Estudo genético molecular da esquizofrenia: trios pais-filhos

1. Objetivos Específicos Propomos coletar DNA genômico e linhagens celulares de linfoblastos de um total de 150 famílias com os probandos preenchendo os critérios de esquizofrenia do DSM-IV em três anos. Os parentes de primeiro grau dos probandos, incluindo pais (trios pais-filhos) e irmãos não afetados, num total de cerca de 3 a 6 indivíduos, também serão recrutados no estudo. O poder estatístico adequado dos estudos de genética molecular é a grande preocupação. Para isso, examinaremos os probandos e familiares clinicamente usando o Diagnostic Interview for Genetic Studies (DIGS) para avaliação diagnóstica e usando bateria neuropsicológica incluindo atenção sustentada, função executiva, memória verbal e inteligência geral.

   Os objetivos específicos deste projeto são: (1) cooperar com este importante Consórcio de Genotipagem de Taiwan proposto pelo NHRI; (2) detectar os principais genes de suscetibilidade à esquizofrenia relacionados ao endofenótipo neuropsicológico; (3) fazer mais mapeamento fino em regiões cromossômicas sugestivas de ligação para replicar resultados de estudos de ligação anteriores usando nossa amostra de família de pares de irmãos co-afetados previamente coletada; e (4) depositar as linhas celulares de linfoblastos no NHRI Cell Bank servindo como um recurso nacional para pesquisa básica em Taiwan.

2. Fundo

   1. Base genética da esquizofrenia A maioria dos estudos familiares confirma que a esquizofrenia e transtornos relacionados é um transtorno familiar e que o risco para parentes de primeiro grau de pacientes esquizofrênicos é aproximadamente dez vezes o risco para parentes de controles. Estudos com gêmeos encontraram taxas de concordância de 46%~53% para pares de gêmeos MZ, e de 14%~15% para pares de gêmeos DZ (Kendler KS 1983; Gottesman II 1993; Prescott e Gottesman II, 1993); fornecem assim fortes evidências de um componente hereditário da esquizofrenia. No entanto, as taxas de concordância em gêmeos MZ estão longe de 100%, o que também enfatiza a importância de fatores ambientais na etiologia da esquizofrenia. A evidência da contribuição genética para a etiologia da esquizofrenia é ainda apoiada pelo estudo de adoção. Estudos de adoção de esquizofrenia mostraram que quando os filhos biológicos de mães esquizofrênicas foram criados por pais adotivos, eles mostraram taxas mais altas de esquizofrenia quando adultos, em comparação com os adotados de controle.

   As análises de segregação indicam que o modelo poligênico multifatorial, que postula um grande número não especificado de loci para combinar aditivamente na causa da esquizofrenia, ajusta-se melhor aos padrões observados de esquizofrenia em estudos familiares do que o modelo de locus principal único. Foi sugerido que vários genes de pequeno efeito na epistasia poderiam ser responsáveis ​​pela etiologia genética da esquizofrenia.

   A localização do gene de suscetibilidade da esquizofrenia ainda está em busca ativa usando métodos genéticos moleculares. Esta forma de abordagem incluiu análise de ligação, estudo de associação de genes candidatos e abordagem de gene candidato posicional, não há hipótese a priori que levaria alguém a focar em qualquer região cromossômica dada. Assim, todo o genoma precisa ser rastreado sistemicamente. Algumas varreduras do genoma da esquizofrenia foram publicadas na década e muitas regiões cromossômicas mostraram evidências sugestivas de ligação, incluindo o cromossomo 1q21-q22, 1q31-q42, 2p22-q21, 4q24-q32, 6p24-p22, 6q16-q23, 8p24-p21, 10p14-p13, 13q14-q32, 15q13-q14, 22q11-q13. No entanto, apenas algumas regiões cromossômicas foram relatadas como tendo evidências de ligação significativas em todo o genoma, incluindo os cromossomos 1q21-q22, 6p24-p22, 8p21 e 13q32.

