Os efeitos do consumo de um mês de extrato padronizado de Aronia Melanocarpa na anemia em pacientes em hemodiálise

Avaliação do Estado Redox Sistêmico Amostras de plasma foram utilizadas para determinação dos níveis dos seguintes pró-oxidantes: radical ânion superóxido (O2-), peróxido de hidrogênio (H2O2), nitritos (NO2-) e índice de peroxidação lipídica medido como ácido tiobarbitúrico reativo substâncias (TBARS), enquanto os parâmetros do sistema de defesa antioxidante, como atividades de superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) e nível de glutationa reduzida (GSH) foram determinados em amostras de lisados ​​​​de eritrócitos.

A) Determinação do índice de peroxidação lipídica (TBARS) O grau de peroxidação lipídica nas amostras de plasma foi estimado pela medição de TBARS, usando ácido tiobarbitúrico a 1% em NaOH 0,05, que foi incubado com a amostra a 100°C por 15 min e medido a 530 milhas náuticas. O extrato de TBA foi obtido pela combinação de 0,8 ml de amostra e 0,4 ml de ácido tricloroacético (TCA); em seguida, as amostras foram colocadas no gelo por 10 min e centrifugadas por 15 min a 6000 rpm. (1).

b) Determinação de nitrito (NO2-)

O óxido nítrico (NO) se decompõe rapidamente para formar produtos estáveis ​​de nitrito/nitrato. O nível de NO2- foi medido e usado como índice de produção de NO, usando o reagente de Griess. Para a determinação de NO2 no plasma, 0,1 ml de PCA 3 N (ácido percloreto), 0,4 ml de ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) 20 mM e 0,2 ml de plasma foram colocados em gelo por 15 min, depois centrifugados por 15 min a 6000 rpm. Depois de derramar o sobrenadante, 220 μl de K2CO3 foram adicionados. Os nitritos foram medidos a 550 nm. (2)

1. Determinação do radical ânion superóxido (O2-)

   As concentrações do radical ânion superóxido nas amostras de plasma foram medidas usando o reagente NTB (Nitro Blue Tetrazolium) em tampão TRIS (mistura de ensaio). A medição foi realizada em um comprimento de onda de 530 nm. (3).

2. Determinação de peróxido de hidrogênio (H2O2)

   A medição de H2O2 baseou-se na oxidação do vermelho de fenol por H2O2 em uma reação catalisada pela peroxidase de rábano. Duzentos microlitros de perfusato ou plasma foram precipitados usando 800 mL de solução de vermelho de fenol preparada na hora; 10 μL de (1:20) peroxidase de rábano (preparada imediatamente antes do uso) foi adicionado posteriormente. O nível de H2O2 foi medido a 610 nm (4).

3. Determinação de glutationa reduzida (GSH)

   O nível de glutationa reduzida (GSH) foi determinado com base na oxidação de GSH via ácido 5,5-ditiobis-6,2-nitrobenzóico. O extrato de GSH foi obtido combinando 0,1 ml de 0,1% de EDTA, 400 μl de hemolisado e 750 μl de solução de precipitação (contendo 1,67 g de ácido metafosfórico, 0,2 g de EDTA, 30 g de NaCl e preenchido com água destilada até 100 ml; a solução é estável por 3 semanas a +4C°). O nível de GSH foi medido a 420 nm (5).

4. Determinação de enzimas antioxidantes (SOD, CAT)

As hemácias isoladas foram lavadas três vezes com três volumes de NaCl 0,9 mmol/l gelado, e hemolisados ​​contendo cerca de 50 g de Hb/l foram usados ​​para a determinação da atividade da CAT. Tampão CAT, amostra de hemolisado preparada e H2O2 10 mM foram usados ​​para determinação de CAT. A detecção foi realizada a 360 nm. A atividade da SOD foi determinada pelo método da epinefrina. O hemolisado foi misturado com tampão carbonato e, em seguida, adicionou-se epinefrina. A detecção foi realizada a 470 nm (6-10).

Avaliação do estado inflamatório Para avaliar o estado inflamatório dos pacientes, foram medidos os seguintes parâmetros em ambos os pontos de interesse (0 e 30º dia): concentração sérica de proteína C reativa - PCR e concentração de fator de necrose tumoral - TNF-α.

A concentração sérica de proteína C reativa (PCR) foi determinada pelo método turbidimétrico no aparelho Olympus AU680. A concentração sérica normal de PCR é ≤ 5 mg/L. A microinflamação é definida como a concentração de PCR no soro de 5 mg/L.

As concentrações plasmáticas de TNF-α foram determinadas por ensaio imunoadsorvente ligado a enzima (ELISA) usando ensaio imunoabsorvente enzimático indireto em sanduíche de alta sensibilidade comercialmente disponível (Sigma Aldrich).

Avaliação dos parâmetros hematológicos

Em ambos os pontos de interesse, foram analisados ​​os valores dos seguintes parâmetros hematológicos em todos os pacientes:

Eritrócitos (Er), hemoglobina (Hb), hematócrito (Hct), índice eritrocitário - volume corpuscular médio (MCV), hemoglobina corpuscular média (MCH), concentração média de hemoglobina corpuscular (MCHC), concentração sérica de lactato desidrogenase (LDH), haptoglobina sérica concentração e status de ferro: concentração sérica de ferro, ferritina; capacidade total de ligação de ferro (TIBC), capacidade de ligação de ferro insaturado (UIBC), saturação de transferrina (TSAT), haptoglobina.