Ensaio clínico baseado na comunidade com alimentos complementares direcionados à microbiota (MDCFs) feitos de ingredientes alimentares disponíveis localmente para o manejo de crianças com desnutrição aguda pós-grave Desnutrição aguda moderada (MAM pós-SAM)

Fundo:

A desnutrição aguda moderada (MAM), um importante problema de saúde global, é definida como definhamento (i.e. peso para altura entre <-2 e -3 escores Z dos Padrões de Crescimento Infantil da OMS) e/ou circunferência do braço superior (MUAC) maior ou igual a 115 mm e menor que 125 mm. De acordo com o Relatório Global de Nutrição de 2017, 8% ou 52 milhões de crianças com menos de cinco anos sofriam de desnutrição aguda em todo o mundo em 2016 e o ​​atraso no crescimento ou desnutrição crônica afetou 23% ou 155 milhões de crianças. Aproximadamente uma em cada 6 crianças menores de 5 anos no sul da Ásia sofreu de MAM em 2013 (ou seja, 17%). Essas crianças correm maior risco de desnutrição aguda grave (SAM) e têm um risco três vezes maior de mortalidade por doenças transmissíveis comuns do que crianças bem nutridas. Bangladesh tem uma das maiores cargas de desnutrição infantil do mundo. De acordo com a Pesquisa de Saúde Demográfica de Bangladesh 2014, a prevalência de nanismo no país entre crianças menores de cinco anos é de 36%, entre as quais 12% sofrem de nanismo grave (LAZ <-3).1 Cerca de 15% das crianças apresentam déficit de peso (peso for-length, WLZ <-2); mais de 2 milhões de crianças sofrem de MAM, enquanto 3% ou 450.000 crianças sofrem da forma mortal de SAM. A desnutrição custa a Bangladesh cerca de US$ 1 bilhão por ano.

De acordo com as recomendações da OMS, lactentes e crianças de 6 a 59 meses com MAM precisam consumir alimentos ricos em nutrientes para atender às suas necessidades extras de ganho de peso e altura e recuperação funcional. Atualmente não há recomendações baseadas em evidências sobre a composição de alimentos suplementares usados ​​para tratar crianças com MAM. As intervenções para lidar com a desnutrição devem, portanto, incluir um forte componente de gestão da MAM. A prevenção da MAM deve ser levada em consideração na segurança alimentar e outras estratégias de desenvolvimento, pois a situação se torna crítica em populações onde a insegurança alimentar é desenfreada. É importante, portanto, desenvolver intervenções que dependam de ingredientes alimentares disponíveis localmente que, em pequenas quantidades, sejam capazes de aproveitar o poder benéfico da microbiota intestinal no crescimento de bebês e crianças.

Um dos principais fatores que limitam o impacto das intervenções nutricionais é a incapacidade das crianças desnutridas de aumentar sua ingestão para atender às crescentes demandas metabólicas. Em estudos colaborativos entre o icddr,b e o Gordon Lab da Universidade de Washington em St. Louis durante a Fase Jumpstart do Projeto Leite Materno, Microbiota e Imunidade (BMMI), aplicamos Florestas Aleatórias a conjuntos de dados de 16S rRNA (ácido ribossômico ribossômico) bacteriano gerado a partir de amostras fecais mensais obtidas de uma coorte de nascimento de crianças que vivem em uma favela urbana de Dhaka, Bangladesh. Essas crianças apresentaram crescimento consistentemente saudável (WLZ -0,32+0,98). Foram identificadas cepas bacterianas cuja representação proporcional define uma microbiota intestinal saudável à medida que se reúne durante os primeiros 2-3 anos pós-natais. Em um ensaio clínico randomizado no icddr,b de dois alimentos terapêuticos (alimentos terapêuticos importados prontos para uso [RUTF, Plumpy'Nut] versus Khichuri e Halwa preparados localmente à base de arroz/lentilha) em crianças de Bangladesh com desnutrição aguda grave (SAM ), foi observado que a imaturidade da microbiota é incompleta e apenas transitoriamente melhorada, com as crianças permanecendo acentuadamente atrofiadas e abaixo do peso durante todo o período de acompanhamento. As crianças de Bangladesh com MAM também exibiram imaturidade significativa da microbiota, embora menos grave do que as crianças com SAM. A imaturidade da microbiota serve, portanto, como um potencial biomarcador para identificar bebês em risco de desnutrição e monitorar estratégias de tratamento e prevenção. Em nosso estudo anterior aprovado pelo ERC (PR-09023), comparamos a microbiota intestinal de crianças saudáveis ​​que vivem na favela de Mirpur com crianças hospitalizadas para tratamento de desnutrição aguda grave. A microbiota foi avaliada pelo sequenciamento do RNA ribossômico 16S. Descobrimos que a microbiota intestinal de crianças com SAM fica cronologicamente atrás da microbiota de crianças saudáveis. Por exemplo, uma criança de dois anos com SAM pode ter a microbiota intestinal semelhante à de uma criança saudável de um ano. Isso é conhecido como imaturidade da microbiota intestinal. Desenvolvemos duas métricas para representar essa imaturidade intestinal - o índice relativo de maturidade da microbiota e o escore Z da microbiota para a idade; A SAM está associada a uma imaturidade relativa significativa da microbiota que é apenas parcialmente melhorada após intervenções nutricionais. .

