (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, EE. UU.) y se realizarán análisis bioquímicos en las muestras por método ELISA de acuerdo con los protocolos incluidos en el equipo.

Los datos descriptivos obtenidos en el estudio se darán como Media ± Desviación Estándar (mediana (mín-máx) para cada grupo. Probando el Supuesto de Normalidad con la Prueba de Hipótesis, la Prueba de Hipótesis se analizará con las pruebas de Kolmogorov - Smirnov o Shapiro-Wilk.

Las diferencias medias de cada grupo en las comparaciones de los dos grupos en los análisis; prueba t en grupos independientes en los casos en que los datos muestren una distribución normal, en los casos en que los datos no muestren una distribución normal; Se utilizará la prueba U de Mann-Whitney.

En más de dos grupos, se utilizará ANOVA de una vía en los casos en que los datos se distribuyan normalmente; Se realizarán múltiples comparaciones con la prueba de Tukey. En los casos en que los datos no muestren una distribución normal, se analizará la prueba H de Kruskal-Wallis y las comparaciones múltiples se analizarán con el Método S-N-K No Paramétrico (Test de Student Newman-Keuls). Se considerará significancia estadística como p< 0,05 y bidireccional.

Según la Clasificación de Enfermedades y Afecciones Periodontales y Periimplantarias de 2017, una diferencia media de 11 unidades entre los resultados obtenidos de biomarcadores de interleucina en el grupo de individuos con periodontitis grado B-C estadio III-IV e individuos sanos, y una muestra mínima para encuentre el tamaño significativo de la desviación estándar estimada de 15 unidades (suponiendo un error de tipo I del 5 %, un error de tipo II del 20 % suponiendo una potencia de 0,80): 30 personas para cada grupo. Teniendo en cuenta las muestras incorrectas, se incluirán 30+30 personas en cada grupo (30 controles sanos, 30 casos de periodontitis).