   Estudos de genes candidatos revelaram resultados inconsistentes na última década. Genes relacionados a neurotransmissores, como dopamina (D1, D2, D3, D4, D5), serotonina, ácido r-aminobutírico e genes do receptor de glutamato foram estudados usando estudos de associação e ligação e nenhum resultado consistente foi obtido. Genes relacionados ao crescimento de neurônios, genes de fosfolipase e um gene de canal de potássio (hKCa3/KCNN3) foram relatados como associados à esquizofrenia. A hipótese sobre o mecanismo fisiopatológico da esquizofrenia fornece a abordagem dos prováveis ​​genes candidatos no estudo da genética molecular. Existem duas questões a serem resolvidas para a abordagem do gene candidato usando o design de caso-controle. Em primeiro lugar, uma questão crítica na avaliação da significância da associação com medidas fenotípicas é a probabilidade de erros do tipo I. Uma vez que muitos genes e fenótipos podem ser avaliados para esquizofrenia, o nível de significância precisa ser ajustado devido à baixa probabilidade prévia e testes múltiplos. Em segundo lugar, os efeitos da mistura populacional diferente entre casos e controles podem aumentar os erros do tipo I A abordagem do gene candidato posicional usando a estratégia de desequilíbrio de ligação pode resolver os dois problemas acima levantados pela abordagem do estudo de associação de genes candidatos com base nos resultados de ligação anteriores para aumentar o probabilidade a priori e usando trios pais-filhos como controle interno. Essa abordagem é mais poderosa do que o estudo de ligação para localizar os genes de suscetibilidade de transtorno complexo como esquizofrenia. Com as evidências de ligação de mapeamento fino, toda a sequência do genoma e mapa de polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) e a técnica avançada de microarray disponível, essa abordagem é mais eficiente para localizar os genes de suscetibilidade da esquizofrenia. Recentemente, um estudo usando a estratégia acima relatou evidências significativas de desequilíbrio de ligação da esquizofrenia para um polimorfismo microssatélite e um SNP de um gene, o gene NOTCH4, no cromossomo 6p21.

   Considerando os potenciais da abordagem do gene candidato posicional usando estratégias de desequilíbrio de ligação, propomos coletar trios pais-filhos da esquizofrenia como amostra para estudos genéticos moleculares adicionais da esquizofrenia. Com nossos esforços anteriores e contínuos em estudos de ligação de esquizofrenia usando pares de irmãos co-afetados de esquizofrenia (ver resultados preliminares), esta amostra pode ser usada para outros estudos de genes candidatos posicionais.

   3. Déficit neuropsicológico na esquizofrenia No domínio da neuropsicologia, foi demonstrado que a esquizofrenia tem um padrão único de deficiências na função executiva central, atenção sustentada e memória de trabalho foram bastante únicas na esquizofrenia e são sugestivas de disfunção frontostriatal. Foi acordado pela maioria dos pesquisadores que as deficiências neuropsicológicas da esquizofrenia foram melhor demonstradas por baterias de testes abrangentes tocando em vários processos neuropsicológicos, em vez de testes únicos e isolados e, atualmente, as deficiências sugerem fortemente a disfunção do circuito fronto-temporal-límbico.

   Entre os déficits neuropsicológicos na esquizofrenia, a atenção visual sustentada medida pelo Continuous Performance Test (CPT) e a função executiva medida pelo Wisconsin Card Sorting Test (WCST) foram estudadas mais detalhadamente. As características comuns do CPT são que os participantes devem responder a alvos pré-designados entre os estímulos que são apresentados em uma taxa fixa rápida. A tarefa de vigilância de discriminação do CPT pode consistir em um único estímulo (CPT-X, um único caractere ou número como alvo) ou dois estímulos sucessivos (CPT-AX, um caractere ou número precedido por outro caractere ou número como alvo). O nível de dificuldade do CPT pode ser aumentado ainda mais desfocando os estímulos (CPT degradado) ou usando um alvo relativo (CPT-Identical Pairs Version ou CPT-IP). As diferentes versões do CPT podem explorar diferentes componentes da atenção sustentada: os mais difíceis são indicadores de vulnerabilidade estáveis, enquanto os mais simples podem ser indicadores mediadores de vulnerabilidade na esquizofrenia. Entre os estudos que examinam especificamente as relações entre os índices de desempenho do CPT e as dimensões dos sintomas clínicos, um dos achados mais consistentes é que os déficits do CPT estão associados a sintomas negativos. Muitos estudos também descobriram que o pior desempenho no CPT estava associado a distúrbios do pensamento ou sintomas desorganizados.

