Frühzeitige Diagnose von Melanomen mithilfe von Expressionsprofilen und nicht-invasiver Probenahme von Hautzellen (DermTech)

Dies ist eine multizentrische Studie, gesponsert von Derm Tech (DTI) International.

Spezifische Ziele der Studie

Diese Forschungsstudie schlägt vor, eine nicht-invasive Methode zu verwenden, um oberflächliche Zellen auf pigmentierten Hautläsionen zu erfassen, bei denen der Verdacht besteht, dass es sich um frühe Melanome handelt. Diese nicht-invasive „Biopsie“-Technologie wurde von DermTech International entwickelt und patentiert. Die mit dieser Methode erfasste RNA in Hautzellen wird profiliert, um die Art der Läsion zu diagnostizieren (d. h. malignes Melanom oder nicht). Ein erfolgreiches Ergebnis dieses Vorschlags würde einen Kandidaten für einen nicht-invasiven Diagnosetest auf der Grundlage eines Genexpressionsprofils zur Identifizierung von Melanomen im Frühstadium schaffen. Dieser Assay und insbesondere das diagnostische Genexpressionsprofil gelten als Kandidaten, da das Profil validiert werden müsste (d. h. sich in größeren klinischen Studien als diagnostisch erwiesen haben. Zu den sekundären Ergebnissen könnten Tests zur Diagnose und Prognose verschiedener pigmentierter Hautläsionen gehören.

Spezifisches Ziel 1: Erstellung eines Mustersatzes pigmentierter Hautläsionen. Jede Probe besteht aus:

1. RNA wird durch Abziehen des Klebebands von der oberflächlichen Epidermis, die über der Läsion liegt, gewonnen (das Abziehen des Klebebands wird auch verwendet, um RNA aus normalen Hautbereichen und gutartigen Nävi als Kontrollen zu gewinnen).
2. Eine Standardbiopsie derselben Läsion und begleitende Histologie und Diagnose. Nach dem Abziehen des Klebebands würden Biopsien entnommen und einer standardmäßigen histopathologischen Analyse unterzogen, die eine „Goldstandard“-Diagnose liefern würde. Diese Diagnosen könnten dann mit den in Specific generierten Daten korreliert werden

Ziel 2.

Dieses konkrete Ziel setzt sich aus drei Einzelzielen zusammen:

1. Analyse ausgewählter Läsions-RNA-Proben mittels DNA-Microarray.
2. Korrelation von Genexpressionsdaten mit der Histopathologie.
3. Erstellung eines Kandidaten-Expressionsklassifikators für die Melanomdiagnose.

Das Abziehen von Klebebändern (kommerziell als Methode zur RNA-Wiedergewinnung als Epidermal Genetic Information Retrieval oder EGIR™ vermarktet) ist eine nicht-invasive Methode, die die Wiederherstellung von Zellen ermöglicht, die die obere Epidermis umfassen und mit ihr verbunden sind [4]. Die Machbarkeit einer nicht-invasiven Probenahme menschlicher Epidermis durch sequenzielles Abziehen des Klebebands wurde von Morhenn et al. gezeigt [4]. Ihre Arbeit zeigte, dass das Abziehen des Klebebands von der Haut ausreichend RNA für die Analyse mittels Ribonuklease-Schutzassay lieferte, um bestimmte RNA-Spezies nachzuweisen, einschließlich solcher, von denen bekannt ist, dass sie nur in geringer Häufigkeit vorkommen.

4. Therapeutisch entnommenes Gewebe wird gesammelt

Vor allen Biopsieverfahren wird ein Klebebandentfernungsverfahren durchgeführt. Das Klebeband wird an der Stelle angebracht und mit dem stumpfen, abgerundeten Ende eines Markers oder eines Plastikreagenzglases in kreisenden Bewegungen kräftig gerieben. Es müssen mindestens 15 kreisende Bewegungen ausgeführt werden, bevor das Klebeband entfernt wird. Um der Tatsache Rechnung zu tragen, dass viele Stellen kleiner als der Durchmesser des Bandes sind, wird darauf geachtet, das Band nur auf der Läsion oder Kontrollstelle und nicht auf der umgebenden normalen Epidermis anzubringen. Der Rand der Läsion wird auf dem Klebeband mit einem chirurgischen Marker markiert; Wenn die Bänder für die RNA-Extraktion verarbeitet werden, ermöglicht die Markierung die Entfernung des Bandes, das die Läsion nicht berührt hat (und das möglicherweise normale Epidermis beherbergt). Insgesamt werden 4 Bänder verwendet, um eine Probenahme an einer Stelle mit einem Durchmesser von mindestens 6 mm durchzuführen. Vorläufige Daten von DTI zeigen, dass bei Läsionen mit einem Durchmesser von weniger als 6 mm möglicherweise bis zu 8 Bänder erforderlich sind, um RNA wiederherzustellen. Das Abziehen des Klebebands wird auch an einem normal erscheinenden Hautbereich (vorzugsweise am oberen Rücken oder Warzenfortsatz) sowie an einem gutartigen Nävus (falls verfügbar) als Vergleich durchgeführt. Nach der Probenahme werden die Bänder bei -20 °C oder darunter gelagert. Die Bänder werden zur Analyse auf Trockeneis per Expresspost an DTI geschickt.

Biopsie Nach Abschluss des Tape-Stripping-Verfahrens wird die gesamte Läsion gemäß der klinischen Standardpraxis chirurgisch entfernt. Die Biopsie ist ein Standardverfahren, das unabhängig von der Untersuchung durchgeführt wird. Alle entnommenen Gewebe werden in Formalin fixiert und an ein histopathologisches Labor geschickt, wo sie in Paraffin eingebettet und zur histopathologischen Analyse geschnitten werden. Pathologische Ergebnisse werden zur Unterscheidung der Diagnose gesammelt. Die Pathologieberichte der Probanden werden vor der Verwendung in der Studie mit den zugewiesenen eindeutigen Probandenkennungen identifiziert, um die Identität der Probanden zu schützen.