Молекулярно-генетическое исследование шизофрении: тройки родителей и потомков

1. Конкретные цели Мы предлагаем собрать геномную ДНК и клеточные линии лимфобластов в общей сложности 150 семей с пробандами, отвечающими критериям шизофрении DSM-IV, в течение трех лет. Родственники первой степени родства пробандов, включая родителей (трио родителей-потомков) и здоровых братьев и сестер, всего от 3 до 6 субъектов, также будут привлечены к исследованию. Большую озабоченность вызывает адекватная статистическая мощность молекулярно-генетических исследований. В связи с этим мы проведем клиническое обследование пробандов и членов семьи, используя диагностическое интервью для генетических исследований (DIGS) для диагностической оценки, а также нейропсихологическую батарею, включающую устойчивое внимание, исполнительную функцию, вербальную память и общий интеллект.

   Конкретными целями этого проекта являются: (1) сотрудничество с этим важным Тайваньским консорциумом генотипирования, предложенным NHRI; (2) выявить основные гены предрасположенности к шизофрении, связанные с нейропсихологическим эндофенотипом; (3) провести дальнейшее точное картирование областей хромосом, наводящих на размышления о сцеплении, чтобы воспроизвести результаты предыдущих исследований сцепления с использованием нашей ранее собранной семейной выборки пар сибсов; и (4) поместить клеточные линии лимфобластов в Банк клеток NHRI, служащий национальным ресурсом для фундаментальных исследований на Тайване.

2. Фон

   1. Генетическая основа шизофрении. Большинство семейных исследований подтверждают, что шизофрения и родственные расстройства являются семейными расстройствами и что риск для родственников больных шизофренией первой степени родства примерно в десять раз превышает риск для родственников контрольной группы. Исследования близнецов показали уровень конкордантности от 46% до 53% для пар близнецов MZ и от 14% до 15% для пар близнецов DZ (Kendler KS 1983; Gottesman II 1993; Prescott and Gottesman II, 1993); таким образом, убедительные доказательства наследственного компонента шизофрении. Однако показатели конкордантности у МЗ-близнецов далеки от 100%, что также подчеркивает важность средовых факторов в этиологии шизофрении. Доказательства генетического вклада в этиологию шизофрении дополнительно подтверждаются исследованием усыновления. Исследования шизофрении усыновления показали, что, когда биологические потомки матерей-шизофреников воспитывались приемными родителями, они демонстрировали более высокие показатели шизофрении во взрослом возрасте по сравнению с усыновленными из контрольной группы.

   Сегрегационный анализ показывает, что многофакторная полигенная модель, предполагающая аддитивное комбинирование большого неопределенного числа локусов, вызывающих шизофрению, лучше соответствует наблюдаемым паттернам шизофрении в семейных исследованиях, чем модель с одним основным локусом. Было высказано предположение, что несколько генов с небольшим влиянием на эпистаз могут отвечать за генетическую этиологию шизофрении.

   Местоположение гена предрасположенности к шизофрении до сих пор находится в стадии активного поиска с использованием молекулярно-генетических методов. Этот подход включал анализ сцепления, исследование ассоциации генов-кандидатов и подход позиционного гена-кандидата. Не существует априорной гипотезы, которая заставила бы сосредоточиться на какой-либо данной хромосомной области. Таким образом, весь геном нуждается в системном скрининге. За последнее десятилетие было опубликовано несколько полногеномных сканирований шизофрении, и многие участки хромосом показали предполагаемые доказательства сцепления, включая хромосомы 1q21-q22, 1q31-q42, 2p22-q21, 4q24-q32, 6p24-p22, 6q16-q23, 8p24-p21, 10p14-p13, 13q14-q32, 15q13-q14, 22q11-q13. Однако когда-либо сообщалось, что только несколько участков хромосом имеют значимые доказательства сцепления по всему геному, включая хромосомы 1q21-q22, 6p24-p22, 8p21 и 13q32.