   Os déficits da função executiva medidos pelo WCST referem-se à função anormal do córtex pré-frontal. Déficits no desempenho do WCST são características duradouras e essenciais da esquizofrenia e predizem incapacidade de longo prazo, independentemente de outros déficits cognitivos. Estudos de neuroimagem funcional descobriram que o WCST ativa o córtex pré-frontal dorsolateral e que as drogas dopamiméticas melhoram o desempenho nessa tarefa em pacientes com esquizofrenia e aumentam o sinal ao ruído da resposta fisiológica pré-frontal.

   Estudos anteriores confirmaram que os déficits na atenção sustentada e na função executiva são específicos da esquizofrenia e relacionados ao processo fisiopatológico esquizofrênico. Os déficits também foram associados ao risco genético de esquizofrenia e podem servir como um endofenótipo na análise genética na esquizofrenia.

   4. Abordagem do Endofenótipo em Estudos Genéticos Moleculares da Esquizofrenia Para resolver os problemas de poder insuficiente das análises genéticas e heterogeneidade genética da esquizofrenia, uma estratégia alternativa foi defendida que o uso de uma característica neurobiológica específica da doença como um fenótipo adicional que pode refletir mais estreitamente o efeito de uma única alteração genética.

   Os déficits visuais de atenção sustentada medidos pelo CPT eram um endofenótipo potencial da suscetibilidade genética à esquizofrenia. Déficits de CPT estavam presentes não apenas em pacientes com esquizofrenia, mas também em seus parentes não psicóticos. Usando dados de 148 parentes não psicóticos e 345 adultos da comunidade, descobriu-se que a taxa de risco de recorrência λ era maior que 15 para o CPT não degradado e maior que 30 para o CPT degradado.

   Os déficits da função executiva medidos pelo WCST também podem servir como um endofenótipo em estudos genéticos da esquizofrenia. Déficits de WCST apresentados tanto em pacientes esquizofrênicos quanto em seus irmãos saudáveis.

   Assim, usar déficits de CPT e déficits de WCST como endofenótipos de esquizofrenia forneceria uma medida valiosa de risco genético, melhoraria o poder das análises genéticas e poderia ajudar a identificar genes de suscetibilidade para esquizofrenia.

   Esta estratégia de endofenótipo tem sido bem sucedida no mapeamento de um déficit neurofisiológico da esquizofrenia, diminuição da inibição de P50, para loci no cromossomo 15q13-14, recentemente. A análise de ligação do genoma do déficit de inibição de P50 em nove famílias de esquizofrenia multiplex encontrou um lod score significativo (Z = 5,30,  = 0) em um cromossomo 15q14. Quando o diagnóstico clínico de esquizofrenia foi usado como o fenótipo afetado, o escore lod máximo no mesmo marcador não foi estatisticamente significativo. O outro déficit neurobiológico, disfunção de rastreamento ocular da esquizofrenia, foi mapeado no cromossomo 6p23-21 com o escore lod multiponto máximo de 4,02. Novamente, embora o diagnóstico clínico de esquizofrenia tenha sido usado como o fenótipo afetado, o resultado da ligação não foi significativo.

   Em resumo, com nossos estudos preliminares em análises de ligação usando pares de irmãos co-afetados de esquizofrenia e déficits neuropsicológicos na esquizofrenia, este projeto para coletar esquizofrênicos de trios pais-filhos com endofenótipos neuropsicológicos bem definidos é considerado um projeto crucial para pesquisando os genes de suscetibilidade da esquizofrenia.

