Atividade Física Recreativa e Perfil Cardiometabólico

Este estudo transversal foi realizado em um grupo representativo de crianças de 6 a 14 anos identificadas no Centro de Saúde do Jovem localizado próximo à Universidade Federal de São Paulo (São Paulo, SP, Brasil). Um total de 110 crianças foram identificadas durante o período do estudo. No entanto, cinco indivíduos com problemas respiratórios e 12 indivíduos que não concordaram em participar foram excluídos do estudo. Além disso, também foram excluídos 13 indivíduos que não realizaram avaliações antropométricas, metabólicas ou de aptidão física no período pós-treinamento. Portanto, 80 crianças (32 meninas e 48 meninos) foram incluídas neste estudo. Nenhuma criança apresentou sinais clínicos de distúrbios musculoesqueléticos ou ortopédicos que a impedissem de realizar os testes de aptidão física propostos. O Comitê de Ética da Universidade Federal de São Paulo aprovou o protocolo do estudo (Número: 795.262). Todos os pais e filhos assinaram formulários de consentimento informado/assentimento por escrito.

Projeto Experimental: Cada criança completou o protocolo experimental durante um período de 10 semanas, consistindo nas medições iniciais de dados antropométricos, composição corporal, níveis de irisina, parâmetros metabólicos e de aptidão física. Todas essas medidas foram repetidas após o programa de atividade física recreativa de 10 semanas e foram realizadas até 72 horas após a última sessão de treinamento.

Programa de Atividade Física Recreativa: Os participantes realizaram 10 semanas de programa de atividade física recreativa em circuito de treinamento, que consiste em programa de exercícios para flexibilidade, coordenação, força (membros superiores e inferiores), resistência aeróbia controlada pelo uso do monitor Polar S810i (Polar Electro OY , Finlândia; taxa de amostragem=100Hz) e equilíbrio dinâmico para melhorar a capacidade funcional. Foram realizadas 40 sessões com duração (60 minutos), intensidade (65%-85% da frequência cardíaca de reserva) e frequência (4 sessões/semana). Cada sessão consistia em três partes: aquecimento (10 minutos), sessão de atividade física (45 minutos) e relaxamento (5 minutos). Além disso, a escala subjetiva de esforço percebido de Borg foi aplicada a todas as crianças para controle da intensidade do treinamento.

Antropometria: O peso corporal e a altura foram medidos com roupas leves, sem sapatos, usando uma balança de trave de equilíbrio padrão. As circunferências da cintura e do quadril foram medidas com fita inextensível. A circunferência da cintura foi registrada em um nível intermediário entre a margem inferior da costela e a crista ilíaca no final da expiração normal. .

Composição corporal: A composição corporal foi avaliada por bioimpedância elétrica com mão-pé de frequência única (monitor ImpediMed DF50, Impedimed, Austrália). As crianças foram orientadas a evitar atividades físicas e consumir líquidos 2 horas antes da avaliação para evitar erros de medição devido a desequilíbrios de fluidos. Essa avaliação foi realizada após 5 minutos de repouso na posição supina, e os eletrodos foram aplicados na mão, punho, tornozelo e pé do lado direito do corpo. A gordura corporal foi calculada com equações de predição.

Aptidão cardiorrespiratória: O teste de corrida de 20 metros (20MST) foi realizado para estimar a aptidão cardiorrespiratória. O teste começa a 8 km/h e aumenta 0,5 km/h a cada minuto. Este teste foi realizado em uma superfície plana e explicado pelo membro da equipe de campo. Todas as crianças fizeram adaptações no teste 20MST. A velocidade na última etapa completada por cada criança foi registrada e utilizada para calcular o VO2máx (ml/kg/min) de acordo com a equação proposta por Léger et al.

Salto Amplo em Pé: A criança fica atrás de uma linha marcada no chão. Utiliza-se a impulsão e aterrissagem com os dois pés, com balanço dos braços, a criança salta o mais longe possível com os dois pés simultaneamente. A pontuação do item de teste (melhor de três tentativas) é a distância entre a linha de partida e a posição de aterrissagem (medida em centímetros).