   Исследования генов-кандидатов показали противоречивые результаты за последнее десятилетие. Связанные с нейротрансмиттерами гены, такие как гены дофамина (D1, D2, D3, D4, D5), серотонина, r-аминомасляной кислоты и гены рецептора глутамата, были изучены с использованием исследований как ассоциации, так и сцепления, и не было получено последовательных результатов. Сообщается, что гены, связанные с ростом нейронов, гены фосфолипазы и ген калиевого канала (hKCa3/KCNN3) связаны с шизофренией. Гипотеза о патофизиологическом механизме шизофрении обеспечивает подход к вероятным генам-кандидатам в молекулярно-генетическом исследовании. Существует две проблемы, которые необходимо решить для подхода к генам-кандидатам с использованием дизайна случай-контроль. Во-первых, критическим вопросом при оценке значимости связи с фенотипическими показателями является вероятность ошибок типа I. Поскольку многие гены и фенотипы могут быть оценены на наличие шизофрении, уровень значимости необходимо скорректировать из-за низкой априорной вероятности и многократного тестирования. Во-вторых, влияние различного смешения популяций между случаями и контрольной группой может привести к завышению ошибок типа I. Подход к позиционному гену-кандидату с использованием стратегии неравновесия по сцеплению может решить две вышеупомянутые проблемы, поднятые подходом исследования ассоциации генов-кандидатов на основе предыдущих результатов сцепления для увеличения априорная вероятность и использование троек родитель-потомок в качестве внутреннего контроля. Этот подход более эффективен, чем исследование сцепления, для обнаружения генов предрасположенности к такому комплексному расстройству, как шизофрения. Благодаря точному картированию свидетельств сцепления, полной последовательности генома и карте однонуклеотидного полиморфизма (SNP), а также доступной передовой технологии микрочипов этот подход более эффективен для определения местоположения генов предрасположенности к шизофрении. Недавно в исследовании с использованием вышеуказанной стратегии было сообщено о значительном нарушении равновесия по сцеплению, свидетельствующем о шизофрении, микросателлитном полиморфизме и SNP гена, гена NOTCH4, на хромосоме 6p21.

   Принимая во внимание возможности подхода позиционного гена-кандидата с использованием стратегии неравновесия по сцеплению, мы предлагаем собрать трио шизофрении родитель-потомок в качестве образца для дальнейшего молекулярно-генетического исследования шизофрении. С нашими предыдущими и текущими усилиями по изучению сцепления шизофрении с использованием совместно затронутых сиб-пар шизофрении (см. предварительные результаты), этот образец может быть использован для дальнейших исследований позиционных генов-кандидатов.

   3. Нейропсихологический дефицит при шизофрении В области нейропсихологии было показано, что шизофрения имеет уникальный характер нарушений центральной исполнительной функции, устойчивое внимание и оперативная память были довольно уникальными для шизофрении и наводили на мысль о лобно-полосатой дисфункции. Большинство исследователей согласились с тем, что нейропсихологические нарушения при шизофрении лучше всего демонстрируют комплексные наборы тестов, затрагивающих различные нейропсихологические процессы, а не единичные изолированные тесты, и в настоящее время эти нарушения убедительно свидетельствуют о дисфункции лобно-височно-лимбической цепи.

   Среди нейропсихологических дефицитов при шизофрении более тщательно изучались устойчивое зрительное внимание, измеряемое с помощью теста непрерывной производительности (CPT), и исполнительная функция, измеряемая с помощью теста сортировки карточек Висконсина (WCST). Общие черты CPT заключаются в том, что участники должны реагировать на заранее определенные цели среди стимулов, которые предъявляются с высокой фиксированной скоростью. Задача различительной бдительности CPT может состоять из одного стимула (CPT-X, один символ или число в качестве цели) или двух последовательных стимулов (CPT-AX, символ или число, которым предшествует другой символ или число в качестве цели). Уровень сложности CPT можно повысить, размыв стимулы (ухудшенный CPT) или используя относительную цель (версия CPT-Identical Pairs или CPT-IP). Различные версии КПТ могут задействовать разные компоненты устойчивого внимания: более сложные из них являются индикаторами стабильной уязвимости, тогда как более простые могут быть промежуточными индикаторами уязвимости при шизофрении. Среди исследований, специально изучающих взаимосвязь между индексами эффективности CPT и размерами клинических симптомов, одним из наиболее последовательных результатов является то, что дефицит CPT связан с негативными симптомами. Многие исследования также показали, что более низкие результаты на CPT были связаны с расстройством мышления или симптомами дезорганизации.