3. Estudos Preliminares

   1. Coleção de Família de Irmãos Co-afetados por Esquizofrenia O P.I. tem se empenhado em coletar a família de pares de irmãos co-afetados por esquizofrenia desde 1990. Com a consciência da importância e da necessidade crítica da avaliação diagnóstica, esses probandos, irmãos coafetados e irmãos não afetados disponíveis, bem como os pais, foram avaliados com uma entrevista diagnóstica psiquiátrica semiestruturada usando os critérios diagnósticos do DSM-III-R e/ou DSM-IV. Além disso, sob o modelo teórico evolutivo da psicopatologia, também foram coletados dados desenvolvimentais. Todos esses dados clínicos e dados da árvore genealógica foram estabelecidos no banco de dados do laboratório de genética molecular (DBMGL) no Departamento de Psiquiatria, Faculdade de Medicina, Universidade Nacional de Taiwan, sob os auspícios do P.I. No total, existem cerca de 120 famílias de pares de irmãos co-afetados por esquizofrenia disponíveis para análise de ligação no DBMGL. Via de regra, as amostras de DNA foram obtidas das células brancas periféricas de todos os indivíduos disponíveis da família, especialmente os irmãos coafetados, pelo menos um irmão não afetado e os pais. No total, cerca de 1000 amostras de DNA estavam no DBMGL. Linhas celulares de células linfoblásticas transformadas com EBV-958 também foram estabelecidas. Todos esses sujeitos do estudo foram bem informados para este estudo e o consentimento informado foi obtido. Todas as famílias que participaram deste estudo foram convidadas a participar de um "Clube da Família Nova Esperança" para reuniões e discussões periódicas. Cerca de 150 casos de esquizofrenia que receberam avaliação clínica detalhada e acompanhamento regular e avaliação neuropsicológica abrangente, incluindo CPT, WCST, WAIS-R e WMS, foram recrutados para a obtenção de amostras de DNA. Cerca de 200 controles normais também foram recrutados para a obtenção de amostras de DNA.

      Os instrumentos utilizados em estudos genéticos foram estabelecidos. O cronograma de entrevista de diagnóstico para estudo genético (DIGS) e o cronograma de entrevista de esquizotipia (SIS) foram traduzidos e modificados para serem úteis em indivíduos de Taiwan. A escala de aberração perceptiva (PAS) e o questionário de personalidade esquizotípica (SPQ) também foram usados ​​no estudo da comunidade sobre transtornos de personalidade relacionados à esquizofrenia. A consideração transcultural foi empregada.

      Um trabalho colaborativo de 5 anos em Taiwan (Taiwan Schizophrenia Linkage Study, TSLS), patrocinado pelo NIMH, EUA, para coletar famílias com pares de irmãos coafetados com esquizofrenia está em andamento no terceiro ano. Serão arrecadadas 600 famílias. Amostras de DNA, linhas celulares e dados clínicos de DIGS, FIGS, bem como dados de testes neuropsicológicos foram coletados. A amostra de DNA estaria aberta a equipes de pesquisa em todo o mundo.

   2. Estudos de Genética Molecular da Esquizofrenia Nossos estudos de genética molecular da esquizofrenia foram apoiados por três projetos consecutivos: o projeto de genética molecular patrocinado pelo National Science Council (1989-1992), o projeto de genética molecular do MPGRP (1993-1998) e o projeto de genética molecular de MPSS (1998-2001) patrocinado por NHRI. A fase inicial (1989-1992) desse projeto de genética molecular concentrou-se no estabelecimento de instalações laboratoriais e na coleta de famílias de pares de irmãos esquizofrênicos coafetados. A 2ª fase deste projecto de genética molecular (1993-1998) deu continuidade à recolha de famílias, tendo a recolha sido alargada à recolha de pares de irmãos bipolares co-afectados, casos esquizofrênicos e controlos normais. Descobrimos que o polimorfismo do gene do receptor de androgênio (CAG)n tinha uma provável associação com a esquizofrenia. Esse achado apoiou o achado de DeLisi et al. Foram promovidos os métodos de genética molecular de análise de ligação e associação de genes candidatos, este laboratório do P.I. (Dr. Hwu) mudou-se para enfatizar nesta área também. Os resultados deste laboratório foram: (1) O polimorfismo de (48bp) repete no gene do receptor DRD4 não foi significativamente relacionado com a esquizofrenia; (2) Verificou-se que uma única mutação em DRD2 não estava associada à esquizofrenia (3) As amostras do banco de dados deste projeto juntaram-se a três estudos de colaboração internacional usando abordagem de clonagem posicional que precisam de amostras relativamente grandes. O primeiro é organizado por Gill et al intitulado como "Schizophrenia Collaborative Linkage Group", outro foi liderado pelo Dr. Moises na Universidade de Kiel, Alemanha e o terceiro é com o Dr. Powell em Londres. Todos esses resultados revelaram os possíveis marcadores nos cromossomos 6p, 11q, 13q, 19q e 22q. Isso sugere que os pacientes taiwaneses podem ter possíveis genes de suscetibilidade nessas regiões, exceto o cromossomo 13q, ajustando-se a um modelo oligogenético. (4) O estudo de associação do gene do receptor 5-HT2 localizado no cromossomo 13q foi negativo; (5) A análise epidemiológica clínica usando pares de irmãos co-afetados demonstrou a tendência de 3 grupos de sintomas independentes de desorganização da realidade, desorganização e estado negativo. (6) Evidência de ligação fraca com loci no cromossomo 6p24-22.