Teste de Sentar e Alcançar: A flexibilidade foi avaliada por meio do Wells Bench. Para esse teste, a criança realizou o movimento com as mãos sobrepostas, pés apoiados no banco e joelhos totalmente estendidos com auxílio da pesquisadora. O resultado foi dado pela distância máxima obtida em três tentativas, respeitando o intervalo de um minuto entre elas.

Teste de Força de Preensão: A força de preensão foi medida para ambas as mãos usando um dinamômetro digital (Kern & Sohn, Modelo MAP 80K1S, Alemanha). Nesse teste, a criança estava sentada em cadeiras de tamanho adequado, ombro abduzido, cotovelo em flexão de 90 graus e punho em posição neutra. Em seguida, a pesquisadora solicitava que a criança realizasse a maior força possível no menor tempo. A média de três contrações voluntárias máximas foi registrada para cada mão e expressa em Kg.

Coleta de sangue e variáveis ​​bioquímicas: Pela manhã (7h00 - 9h00), após jejum noturno, as amostras de sangue venoso (10 ml) foram coletadas por punção venosa de uma veia do antebraço em tubos vacutainer separados contendo anticoagulante K2EDTA seco por pulverização ou com gel separador de soro. As amostras de EDTA foram centrifugadas dentro de 1 hora após a coleta de sangue (4°C - 1.500 g por 15 min) e as alíquotas de plasma para medição de irisina foram armazenadas a -80°C até o ensaio. Procedimentos enzimáticos automatizados foram usados ​​para medir glicose e insulina por métodos de rotina no Laboratório Clínico do Hospital do Rim e Hipertensão. A resistência à insulina foi calculada pelo método de avaliação do modelo de homeostase (HOMA-IR), de acordo com a seguinte fórmula: [glicose (mg/dl)/18 x insulina (mUI/ml)]/22,5.

Avaliação da irisina: Os níveis de irisina no plasma foram determinados usando um kit ELISA disponível comercialmente (MyBioSource, número de catálogo: MBS 706887, San Diego, CA, EUA). Os coeficientes de variação intra-ensaio e inter-ensaio foram inferiores a 8%. Esses ensaios foram realizados em duplicata e, para remover qualquer viés, o pesquisador desenvolveu técnicas de análise cega.

Variáveis ​​hemodinâmicas e variabilidade da frequência cardíaca: Os níveis de pressão arterial foram medidos duas vezes no braço direito com a criança na posição sentada usando um dispositivo oscilométrico automatizado (Omron HEM907XL; Omron Healthcare; EUA) com manguito de tamanho apropriado. O valor da pressão arterial foi a média de três medidas feitas em intervalos de 2 minutos. Após esse procedimento, as crianças foram solicitadas a deitar silenciosamente em decúbito dorsal em uma cama com o mínimo de movimento corporal e manter a respiração espontânea por 10 minutos para registrar a frequência cardíaca em repouso e a variabilidade da frequência cardíaca de curto prazo usando um monitor Polar S810i (Polar Electro OY, Finlândia; taxa de amostragem = 100 Hz). O mesmo pesquisador cego para os dados clínicos realizou a avaliação de todas as crianças.

Processamento dos Dados de Variabilidade da Frequência Cardíaca: Os índices de variabilidade da frequência cardíaca foram calculados conforme descrito anteriormente 27, 28. Resumidamente, os intervalos normais de batimento a batimento foram transferidos do Polar S810i para o Precision Performance Software por um dispositivo de interface de infravermelho. Esses dados foram processados ​​em uma rotina prévia específica projetada no MatLab (Math Works, versão 6.0, EUA) para a seleção automática do RR de 5 minutos com a menor variância. Posteriormente, essas séries temporais com duração de 5 minutos foram analisadas no software Kubios (Biosignal Analysis and Medical Image Group, University of Kuopio, Finlândia). Neste software, os artefatos foram corrigidos com um filtro moderado e os componentes do domínio do tempo foram calculados. Os seguintes índices no domínio do tempo foram analisados: frequência cardíaca (FC), MNN (média de todos os intervalos RR normais), SDNN (desvio padrão dos intervalos RR), RMSSD (raiz quadrada média de diferenças sucessivas intervalos RR) e pNN50 (porcentagem intervalos RR com diferença de duração superior a 50 ms). Os componentes do domínio da frequência também foram avaliados por um espectro de 2 potências. A frequência clássica de baixa frequência (LF = 0,041-0,15 Hz) e alta frequência (HF= 0,15-0,40 Hz) foram expressas em unidades normalizadas (n.u.). Além disso, a relação LF/HF também foi calculada. A análise espectral foi estimada conforme recomendado usando o método não paramétrico de algoritmos de transformada rápida de Fourier.