   Дефицит исполнительной функции, измеренный с помощью WCST, относился к аномальной функции префронтальной коры. Дефицит в выполнении WCST является устойчивым и основным признаком шизофрении и предсказывает долгосрочную инвалидность, независимо от других когнитивных нарушений. Исследования функциональной нейровизуализации показали, что WCST активирует дорсолатеральную префронтальную кору и что дофамиметические препараты улучшают выполнение этой задачи у пациентов с шизофренией и усиливают сигнал на шум префронтальной физиологической реакции.

   Предыдущие исследования подтвердили, что дефицит устойчивого внимания и исполнительной функции специфичен для шизофрении и связан с шизофреническим патофизиологическим процессом. Дефицит также был связан с генетическим риском шизофрении и может служить эндофенотипом в генетическом анализе шизофрении.

   4. Эндофенотипический подход в молекулярно-генетических исследованиях шизофрении. Для решения проблем недостаточной мощности генетических анализов и генетической гетерогенности шизофрении была предложена альтернативная стратегия, заключающаяся в использовании специфического нейробиологического признака болезни в качестве дополнительного фенотипа, который может отражать более близко эффект одного генетического изменения.

   Зрительный устойчивый дефицит внимания, измеренный с помощью КПТ, был потенциальным эндофенотипом генетической предрасположенности к шизофрении. Дефицит КПТ присутствовал не только у больных шизофренией, но и у их непсихотических родственников. Используя данные 148 непсихотических родственников и 345 взрослых, выявлено, что отношение риска рецидива λ превышало 15 для недеградированного КПТ и больше 30 для деградировавшего КПТ.

   Дефицит исполнительной функции, измеренный с помощью WCST, также может служить эндофенотипом в генетических исследованиях шизофрении. Дефицит WCST присутствует как у больных шизофренией, так и у их здоровых братьев и сестер.

   Таким образом, использование дефицита CPT и дефицита WCST в качестве эндофенотипов шизофрении обеспечит ценную меру генетического риска, улучшит возможности генетического анализа и может помочь идентифицировать гены предрасположенности к шизофрении.

   Эта эндофенотипическая стратегия недавно была успешной при картировании нейрофизиологического дефицита шизофрении, снижения ингибирования P50, в локусах на хромосоме 15q13-14. Полногеномный анализ сцепления дефицита ингибирования P50 в девяти семьях с мультиплексной шизофренией обнаружил значительный показатель lod (Z = 5,30,  = 0) в локусе хромосомы 15q14. Когда в качестве пораженного фенотипа использовали клинический диагноз шизофрении, максимальный показатель lod для того же маркера не был статистически значимым. Другой нейробиологический дефицит, дисфункция слежения за глазами при шизофрении, был картирован на хромосоме 6p23-21 с максимальной многоточечной лод-оценкой 4,02. Опять же, в то время как клинический диагноз шизофрении использовался как пораженный фенотип, результат сцепления был незначителен.

   Таким образом, с нашими предварительными исследованиями в анализе сцепления с использованием пар сибсов, страдающих шизофренией, и нейропсихологических дефицитов при шизофрении, этот проект по сбору шизофреников из трио родитель-потомок с четко определенными нейропсихологическими эндофенотипами считается одним из важнейших проектов для поиск генов предрасположенности к шизофрении.