      A 3ª fase do estudo de genética molecular (1998-2001) continuou com foco na coleta de famílias de pares de irmãos esquizofrênicos coafetados e análise de ligação em evidências sugestivas relatadas de regiões cromossômicas, incluindo cromossomo 1q21-q22, 1q31-q42, 8p24-p21, 15q13-q14, 22q11-q14. Os resultados de ligação foram (1) evidência sugestiva de ligação para esquizofrenia com e sem os sintomas negativos no cromossomo 6p24 e 22q12 (2) nenhuma evidência de ligação do gene da subunidade GABAA receptor α1 (GABRA1), β1 (GABRB1) e β3 (GABAB3) com esquizofrenia (3) nenhuma evidência de ligação do gene do receptor Glutamato GluR5 e GluR6 com esquizofrenia (4) nenhuma evidência de ligação do gene SCA1 com esquizofrenia (5) evidência de ligação sugestiva em marcadores do cromossomo 8p com esquizofrenia (Hwu et al., 2001a) (6) evidência de ligação fraca de marcadores do cromossomo 1q31-42 com esquizofrenia (7) evidência de ligação sugestiva de marcadores em 15q13-14 com esquizofrenia (8) evidência de ligação modesta de esquizofrenia a loci no cromossomo 1q21-22. A abordagem do gene candidato revelou os seguintes resultados: (1) possível associação entre o polimorfismo do gene do receptor de dopamina D4 (DRD4) com a resposta rápida ao tratamento da esquizofrenia (Liu et al., 2001d). (2) nenhuma associação entre o polimorfismo do gene da fosfolipase A2 citosólica (c-PLA2) e a esquizofrenia.

   3. Estudos sobre déficits neuropsicológicos na esquizofrenia Encontramos atenção sustentada prejudicada pelo teste de desempenho contínuo (CPT) como o marcador de traço da esquizofrenia. Estudos familiares indicaram que os déficits de atenção sustentados medidos pelo CPT são marcadores de vulnerabilidade da esquizofrenia. Os resultados são: (1) uma proporção substancial de parentes não psicóticos de probandos com esquizofrenia (19-34%) tem déficits de CPT, que podem ser previstos a partir do desempenho de CPT de seus probandos; (2) indivíduos com características de personalidade esquizotípica também exibem déficits de CPT, que estão especificamente associados a fatores negativos da esquizotipia; (3) Déficits de CPT estão presentes em pacientes esquizofrênicos, estão particularmente associados a sintomas negativos e desorganizados, e aqueles com versões de CPT mais difíceis não são passíveis de tratamento neuroléptico.

   A especificidade do CPT foi estudada em um grupo de pacientes com esquizofrenia (n=41) em contraste com o grupo de pacientes bipolares com sintomas psicóticos (n=46) e o grupo de pacientes bipolares sem sintomas psicóticos (n=22) e um grupo de pacientes com transtorno depressivo maior não psicótico (n=22). Verificou-se que os déficits de CPT são indicadores estáveis ​​e vulneráveis ​​de esquizofrenia, mediando indicadores de vulnerabilidade para transtorno bipolar e indicadores dependentes do estado para depressão maior. Esses resultados demonstram que os déficits de CPT são marcadores de traço válidos da esquizofrenia.

   Todos esses dados preliminares suportam que o PI e seus associados são capazes de executar este projeto, incluindo coleta de trios de famílias pais-descendentes, técnicas laboratoriais de extração de DNA e cultura de células e avaliação neuropsicológica.

