Níveis de IL-6, IL-17 e IL-35 no fluido crevicular gengival de pacientes com periodontite e controles saudáveis

A IL-35 é uma molécula de sinalização de última geração pertencente à família de citocinas IL 12. É produzido pelas células reguladoras T (Treg) que consistem na cadeia Α (p35). Estudos recentes demonstraram que a IL-35 é uma citocina anti-inflamatória. Ele suprime a resposta imune através da expansão de Treg e supressão do crescimento de células Th17.

A interleucina-17 (IL-17) é uma citocina pró-inflamatória secretada pelas células T-17. É um potente ativador de neutrófilos, pois regula o G-CSF e a expressão de receptores e quimiocinas. Seu nível aumentado foi documentado na periodontite crônica. Na presença de P. gingivalis, observa-se aumento de IL-17 e IL-23. Embora a infecção periodontal (P. gingivalis) induz IL-17, também foi sugerido um papel protetor da IL-17 contra a reabsorção óssea. IL-17 produz IL-6, IL-8 afetando fibroblastos.

A IL-6 é produzida por muitas células em resposta ao LPS e tem funções pró-inflamatórias e anti-inflamatórias. Está envolvido em processos inflamatórios, regenerativos, metabólicos e neurais. O nível de IL-6 foi investigado em diferentes estudos em soro, saliva e fluidos do sulco gengival. Estudos com aumento dos níveis de IL-6 no fluido do sulco gengival na periodontite crônica e estudos com reduções significativas no soro após o tratamento não cirúrgico da periodontite crônica foram relatados. No entanto, também existem estudos que não mostram diferença significativa nos níveis de várias citocinas na saliva de indivíduos com periodontite crônica e saudáveis.

As medições clínicas incluem índice de placa (PI), índice gengival (GI), sangramento à sondagem (BOP), profundidade de sondagem (PD), nível de inserção clínica (CAL), posição da margem gengival (DKK) e parâmetros de mobilidade. As medições serão registradas em seis pontos diferentes de todos os dentes pelo mesmo investigador com uma sonda periodontal do tipo Williams (Hu-Friedy, EUA).

1. Grupos de controle saudáveis:

   Consiste em indivíduos com gengiva clinicamente saudável em um periodonto intacto que tiveram uma pontuação BOP inferior a 10% e PD≤3mm, não apresentaram perda de inserção ou perda óssea radiográfica.

2. Grupos de periodontite Grau B-C / Estágio III-IV:

Grau B: taxa moderada de progressão Perda óssea moderada é observada em comparação com o biofilme e a % de perda óssea na raiz/idade 0,25 a 1,0 é determinada como grau B.

Estágio III: Periodontite severa com potencial para perda adicional de dentes Consiste em indivíduos com AL interdental ≥5 mm, perda óssea radiográfica estendendo-se ao terço médio ou apical da raiz, DP≥6 mm e perda dentária devido à periodontite de ≤4.

Grau C: taxa rápida de progressão A perda óssea rápida é observada em comparação com o biofilme e a % de perda óssea na raiz/idade > 1,0 é determinada como grau C.

Estágio IV: Periodontite avançada com extensa perda dentária e potencial para perda da dentição Consiste em indivíduos com AL interdental ≥5 mm, perda óssea radiográfica estendendo-se até o terço médio ou apical da raiz, DP≥6 mm e perda dentária devido à periodontite ≥ 5. Necessidade de reabilitação complexa devido a: Disfunção mastigatória, Trauma oclusal secundário (grau de mobilidade dentária ≥2) Defeito grave do rebordo, Colapso da mordida, desvio, alargamento. Menos de 20 dentes remanescentes (10 pares opostos)

Grupo Periodontite:

• 18-65 anos
• Não ter nenhuma doença sistêmica (doenças que não afetam o estado periodontal)
• Não fumante
• Não ter recebido tratamento antibiótico e/ou usado medicação imunossupressora nos últimos 6 meses
• Não recebeu nenhum tratamento periodontal antes
• Sem estado de gravidez e amamentação
• Não usar nenhum medicamento regularmente
• Ter pelo menos 20 dentes
• Aqueles com doença periodontal grau B-C estágio III-IV de acordo com a Classificação de Doenças e Condições Periodontais e Peri-implantares de 2017

Grupo Saudável:

Em pacientes que se inscreveram na Faculdade de Odontologia da Universidade de Istambul, Departamento de Periodontologia, indivíduos com saúde periodontal que não atendam aos critérios de doença acima, que não tenham histórico de periodontite de qualquer forma, serão incluídos no estudo.

Amostras de tiras de papel (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, EUA) colocadas no sulco gengival serão colocadas em tubos eppendorf para exame laboratorial na sessão 1 semana após o estado periodontal exato ser determinado por medições periodontais. As amostras serão retiradas das áreas com maior profundidade de sondagem. Ao obter amostras de fluido crevicular gengival, a área será isolada com chumaços de algodão, a placa microbiana no dente será removida com bolinhas de algodão e um processo de secagem de curta duração será realizado com purificador de ar a uma distância de 20 cm a um ângulo reto. Em seguida, tiras de papel absorvente padrão 2x8 mm serão colocadas das regiões proximais até a entrada do crevicular com leve resistência e deixadas por 30 segundos, em seguida cada tira de papel será colocada no mesmo tubo eppendorf para cada paciente e armazenada a -80 ° C. (Congelador científico New Brunswick de temperatura ultra baixa). Amostras serão retiradas de 4 dentes em cada paciente. Em caso de sangramento no sulco gengival durante a coleta da amostra, a tira de papel será descartada. As amostras serão isoladas do sulco gengival com auxílio de tiras de papel absorvente (Periopaper®, Proflow Inc., Amitiyville, NY, USA) e análises bioquímicas serão feitas nas amostras pelo método ELISA de acordo com os protocolos incluídos no kit.

Os dados descritivos obtidos no estudo serão apresentados como Média ± Desvio Padrão (mediana (min-max) para cada grupo. Testando a Suposição de Normalidade com Testes de Hipóteses, os Testes de Hipóteses serão analisados ​​com os testes Kolmogorov - Smirnov ou Shapiro-Wilk.

As diferenças médias para cada grupo em comparações para os dois grupos nas análises; teste t em grupos independentes nos casos em que os dados apresentam distribuição normal, nos casos em que os dados não apresentam distribuição normal; Será utilizado o teste U de Mann-Whitney.

Em mais de dois grupos, One Way ANOVA será usado nos casos em que os dados são normalmente distribuídos; Comparações múltiplas serão feitas com o teste de Tukey. Nos casos em que os dados não apresentarem distribuição normal, será analisado o teste H de Kruskal-Wallis e as comparações múltiplas serão analisadas com o Método S-N-K Não Paramétrico (Teste de Student Newman-Keuls). A significância estatística será considerada como p< 0,05 e bidirecional.

De acordo com a Classificação de Doenças e Condições Periodontais e Peri-implantares de 2017, uma diferença média de 11 unidades entre os resultados obtidos dos biomarcadores de interleucina no grupo de indivíduos com periodontite grau B-C estágio III-IV e indivíduos saudáveis, e uma amostra mínima para encontre o tamanho significativo do desvio padrão estimado de 15 unidades (assumindo erro Tipo I 5%, erro Tipo II 20% assumindo Poder 0,80): 30 pessoas para cada grupo. Considerando as amostras erradas, 30+30 pessoas serão incluídas em cada grupo (30 controles saudáveis, 30 casos de periodontite).