3. Предварительные исследования

   1. Коллекция семейных пар, страдающих шизофренией. с 1990 года посвятил себя сбору семей сестринских пар, страдающих шизофренией. С осознанием важности и критической необходимости диагностической оценки эти пробанды, сибсы с кобольным заболеванием и имеющиеся сибсы без заболевания, а также родители были оценены с помощью полуструктурированного диагностического интервью с психиатром с использованием диагностических критериев DSM-III-R. и/или DSM-IV. Кроме того, в рамках эволюционно-теоретической модели психопатологии также были собраны данные о развитии. Все эти клинические данные и данные генеалогического древа были занесены в банк данных молекулярно-генетической лаборатории (DBMGL) кафедры психиатрии Медицинского колледжа Национального Тайваньского университета под эгидой Института им. П.И. Всего для анализа сцепления в DBMGL доступно около 120 семей сестринских пар, страдающих шизофренией. Как правило, образцы ДНК получали из периферических лейкоцитов всех доступных субъектов семьи, особенно больных сибсов, по крайней мере одного непораженного сибса и родителей. Всего в DBMGL было около 1000 образцов ДНК. Также были созданы клеточные линии лимфобластных клеток, трансформированных EBV-958. Все эти субъекты исследования были хорошо информированы для этого исследования и получили информированное согласие. Все семьи, участвовавшие в этом исследовании, были приглашены присоединиться к «Семейному клубу новой надежды» для периодических встреч и обсуждений. Для получения образцов ДНК было привлечено около 150 больных шизофренией, прошедших детальную клиническую оценку и регулярное последующее наблюдение, а также всестороннюю нейропсихологическую оценку, включая CPT, WCST, WAIS-R и WMS. Около 200 нормальных контрольных субъектов также были набраны для получения образцов ДНК.

      Созданы инструменты, используемые в генетических исследованиях. График диагностических интервью для генетического исследования (DIGS) и график интервью на шизотипию (SIS) были переведены и изменены, чтобы их можно было использовать на Тайване. Шкала перцептивных аберраций (PAS) и шизотипический личностный опросник (SPQ) также использовались в общественных исследованиях расстройств личности, связанных с шизофренией. Было использовано межкультурное рассмотрение.

      Пятилетняя общенациональная совместная работа на Тайване (Taiwan Schizophrenia Linkage Study, TSLS), спонсируемая NIMH, США, по сбору семей с сибпарами, страдающими шизофренией, продолжается уже третий год. Всего будет собрано 600 семей. Были собраны образцы ДНК, клеточные линии и клинические данные DIGS, FIGS, а также данные нейропсихологического тестирования. Образец ДНК будет открыт для исследовательских групп по всему миру.

   2. Молекулярно-генетические исследования шизофрении Наши молекулярно-генетические исследования шизофрении поддерживались тремя последовательными проектами: молекулярно-генетическим проектом, спонсируемым Национальным научным советом (1989-1992 гг.), молекулярно-генетическим проектом MPGRP (1993-1998 гг.) и молекулярно-генетическим проектом. MPSS (1998–2001 годы) при поддержке NHRI. Ранняя фаза (1989-1992) этого молекулярно-генетического проекта была сосредоточена на создании лабораторий и сборе семей родственных пар больных шизофренией. 2-я фаза этого молекулярно-генетического проекта (1993-1998) продолжила сбор семей, и коллекция была расширена за счет сбора коаффективных биполярных сибпар, больных шизофренией и нормальных контролей. Мы обнаружили, что полиморфизм гена рецептора андрогенов (CAG)n имеет возможную связь с шизофренией. Это открытие подтвердило вывод DeLisi et al. Развивались молекулярно-генетические методы анализа сцепления и ассоциации генов-кандидатов, эта лаборатория Института им. П.И. (Др. Hwu) сделал упор и на эту область. Результаты этой лаборатории были следующими: (1) полиморфизм повторов (48 п.н.) в гене рецептора DRD4 не был достоверно связан с шизофренией; (2) Было обнаружено, что единственная мутация в DRD2 не связана с шизофренией (3) Образцы банка данных этого проекта объединили три международных совместных исследования с использованием подхода позиционного клонирования, для которого требуется относительно большая выборка. Одно из них организовано Гиллом и др. под названием «Группа совместных связей по шизофрении», другое возглавляет доктор Мойзес из Кильского университета, Германия, а третье — с доктором Пауэллом в Лондоне. Все эти результаты выявили возможные маркеры в хромосомах 6p, 11q, 13q, 19q и 22q. Это говорит о том, что тайваньские пациенты могут иметь гены предрасположенности в этих областях, за исключением хромосомы 13q, что соответствует олигогенетической модели. (4) Исследование ассоциации гена рецептора 5-HT2, расположенного на хромосоме 13q, дало отрицательный результат; (5) Клинико-эпидемиологический анализ с использованием сибпаров с сопутствующим заболеванием продемонстрировал тенденцию к 3 независимым кластерам симптомов дезорганизации реальности, дезорганизации и негативного состояния. (6) Слабое доказательство сцепления с локусами на хромосоме 6p24-22.

