Uso de vetores SV40 para tratar leucemia mielóide crônica (LMC)

Uma nova metodologia que facilita o silenciamento específico de genes foi desenvolvida recentemente. O método é baseado na propriedade de pequenas moléculas de ácidos nucléicos (RNA) de reprimir especificamente a expressão de genes-alvo. Essas pequenas moléculas de RNA interferente (siRNA) demonstraram recentemente reprimir, em células de cultura de tecidos, um dos dois tipos de genes de fusão comuns presentes em pacientes com LMC. Esses estudos mostraram que o tratamento com siRNA sintético inibiu o crescimento celular e aumentou a sensibilidade ao imatinibe. Esses achados oferecem esperança de que uma nova forma de terapia genética baseada nessa estratégia possa melhorar o resultado do tratamento de pacientes com LMC, principalmente quando usada em combinação com outras abordagens, como o inibidor de tirosina quinase imatinibe, mencionado acima.

Nosso grupo desenvolveu um vetor inovador que é mais adequado para entregar moléculas de siRNA em células hematopoiéticas humanas com eficácia suficiente. O vetor é baseado em um vírus de macaco chamado símio vírus 40 (SV40). O revestimento viral, ou capsídeo, é produzido biossinteticamente. Ele foi projetado para se automontar no tubo de ensaio em torno dos ácidos nucléicos de sua escolha e para entregar esse DNA ou RNA às células-alvo. Este vetor é mais seguro do que outros vetores virais disponíveis, pois todo o material genético viral é excluído do produto final. O vetor não provoca resposta imune, permitindo assim a administração repetida. Começaremos o projeto testando as moléculas de siRNA recentemente publicadas contra um dos genes de fusão, e várias moléculas de siRNA alternativas que iremos projetar contra os outros genes de fusão. As moléculas serão testadas quanto à eficácia em linhagens celulares de cultura de tecidos, medindo-se a repressão do respectivo gene de fusão, redução do nível da tirosina quinase e inibição do crescimento celular. As moléculas de siRNA mais eficazes serão selecionadas para estudos posteriores. Os vetores serão testados em linhas celulares para silenciamento de genes e morte celular como antes. Na fase final, testaremos os melhores vetores quanto à sua eficácia em glóbulos brancos obtidos de pacientes com LMC.