Diagnóstico Precoce de Melanoma Usando Perfil de Expressão e Amostragem Não Invasiva de Células da Pele (DermTech)

Este é um estudo multicêntrico, patrocinado pela Derm Tech (DTI) International.

Objetivos específicos do estudo

Este estudo de pesquisa propõe usar um método não invasivo para capturar células superficiais em lesões cutâneas pigmentadas suspeitas de serem melanomas iniciais. Esta tecnologia de "biópsia" não invasiva foi desenvolvida e patenteada pela DermTech International. O RNA nas células da pele capturadas por este método será perfilado para diagnosticar a natureza da lesão (ou seja, melanoma maligno ou não). Um resultado bem-sucedido desta proposta criaria um ensaio diagnóstico não invasivo candidato com base em um perfil de expressão gênica para identificar melanomas em estágio inicial. Este ensaio e mais em particular o perfil de expressão gênica de diagnóstico são considerados candidatos porque o perfil teria que ser validado (ou seja, comprovado ser diagnóstico) em ensaios clínicos maiores. Os resultados secundários podem incluir testes para diagnóstico e prognóstico de uma variedade de lesões cutâneas pigmentadas.

Objetivo Específico 1: Criar um conjunto de amostras de lesões cutâneas pigmentadas. Cada amostra composta por:

1. RNA recuperado por stripping da epiderme superficial sobre a lesão (o stripping também será usado para recuperar RNA de áreas normais da pele e nevos benignos como controles).
2. Uma biópsia padrão da mesma lesão e acompanhamento histológico e diagnóstico. As biópsias seriam feitas após a remoção da fita e submetidas à análise histopatológica padrão, o que forneceria um diagnóstico "padrão ouro". Esses diagnósticos poderiam então ser correlacionados com os dados gerados em

Objetivo 2.

Este objetivo específico é composto por três objetivos individuais:

1. Análise de amostras de RNA de lesões selecionadas por DNA microarray.
2. Correlação dos dados de expressão gênica com a histopatologia.
3. Criação de um classificador de expressão candidato para diagnóstico de melanoma.

O tape stripping (comercializado como um método para recuperação de RNA como Epidermal Genetic Information Retrieval ou EGIR™) é um método não invasivo que permite a recuperação de células que compreendem e estão associadas à epiderme superior [4]. A viabilidade da amostragem não invasiva da epiderme humana por remoção sequencial de fita adesiva foi demonstrada por Morhenn et al [4]. Seu trabalho mostrou que a fita adesiva da pele produziu RNA suficiente para análise pelo ensaio de proteção de ribonuclease para detectar espécies específicas de RNA, incluindo aquelas conhecidas por serem de baixa abundância.

4. O tecido removido terapeuticamente será coletado

O procedimento de remoção da fita será realizado antes de todos os procedimentos de biópsia. A fita será aplicada no local e esfregada rapidamente com a ponta arredondada de um marcador ou tubo de ensaio de plástico em movimentos circulares. Um mínimo de 15 movimentos circulares deve ser feito antes que a fita seja removida. Para acomodar o fato de que muitos locais serão menores do que o diâmetro da fita, será tomado cuidado para aplicar a fita apenas na lesão ou no local de controle e não na epiderme normal circundante. A borda da lesão será demarcada na fita com marcador cirúrgico; quando as fitas forem processadas para extração de RNA, a marcação permitirá a retirada da fita que não entrou em contato com a lesão (e que pode abrigar epiderme normal). Um total de 4 fitas será usado para amostrar um local maior ou igual a 6 mm de diâmetro. Dados preliminares obtidos do DTI mostram que lesões com menos de 6 mm de diâmetro podem exigir até 8 fitas para recuperar o RNA. A remoção da fita também será realizada em uma área de pele de aparência normal (de preferência; parte superior das costas ou processo mastóide), bem como em um nevo benigno (se disponível) para usar como comparação. Após a amostragem, as fitas serão armazenadas a -20oC ou menos. As fitas serão enviadas ao DTI em gelo seco, por correio expresso, para análise.

Biópsia Após a conclusão do procedimento de remoção da fita, toda a lesão será extirpada cirurgicamente de acordo com a prática clínica padrão. A biópsia é um procedimento padrão de atendimento que seria realizado independentemente da pesquisa. Todos os tecidos retirados são fixados em formol e encaminhados ao laboratório de histopatologia, onde são incluídos em parafina e seccionados para análise histopatológica. Os resultados da patologia serão coletados para distinguir o diagnóstico. Os relatórios de patologia do sujeito serão identificados com os identificadores exclusivos do sujeito atribuídos antes de serem usados ​​no estudo para proteger a identidade do sujeito.