      3-я фаза молекулярно-генетического исследования (1998-2001 гг.) по-прежнему была сосредоточена на сборе сибпарных семей с сопутствующим заболеванием шизофренией и анализе сцепления по сообщениям о предполагаемых признаках хромосомных участков, включая хромосомы 1q21-q22, 1q31-q42, 8p24-p21, 15q13-q14, 22q11-q14. Результаты сцепления: (1) предполагаемые доказательства сцепления шизофрении с негативными симптомами и без них на хромосомах 6p24 и 22q12 (2) отсутствие доказательств сцепления гена субъединицы рецептора α1 (GABRA1), β1 (GABRB1) и β3 (GABAB3) с шизофренией (3) отсутствие доказательств сцепления генов глутамата GluR5 и рецептора GluR6 с шизофренией (4) отсутствие доказательств сцепления гена SCA1 с шизофренией (5) предполагаемых доказательств сцепления маркеров хромосомы 8p с шизофренией (Hwu et al., 2001a) (6) слабое свидетельство сцепления маркеров хромосомы 1q31-42 с шизофренией (7) предполагаемое свидетельство сцепления маркеров 15q13-14 с шизофренией (8) скромное свидетельство сцепления шизофрении с локусами на хромосоме 1q21-22. Подход с использованием генов-кандидатов выявил следующие результаты: (1) возможная связь между полиморфизмом гена допаминового рецептора D4 (DRD4) и быстрым ответом на лечение шизофрении (Liu et al., 2001d). (2) отсутствие связи между полиморфизмом гена цитозольной фосфолипазы А2 (c-PLA2) и шизофренией.

   3. Исследования нейропсихологического дефицита при шизофрении Мы обнаружили нарушение устойчивого внимания с помощью непрерывного теста работоспособности (CPT) в качестве признака шизофрении. Семейные исследования показали, что устойчивый дефицит внимания, измеренный с помощью CPT, является маркером уязвимости к шизофрении. Результаты таковы: (1) значительная часть непсихотических родственников пробандов с шизофренией (19-34%) имеет дефицит КПТ, который можно предсказать по результатам КПВ их пробандов; (2) у лиц с шизотипическими чертами личности также обнаруживаются дефициты КПТ, которые специфически связаны с негативными факторами шизотипии; (3) Дефицит КПТ присутствует у пациентов с шизофренией, особенно связан с негативными и дезорганизованными симптомами, а пациенты с более тяжелыми вариантами КПТ не поддаются нейролептической терапии.

   Специфичность КПТ изучали в группе больных шизофренией (n=41) в отличие от группы больных биполярным расстройством с психотической симптоматикой (n=46) и группы больных биполярным расстройством без психотической симптоматики (n=22) и группы пациентов с непсихотическим большим депрессивным расстройством (n=22). Выявлено, что дефицит СРТ является стабильным индикатором уязвимости шизофрении, опосредующим индикатором уязвимости биполярного расстройства и зависимым от состояния индикатором большой депрессии. Эти результаты показывают, что дефицит CPT является достоверным маркером шизофрении.