4. Desenho e Métodos de Pesquisa

   1. Sujeitos Nós nos preparamos para coletar trios de famílias de pais e filhos do Centro Médico do Hospital da Universidade Nacional de Taiwan e dos hospitais psiquiátricos afiliados, o Centro Psiquiátrico Taoyuan. Os casos probatórios a serem recrutados são os residentes da parte norte de Taiwan. O consentimento informado será obtido antes do recrutamento para o estudo. Os parentes de primeiro grau a serem recrutados são os pais e pelo menos um dos irmãos não afetados. O diagnóstico dos casos probandos é de esquizofrenia definido pelos critérios do DSM-IV.

   1. Medidas de Avaliação Clínica I. A entrevista de diagnóstico para estudos genéticos (DIGS) Todos os indivíduos serão entrevistados pessoalmente com o DIGS, que foi criado por Tsuang e Faraone da NIMH Human Genetics Initiative. O DIGS faz uma avaliação detalhada do curso da doença e faz uma avaliação cuidadosa do abuso de substâncias e dos sintomas de humor. Isso permite um diagnóstico diferencial mais fácil entre esquizofrenia e psicoses relacionadas a substâncias, transtornos esquizoafetivos e transtornos psicóticos do humor. Esta avaliação detalhada ajuda a proteger contra diagnósticos falsos positivos.

      Além disso, o DIGS fornece uma rica descrição de muitos domínios da psicopatologia: somatização, depressão maior, mania/hipomania, distimia/personalidade depressiva/personalidade hipertímica, transtornos de abuso de álcool, jogo patológico e transtorno de personalidade antissocial. Ele também coleta dados demográficos e de histórico médico auto-relatados. Também são feitas classificações na Escala de Avaliação Global e nas Escalas de Avaliação de Sintomas Positivos e Negativos. Esquizotípica e outras características de personalidade do Grupo A do Eixo II são avaliadas usando uma versão modificada da Entrevista Estruturada para Esquizotipia.

      II. A Entrevista Familiar para Estudos Genéticos (FIGS) Como fonte adicional de informações de pedigree, a FIGS será realizada com todos os membros da família. Esta entrevista questiona sistematicamente um informante sobre a presença de doença psiquiátrica em familiares. Administramos as FIGS em três etapas. Primeiro, a estrutura do heredograma familiar é desenhada e revisada com o informante. Em seguida, perguntas de triagem psiquiátrica são feitas sobre todos os parentes no heredograma. Em seguida, com base nas respostas às perguntas de triagem, uma ou mais das cinco listas de verificação de sintomas (depressão, mania, abuso de substâncias, psicose, transtorno de personalidade paranóide/esquizóide/esquizotípica) são preenchidas para cada parente de primeiro grau, cônjuge ou outro parente bem conhecido pelo informante.

      O DIGS e FIGS foram traduzidos para o chinês. A confiabilidade e a validade foram estabelecidas em nossos estudos preliminares.

      III. O procedimento de diagnóstico Todos os diagnósticos serão feitos usando o DSM-IV. Esses diagnósticos serão feitos por dois psiquiatras certificados com experiência clínica e de pesquisa no diagnóstico de pacientes psicóticos. Os diagnósticos finais dos probandos e parentes serão baseados no conteúdo da entrevista, na vinheta do caso, nas informações fornecidas pelos parentes e na revisão completa do prontuário médico de cada diagnosticador. Se os dois diagnosticadores discordarem sobre qualquer um dos diagnósticos do paciente, um terceiro diagnosticador será usado como desempate.

      4. Treinamento de Entrevistadores O programa de treinamento certificará os entrevistadores: (1) estabelecer um conhecimento prático dos sistemas de diagnóstico usados ​​no DIGS e FIGS; (2) desenvolver experiência na administração e pontuação do instrumento de diagnóstico estruturado; e (3) entender completamente o processo de consentimento informado e a necessidade de adesão estrita aos procedimentos de consentimento.

      O programa de treinamento é dividido em duas etapas: (1) treinamento didático formal e (2) experiência supervisionada usando a entrevista diagnóstica estruturada.

