Уровни IL-6, IL-17 и IL-35 в жидкости десневой борозды у пациентов с пародонтитом и у здоровых людей

IL-35 представляет собой сигнальную молекулу нового поколения, принадлежащую к семейству цитокинов IL-12. Его продуцируют Т-регуляторные клетки (Трег), состоящие из А-цепи (р35). Недавние исследования показали, что IL-35 является противовоспалительным цитокином. Он подавляет иммунный ответ за счет экспансии Treg и подавления роста клеток Th17.

Интерлейкин-17 (ИЛ-17) представляет собой провоспалительный цитокин, секретируемый клетками Т-17. Он является мощным активатором нейтрофилов, поскольку регулирует экспрессию G-CSF, рецепторов и хемокинов. Его повышенный уровень зафиксирован при хроническом пародонтите. В присутствии P. gingivalis наблюдается увеличение IL-17 и IL-23. Хотя пародонтальная инфекция (P. gingivalis) индуцирует IL-17, также предполагается защитная роль IL-17 против резорбции кости. ИЛ-17 продуцирует ИЛ-6, ИЛ-8, воздействуя на фибробласты.

ИЛ-6 продуцируется многими клетками в ответ на ЛПС и играет как провоспалительную, так и противовоспалительную роль. Он участвует в воспалительных, регенеративных, метаболических и нервных процессах. Уровень ИЛ-6 изучался в различных исследованиях в сыворотке, слюне и жидкостях десневой борозды. Сообщалось об исследованиях с повышенным уровнем ИЛ-6 в жидкости десневой борозды при хроническом периодонтите и об исследованиях со значительным снижением уровня в сыворотке крови после нехирургического лечения хронического периодонтита. Однако есть и исследования, не показывающие значимой разницы уровней различных цитокинов в слюне больных хроническим пародонтитом и здоровых лиц.

Клинические измерения включают индекс зубного налета (PI), индекс десны (GI), кровоточивость при зондировании (BOP), глубину зондирования (PD), уровень клинического прикрепления (CAL), положение края десны (DKK) и параметры подвижности. Измерения будут записаны в шести различных точках всех зубов одним и тем же исследователем с помощью пародонтального зонда типа Вильямса (Hu-Friedy, США).

1. Здоровые контрольные группы:

   Включали лиц с клинически здоровой десной на интактном периодонте, у которых показатель BOP был менее 10% и PD≤3 мм, не было выявлено потери прикрепления или рентгенологической потери кости.

2. Группы периодонтита B-C/Стадии III-IV:

Степень B: Умеренная скорость прогрессирования Наблюдается умеренная потеря костной массы по сравнению с биопленкой, и % потери корневой кости/возраст от 0,25 до 1,0 определяется как степень B.

Стадия III: тяжелый пародонтит с потенциальной дополнительной потерей зубов. Состоит из пациентов с межзубным AL ≥5 мм, радиографической потерей кости, распространяющейся на среднюю или апикальную треть корня, PD ≥6 мм и потерей зубов из-за пародонтита ≤4.

Степень C: Быстрая скорость прогрессирования Наблюдается быстрая потеря костной ткани по сравнению с биопленкой, и % потери корневой кости/возраст >1,0 определяется как степень C.

Стадия IV: Запущенный периодонтит с обширной потерей зубов и потенциальной потерей зубного ряда Состоит из пациентов с межзубным AL ≥5 мм, радиографической потерей кости, распространяющейся на среднюю или апикальную треть корня, PD ≥6 мм и потерей зубов из-за пародонтита ≥ 5. Необходимость комплексной реабилитации в связи с: жевательной дисфункцией, вторичной окклюзионной травмой (степень подвижности зубов ≥2), тяжелым дефектом альвеолярного отростка, нарушением прикуса, смещением, расширением. Осталось менее 20 зубов (10 противоположных пар)

Группа пародонтита:

• 18-65 лет
• Отсутствие каких-либо системных заболеваний (заболевания, не влияющие на состояние пародонта)
• Некурящий
• Не получали лечение антибиотиками и/или не принимали иммунодепрессанты в течение последних 6 месяцев.
• Ранее не проходил пародонтологическое лечение.
• Отсутствие беременности и кормления грудью
• Не использовать какие-либо лекарства регулярно
• Наличие не менее 20 зубов
• Пациенты с заболеванием пародонта III-IV стадии B-C в соответствии с Классификацией пародонтальных и периимплантатных заболеваний и состояний 2017 г.

Здоровая группа:

Среди пациентов, обратившихся на факультет стоматологии Стамбульского университета, кафедра пародонтологии, в исследование будут включены здоровые пародонтологи, не соответствующие вышеуказанным критериям заболевания, не имеющие в анамнезе пародонтита.

Образцы бумажных полосок (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA), помещенных в десневую борозду, будут помещены в пробирки eppendorf для лабораторного исследования во время сеанса через 1 неделю после определения точного состояния пародонта путем пародонтальных измерений. Пробы будут браться из участков с наибольшей глубиной зондирования. При заборе образцов жидкости десневой борозды область изолируют ватными дисками, микробный зубной налет на зубе удаляют ватными тампонами и проводят кратковременную сушку освежителем воздуха с расстояния 20 см при прямой угол. Затем стандартные абсорбирующие бумажные полоски размером 2x8 мм помещают из апроксимальных областей к входу в щель с небольшим сопротивлением и оставляют на 30 секунд, после чего каждую бумажную полоску помещают в одну и ту же пробирку Эппендорф для каждого пациента и хранят при -80 °С. (Научная сверхнизкотемпературная морозильная камера New Brunswick). Образцы будут взяты из 4 зубов у каждого пациента. В случае кровотечения в десневой борозде во время взятия образца бумажная полоска будет утилизирована. Образцы будут изолированы от десневой борозды с помощью впитывающих бумажных полосок (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) и в образцах будут проведены биохимические анализы методом ELISA в соответствии с протоколами, включенными в набор.

Описательные данные, полученные в ходе исследования, будут представлены как среднее значение ± стандартное отклонение (медиана (минимум-макс) для каждой группы. Проверка предположения о нормальности с помощью проверки гипотез. Проверка гипотез будет анализироваться с помощью тестов Колмогорова-Смирнова или Шапиро-Уилка.

Средние различия для каждой группы в сравнении двух групп в анализе; t-тест в независимых группах в случаях, когда данные показывают нормальное распределение, в случаях, когда данные не показывают нормальное распределение; Будет использоваться критерий Манна-Уитни U.

В более чем двух группах однофакторный дисперсионный анализ будет использоваться в случаях, когда данные распределены нормально; Множественные сравнения будут сделаны с помощью теста Тьюки. В случаях, когда данные не показывают нормальное распределение, будет проанализирован H-критерий Крускала-Уоллиса, а множественные сравнения будут проанализированы с помощью непараметрического метода S-N-K (критерий Стьюдента-Ньюмана-Кеулса). Статистическая значимость будет рассматриваться как p<0,05 и двусторонняя.

В соответствии с Классификацией пародонтальных и периимплантатных заболеваний и состояний 2017 г., средняя разница в 11 единиц между результатами, полученными по биомаркерам интерлейкинов, в группе лиц с пародонтитом III-IV стадий B-C и у здоровых лиц, а также минимальная выборка для найти оценочный значимый размер стандартного отклонения из 15 единиц (при условии, что ошибка типа I составляет 5%, ошибка типа II составляет 20%, при условии мощности 0,80): 30 человек для каждой группы. С учетом неправильных образцов в каждую группу будет взято по 30+30 человек (30 здоровых контрольных, 30 больных пародонтитом).