   Все эти предварительные данные подтверждают, что PI и его партнеры способны выполнить этот проект, включая сбор семей трио родителей и потомков, экстракцию ДНК и лабораторные методы культивирования клеток, а также нейропсихологическую оценку.

4. Дизайн и методы исследования

   1. Субъекты Мы готовимся собрать трио родителей и потомков из Медицинского центра больницы Национального Тайваньского университета и дочерних психиатрических больниц, Таоюаньского психиатрического центра. Пробанды, которые должны быть завербованы, - это жители северной части Тайваня. Информированное согласие будет получено до набора на исследование. Родственниками первой степени родства, которых следует завербовать, являются родители и по крайней мере один из здоровых братьев и сестер. Диагноз пробандных случаев - шизофрения, определяемая критериями DSM-IV.

   1. Меры клинической оценки I. Диагностическое интервью для генетических исследований (DIGS) Все испытуемые будут лично опрошены с помощью DIGS, созданного Цуангом и Фараоне из Инициативы генетики человека NIMH. DIGS проводит детальную оценку течения болезни, а также тщательную оценку симптомов злоупотребления психоактивными веществами и настроения. Это позволяет легче проводить дифференциальную диагностику между шизофренией и психозами, связанными с психоактивными веществами, шизоаффективными расстройствами и психотическими расстройствами настроения. Эта подробная оценка помогает защитить от ложноположительного диагноза.

      Кроме того, DIGS дает подробное описание многих областей психопатологии: соматизация, большая депрессия, мания/гипомания, дистимия/депрессивная личность/гипертимическая личность, злоупотребление алкоголем, патологическая склонность к азартным играм и антисоциальное расстройство личности. Он также собирает демографические и медицинские данные, о которых сообщают сами люди. Оценки также производятся по шкале глобальной оценки и шкале оценки положительных и отрицательных симптомов. Шизотипические и другие личностные черты оси II кластера А оцениваются с помощью модифицированной версии структурированного интервью для шизотипии.

      II. Семейное интервью для генетических исследований (FIGS) В качестве дополнительного источника информации о родословной будет проводиться FIGS со всеми членами семьи. В этом интервью систематически опрашивают информанта о наличии психических заболеваний у родственников. Мы управляем FIGS в три этапа. Во-первых, структура семейной родословной рисуется и просматривается вместе с информантом. Затем задаются психиатрические проверочные вопросы обо всех родственниках в родословной. Затем на основе ответов на проверочные вопросы заполняется один или несколько из пяти контрольных списков симптомов (депрессия, мания, злоупотребление психоактивными веществами, психоз, параноидальное/шизоидное/шизотипическое расстройство личности) для каждого родственника первой степени родства, супруга или другого родственника. известно информатору.

      DIGS и FIGS были переведены на китайский язык. Надежность и достоверность были установлены в наших предварительных исследованиях.

      III. Процедура диагностики Все диагнозы будут поставлены с использованием DSM-IV. Эти диагнозы будут поставлены двумя сертифицированными психиатрами, имеющими клинический и исследовательский опыт диагностики психотических пациентов. Окончательные диагнозы пробандов и родственников будут основываться на содержании интервью, виньетке случая, информации, предоставленной родственниками, и полном просмотре медицинской карты каждым диагностом. Если два диагноста расходятся во мнениях по поводу какого-либо диагноза пациента, третий диагност будет использоваться для разрешения конфликтов.

      IV. Обучение интервьюеров В рамках программы обучения интервьюеры будут сертифицированы: (1) приобретать практические знания о диагностических системах, используемых в DIGS и FIGS; (2) развить опыт в администрировании и подсчете очков структурированного диагностического инструмента; и (3) полностью понимать процесс получения информированного согласия и необходимость строгого соблюдения процедур получения согласия.

      Программа обучения разделена на два этапа: (1) формальное дидактическое обучение и (2) контролируемый опыт с использованием структурированного диагностического интервью.