      A formação didática inicia-se com a leitura e familiarização dos formandos com os sistemas de diagnóstico utilizados pelo DIGS. Esta exposição inicial é complementada por palestras que revisam os critérios diagnósticos para todos os transtornos psiquiátricos cobertos pela entrevista. As questões centrais abordadas nessas palestras são: (1) a importância de estabelecer diagnósticos com base na descrição objetiva do comportamento; (2) delineamento cuidadoso e diferenciação de síndromes que envolvem fenômenos psicóticos e afetivos; e (3) esclarecimento das principais diferenças na definição de síndrome entre os sistemas de diagnóstico.

      A segunda componente da formação centra-se nos instrumentos de diagnóstico estruturados. Os trainees primeiro se familiarizam com a estrutura da entrevista. Isso é facilitado quando os treinandos conduzem entrevistas práticas nas quais eles desempenham alternadamente os papéis de entrevistador e sujeito. Essas entrevistas iniciais são conduzidas com um psiquiatra sênior presente para identificar áreas problemáticas na administração e para garantir o uso clinicamente sensível da entrevista.

      O programa de treinamento também inclui um módulo da Entrevista Estruturada para Esquizotipia (SIS) modificada. O treinamento SIS inclui uma revisão da literatura sobre transtorno de personalidade esquizotípica, uma orientação e revisão do instrumento, uma oportunidade para os treinandos observarem e fazerem classificações clínicas de uma entrevista ao vivo e uma revisão e discussão de classificações clínicas para esclarecer os critérios de pontuação. Todos os cursos de treinamento foram bem estabelecidos em nossos estudos preliminares.

   2. Avaliações Neuropsicológicas

      Considerando a complexidade dos déficits neuropsicológicos propostos na esquizofrenia, uma bateria de testes explorando múltiplos aspectos do processo cerebral é escolhida para explorar o padrão geral de déficits neuropsicológicos dos pacientes. A bateria consiste em testes supostamente para medir:

      1. Atenção sustentada (o Teste de Desempenho Contínuo (CPT), tanto em situações de teste não degradadas quanto degradadas)
      2. Funções executivas centrais (Wisconsin Card Sorting Test (WCST); Trail-making B);
      3. Função de memória (Weschler Memory Scale-terceira edição, WMS-III).
      4. Teste para realizações intelectuais gerais (desenho de bloco; conclusão de imagem; informação; similaridade; aritmética; extensão de dígito; substituição de símbolo de dígito).

      O teste neuropsicológico usado no presente estudo e a validade da bateria de testes foram bem estabelecidos em nossos estudos preliminares. Preparamo-nos para administrar a bateria de testes neuropsicológicos aos probandos e a todos os familiares recrutados possíveis. A bateria de testes neuropsicológicos é bastante demorada, estimando-se que leve de 3 a 4 horas para ser concluída. Assim, a bateria de testes neuropsicológicos será aplicada em sessões fracionadas, realizadas em dois dias. Todos os testes serão realizados por dois assistentes de pesquisa de mestrado com especialização em psicologia.

   2. Trabalho de Laboratório: Este projeto tem duas linhas de trabalho de laboratório

   1. Coleta de amostras de sangue e extração de DNA Vinte a trinta ml de sangue venoso serão obtidos de todos os sujeitos do estudo em tubos vacutainer de tampa roxa e tampa verde. A amostra de sangue em tubos de tampa roxa será usada para extração de DNA. Nós nos preparamos para extrair o DNA usando um método de salting-out modificado.
   2. Configuração da linhagem Todas as amostras de sangue recém-colhidas terão o linfócito transformado em célula linfoblástica para preservação da linhagem que será depositada no banco de células do NHRI conforme a proposta solicitada. Os procedimentos detalhados de cultura de células estabelecidos em nosso laboratório de genética molecular estão listados como arquivos anexos ao estudo de genética molecular.

   3. Gerenciamento de dados Já configuramos o software de banco de dados DIGS computadorizado em nosso estudo anterior (Taiwan Schizophrenia Linkage Study, TSLS) e o banco de dados neuropsicológicos em outro estudo anterior (Multidimensional Psychopathological Study for Schizophrenia, MPSS). Todos os dados clínicos e neuropsicológicos deste projeto serão incorporados a esses bancos de dados.