Isolamento de Células Mononucleares de Sangue Periférico: Neste ensaio, 5-6 mL de sangue periférico foram coletados em tubos de EDTA. Sob condições estéreis, as cavidades da tíbia e do fêmur foram lavadas com DMEM (meio de Eagle modificado por Dulbecco, GIBCO, EUA) para obter medula óssea (BM). PB e BM foram fracionados por centrifugação de gradiente de densidade (2.500 rpm, 25 min, 20-22°C) (Ficoll-Paque, GE, Alemanha) e, em seguida, células mononucleares obtidas de suas amostras foram direcionadas para quantificação numérica e função in vitro .

Células progenitoras endoteliais Imunofenotipagem e quantificação por citômetro de fluxo: células mononucleares foram consideradas células progenitoras endoteliais como células CD34+/VEGFR2+. Resumidamente, 1x106 células mononucleares foram incubadas individualmente (temperatura ambiente, no escuro, 30 min) com os seguintes anticorpos: anti-CD34-PeCY7 mais VEGFR2-FITC ou com controles de isotipo anti-IgG-PE-Cy7 mais IgG-FITC. Após a incubação, as células foram lavadas em PBS e fixadas em solução de paraformaldeído a 1%. As células fixadas foram mantidas (4°C, no escuro, por 15-20 horas), e então analisadas em citômetro de fluxo (FACSCANTO, BD Biosciences, EUA) coletando 1.000.000 eventos. Os dados foram analisados ​​usando o software BD FACSDIVA. Os portões foram estabelecidos no gráfico de dispersão frontal e lateral (FSC/SSC) correspondente a células mononucleares selecionadas seguidas por portão CD34-PeCY7 mais VEGFR2-FITC. O número de EPCs (CD34+/VEGFR2+) foi calculado como a porcentagem de eventos de CMNs30.

Células progenitoras endoteliais - Ensaio de capacidade funcional in vitro: Células mononucleares foram direcionadas individualmente para unidade formadora de colônia in vitro. Resumidamente, 5x106 MNCs foram cultivadas (37°C, 5% de CO2, 95% de umidade) em fibronectina pré-revestida de 6 poços semeada com meio EndoCult. Após 48 horas, 1x106 células não aderentes foram transferidas em triplicado para fibronectina pré-revestida de 24 poços e cultivadas por 72-96 horas (37°C, 5% de CO2, 95% de umidade) em meio EndoCult. A seguir, as unidades formadoras de colônia foram contadas manualmente por 2 observadores cegos em microscópio invertido.

Análise Estatística: As análises estatísticas foram realizadas usando SPSS versão 21.0 para Windows (IBM Corporation, EUA). As variáveis ​​categóricas foram comparadas por meio do teste qui-quadrado. Todas as variáveis ​​contínuas foram examinadas quanto à normalidade com o teste de Shapiro-Wilk. Uma vez que nossos dados tiveram distribuição não paramétrica, foi utilizado o teste de Wilcoxon para dados pareados a fim de avaliar a diferença entre os valores basais e pós-programa de atividade física recreativa. Além disso, usamos o coeficiente de correlação rho de Spearman para determinar a relação entre irisina e fatores independentes. Os dados foram expressos como média ± desvio padrão. Os testes estatísticos foram bicaudais e o nível de significância foi estabelecido em P<0,05.