      Дидактическое обучение начинается с чтения и ознакомления слушателей с диагностическими системами, используемыми DIGS. Это первоначальное знакомство дополняется лекциями, в которых рассматриваются диагностические критерии всех психических расстройств, затронутых в ходе интервью. Центральными вопросами, затронутыми в этих лекциях, являются: (1) важность постановки диагноза на основе объективного описания поведения; (2) тщательное разграничение и дифференциация синдромов, включающих как психотические, так и аффективные явления; и (3) прояснение основных различий в определении синдрома между диагностическими системами.

      Второй компонент обучения фокусируется на структурированных диагностических инструментах. Сначала слушатели знакомятся со структурой интервью. Этому способствует проведение стажерами практических интервью, в которых они попеременно играют роли интервьюера и испытуемого. Эти первоначальные интервью проводятся в присутствии старшего психиатра, чтобы выявить проблемные области в администрации и обеспечить клиническое использование интервью.

      Программа обучения также включает модуль по модифицированному структурированному интервью на шизотипию (SIS). Обучение SIS включает в себя обзор литературы о шизотипическом расстройстве личности, ориентацию и обзор инструмента, возможность для обучаемых наблюдать и давать клинические оценки интервью в реальном времени, а также обзор и обсуждение клинических оценок для уточнения критериев оценки. Все учебные курсы были хорошо зарекомендовали себя в наших предварительных исследованиях.

   2. Нейропсихологические оценки

      Принимая во внимание сложность предполагаемых нейропсихологических нарушений при шизофрении, была выбрана серия тестов, включающая несколько аспектов церебрального процесса, для изучения общей картины нейропсихологических нарушений у пациентов. Батарея состоит из тестов, предназначенных для измерения:

      1. Устойчивое внимание (непрерывный тест производительности (CPT), как в тестовых ситуациях без ухудшения, так и в условиях ухудшения)
      2. Центральные исполнительные функции (Висконсинский тест сортировки карточек (WCST); Trail-making B);
      3. Функция памяти (третье издание шкалы памяти Weschler, WMS-III).
      4. Тест на общие интеллектуальные достижения (конструкция блока, завершение рисунка, информация, сходство, арифметика, диапазон цифр, замена символов цифр).

      Нейропсихологический тест, использованный в настоящем исследовании, и валидность набора тестов были хорошо известны в наших предварительных исследованиях. Мы готовимся провести батарею нейропсихологических тестов пробандам и всем завербованным членам семьи, насколько это возможно. Батарея нейропсихологических тестов довольно трудоемка, по оценкам, ее выполнение занимает от 3 до 4 часов. Следовательно, батарея нейропсихологических тестов будет проводиться в виде разделенных сеансов, завершенных в течение двух дней. Два научных сотрудника со степенью магистра, специализирующихся в области психологии, будут выполнять все тесты.

   2. Лабораторная работа: Этот проект состоит из двух направлений лабораторной работы.

   1. Сбор образцов крови и извлечение ДНК От двадцати до тридцати мл венозной крови будет получено от всех испытуемых в вакутейнерные пробирки с фиолетовым верхом и зеленым верхом. Образец крови в фиолетовых пробирках будет использоваться для выделения ДНК. Мы готовимся к извлечению ДНК с использованием модифицированного метода высаливания.
   2. Подготовка клеточной линии Во всех вновь собранных образцах крови лимфоциты будут трансформированы в лимфобластные клетки для сохранения клеточной линии, которая будет депонирована в банк клеток NHRI, как того требовало предложение. Подробные процедуры культивирования клеток, установленные в нашей молекулярно-генетической лаборатории, перечислены в прикрепленных файлах молекулярно-генетического исследования.

   3. Управление данными Мы уже настроили программное обеспечение для компьютеризированной базы данных DIGS в нашем предыдущем исследовании (Тайваньское исследование связи шизофрении, TSLS) и банк нейропсихологических данных в другом предыдущем исследовании (Многомерное психопатологическое исследование шизофрении, MPSS). Все клинические и нейропсихологические данные этого проекта будут включены в эти банки данных.