   Os dados de pedigree familiar, dados de DNA e dados de cultura celular serão incorporados ao nosso banco de dados previamente estabelecido: Banco de Dados Laboratoriais de Genética Molecular (BMGLD). Este BMGLD incluirá 4 conjuntos de dados: (1) árvore genealógica e banco de dados de genotipagem. Esses dados são configurados usando o programa cirílico; (2) banco de amostras de DNA; (3) dados clínicos e banco de endofenótipos e (4) banco de linhagens celulares. Este BMGLD bem organizado será de grande valia para o trabalho contínuo de pesquisa.

   Os procedimentos de entrada de dados seguirão as diretrizes que usamos para nossos projetos em andamento. Esses procedimentos buscam maximizar a precisão dos dados. Os dados serão inseridos duas vezes e os arquivos originais e de verificação serão comparados quanto a discrepâncias. Todos os conjuntos de dados serão copiados para o disco regularmente. Os conjuntos de dados de backup e originais serão mantidos em diferentes escritórios bloqueados.

   Os conjuntos de dados deste projeto estarão disponíveis para outros investigadores seguindo as diretrizes da RFA. Criaremos um conjunto de dados que incluirá todos os dados exigidos pelo RFA e quaisquer dados adicionais que o NHRI deseje incorporar ao banco de células. Esses dados serão enviados para o centro de gerenciamento de dados designado pelo NHRI para posterior distribuição ao membro do consórcio de genotipagem.

5. Resultados Antecipados Prevemos com este projeto atingir os seguintes objetivos: (1) cooperar com este importante Consórcio de Genotipagem de Taiwan proposto pelo NHRI, (2) detectar os principais genes de suscetibilidade à esquizofrenia relacionados ao endofenótipo neuropsicológico, (3) fazer mapeamento fino adicional em regiões cromossômicas sugestivas de ligação para replicar resultados de estudos de ligação anteriores usando nossa amostra de família de pares de irmãos co-afetados previamente coletada e (4) para depositar as linhas de células linfoblásticas no NHRI Cell Bank servindo como um recurso nacional para pesquisa em Taiwan.

6. Sujeitos humanos Este é um estudo genético, todos os sujeitos recrutados apresentarão seu consentimento informado assinado antes de serem inscritos no estudo. Não há procedimento invasivo de risco potencial no processo da entrevista clínica e das avaliações neuropsicológicas. Amostras de sangue de 30 c.c. será sorteado. Isso será feito usando uma agulha e isso pode causar alguma sensação dolorosa que geralmente é insignificante no ambiente clínico. Esses sujeitos participantes serão tranquilizados quando qualquer sensação de desconforto ocorrer durante os procedimentos do estudo.

   Todos os pesquisadores que participaram deste procedimento de estudo são todos bem treinados. Se alguma reação emocional ou física inesperada ocorrer durante o procedimento do estudo, o P.I. do projeto devem ser informados e as ações necessárias serão tomadas imediatamente. Como se trata de um estudo genético, no procedimento do estudo pode ser levantada a questão do aconselhamento genético. Os pesquisadores participantes serão instruídos antes de participar deste estudo para este tópico de aconselhamento genético. Esses indivíduos ou seus familiares que necessitam de aconselhamento genético específico serão encaminhados para a clínica especial, localizada no ambulatório do National Taiwan University Hospital, do P.I. deste projeto para cuidados especiais.

7. Investigação animal não envolvida.
8. Riscos potenciais A entrevista clínica, as avaliações neuropsicológicas e a coleta de sangue serão muito seguras. No entanto, esse estudo genético pode provocar alguma reação emocional da família, principalmente quanto à herdabilidade genética. Nesse caso, os pesquisadores participantes, bem treinados, darão garantia e avaliação imediata. Se algo for considerado necessário, esses sujeitos serão encaminhados para a clínica especial do P.I. deste projeto de atenção psiquiátrica especial.

O procedimento de coleta de amostra de sangue pode criar um leve grau de sensação dolorosa ou sensação de medo. Esses casos serão tranquilizados imediatamente. De um modo geral, este procedimento de estudo é seguro e os riscos potenciais são mínimos e controláveis ​​se algo acontecer.