   Данные родословной семьи, данные ДНК и данные клеточных культур будут включены в наш ранее созданный банк данных: Банк молекулярно-генетических лабораторных данных (BMGLD). Этот BMGLD будет включать 4 набора данных: (1) генеалогическое древо и банк данных генотипирования. Эти данные вводятся с помощью кириллической программы; (2) банк образцов ДНК; (3) клинические данные и банк эндофенотипов и (4) банк клеточных линий. Этот хорошо организованный BMGLD будет иметь большое значение для непрерывной исследовательской работы.

   Процедуры ввода данных будут следовать рекомендациям, которые мы используем для наших текущих проектов. Эти процедуры направлены на максимальную точность данных. Данные будут введены дважды, а исходный и проверочный файлы будут сравниваться на наличие расхождений. Все наборы данных будут регулярно копироваться на диск. Резервные и исходные наборы данных будут храниться в разных запертых офисах.

   Наборы данных в этом проекте будут доступны другим исследователям в соответствии с рекомендациями RFA. Мы создадим набор данных, который будет включать все данные, требуемые RFA, и любые дополнительные данные, которые NHRI пожелает включить в банк клеток. Эти данные будут отправлены в центр управления данными, назначенный NHRI, для последующего распространения среди членов консорциума по генотипированию.

5. Ожидаемые результаты Мы ожидаем, что посредством этого проекта мы достигнем следующих целей: (1) сотрудничать с этим важным Тайваньским консорциумом по генотипированию, предложенным NHRI, (2) обнаружить основные гены предрасположенности к шизофрении, которые связаны с нейропсихологическим эндофенотипом, (3) провести дальнейшее точное картирование областей хромосом, наводящих на размышления о сцеплении, чтобы воспроизвести результаты предыдущих исследований сцепления с использованием нашего ранее собранного семейного образца совместно затронутых родственных пар, и (4) поместить клеточные линии лимфобластов в банк клеток NHRI, служащий национальным ресурсом для базовых исследования на Тайване.

6. Субъекты-люди Это генетическое исследование, все набранные субъекты должны представить свое подписанное информированное согласие до того, как будут зачислены в исследование. В процессе клинического опроса и нейропсихологических обследований нет инвазивных процедур потенциальной опасности. Образцы крови 30 мл. будет нарисовано. Это будет сделано с помощью иглы, и это может вызвать некоторые болезненные ощущения, которые обычно незначительны в клинических условиях. Эти участвующие субъекты будут успокоены, так как во время процедур исследования возникнет чувство дискомфорта.

   Все исследователи, участвовавшие в этой процедуре исследования, хорошо обучены. Если во время процедуры исследования произойдет какая-либо неожиданная эмоциональная или физическая реакция, P.I. проекта должны быть проинформированы, и необходимые действия будут предприняты немедленно. Поскольку это генетическое исследование, в процедуре исследования может возникнуть вопрос генетического консультирования. Участвующие исследователи будут обучены до посещения этого исследования по этой теме генетического консультирования. Эти субъекты или члены их семей, которые нуждаются в специальной генетической консультации, будут направлены в специальную клинику, расположенную в амбулаторном отделении больницы Национального Тайваньского университета при больнице имени П.И. этого проекта за особую заботу.

7. Исследование животных не проводится.
8. Потенциальные опасности Клиническое собеседование, нейропсихологическая оценка и взятие образца крови будут очень безопасными. Однако это генетическое исследование может вызвать некоторую эмоциональную реакцию семьи, особенно в отношении генетической наследуемости. В этом случае присутствующие исследователи, хорошо обученные, дадут немедленную гарантию и оценку. Если что-то будет сочтено необходимым, эти субъекты будут направлены в специальную клинику П.И. этого проекта для специальной психиатрической помощи.

Процедура забора крови может вызвать легкую степень болезненных ощущений или чувство страха. Эти случаи будут успокоены немедленно. Вообще говоря, эта процедура исследования безопасна, а потенциальные опасности минимальны и управляемы, если что-то случится.