Recentemente, desenvolvemos alimentos terapêuticos prontos para uso usando ingredientes alimentares disponíveis localmente - arroz, lentilha e grão-de-bico que são culturalmente relevantes e aceitáveis. Descobrimos, por meio de um RCT (ensaio controlado randomizado) duplo-cego, que o RUTF (Alimento Terapêutico Pronto para Uso) à base de grão-de-bico e lentilha de arroz de Bangladesh que desenvolvemos era tão eficaz quanto o RUTF comercial à base de amendoim e bem aceito por crianças com SAM. Por meio de uma combinação dos estudos de RCT e translacionais clínicos mencionados acima, realizados nos últimos 7 a 8 anos, identificamos microbiota benéfica discriminatória por idade que promove o crescimento e ingredientes alimentares disponíveis localmente que suportam a proliferação dessa microbiota benéfica. Além disso, estudos anteriores feitos em animais gnotobióticos no Centro de Ciência do Genoma da Universidade de Washington nos levaram a sugerir que uma combinação de ingredientes alimentares (grão-de-bico, farinha de soja, amendoim e banana verde) informada por estudos feitos em Dhaka valerá a pena estudar com respeito ao impacto da dieta na estimulação da proliferação da microbiota discriminatória do crescimento, bem como ao custo e à sustentabilidade.

Recentemente, concluímos com sucesso um estudo aprovado pelo IRB, 'Ensaios clínicos de pré-prova de conceito para otimizar protótipos de alimentos complementares direcionados à microbiota (MDCF) por sua capacidade de reparar a imaturidade da microbiota e estabelecer sua aceitabilidade organoléptica' (PR-16099). O principal objetivo deste estudo piloto foi demonstrar uma pré-prova de conceito de que certos alimentos complementares teriam um efeito benéfico em crianças pequenas que sofrem de MAM, estimulando a proliferação de membros específicos da microbiota intestinal que são conhecidos por seus efeitos promotores de crescimento . Nesse estudo piloto, investigamos o escore Z da microbiota para a idade (MAZ), bem como o impacto da proliferação de bons membros da microbiota intestinal em certos sistemas do corpo. Este estudo foi projetado para testar os efeitos de três protótipos de MDCF produzidos localmente (MDCF-1, MDCF-2 e MDCF-3) e um RUSF à base de lentilha de arroz produzido localmente. Os resultados do teste piloto Pre POC mostraram conclusivamente que um dos três MDCFs (ou seja, MDCF-2) foi associado com níveis aumentados de certos aminoácidos que têm um papel fundamental no desenvolvimento de ossos longos, desenvolvimento do cérebro e aumento da produção de IGF-1 (Insulin like Growth Factor-1), que são fatores críticos na biologia do crescimento infantil. Também é eficaz na estimulação do crescimento de membros promotores de crescimento da microbiota intestinal, por exemplo, Faecalibacterium prausnitzii. Com base no resultado deste ensaio piloto Pré-POC, planejamos agora fazer um ensaio clínico maior usando o MDCF-2 mais promissor no manejo de crianças pós-SAM MAM com o ponto final primário sendo o crescimento linear.

Projeto de pesquisa e métodos Faremos um ensaio clínico entre crianças de 12 a 18 meses de idade com pós-SAM MAM (WLZ <-2 a -3) ao longo de aproximadamente dois anos. O estudo será realizado na clínica Bauniabadh e RADDA MCH-FP na área de Mirpur, na cidade de Dhaka, e na Unidade de Nutrição Especial (SNU) administrada por Terre des Hommes (TdH) em Kurigram. O TdH SNU foi selecionado porque queremos agilizar a inscrição e temos um bom histórico de trabalho lá; o último teste de eficácia que conduzimos em nossos RUTFs locais também foi feito parcialmente lá. As crianças serão triadas e matriculadas por meio de pesquisa domiciliar por Assistentes de Pesquisa de Campo (FRAs) seguindo critérios de inclusão pré-especificados. Atendendo aos critérios de inclusão e mediante consentimento para participação no estudo dos pais ou responsáveis ​​legais, as crianças com a respectiva mãe/responsável serão matriculadas e alocadas aleatoriamente em um dos dois braços de acordo com números aleatórios gerados por computador. O código do tipo de dieta atribuído será guardado em envelopes opacos fechados para cada indivíduo, e somente será aberto quando o cuidador assinar o termo de consentimento. Este ensaio não se enquadrará em nenhum ensaio típico de drogas. No entanto, se considerarmos este estudo em qualquer fase, ele cairia na fase II, porque já fizemos um estudo piloto observando o impacto no escore Z da microbiota para a idade, bem como os efeitos adversos.

Em primeiro lugar, haverá a fase de estabilização, que durará de 4 a 8 dias, durante esse período cada criança será tratada de acordo com as diretrizes da OMS (Organização Mundial da Saúde) / icddr,b para o manejo de SAM. Isso inclui alimentação programada, suplementação de micronutrientes, reidratação criteriosa, tratamento com antibióticos de amplo espectro e pronto reconhecimento e manejo de complicações. Após a recuperação da fase de estabilização, a reabilitação nutricional continuará por aproximadamente 2 semanas, durante as quais será servido o protocolo dietético padrão icddr,b baseado nas dietas locais Halwa e Khichuri. Após a graduação de SAM para MAM (WLZ livre de edema <-2), as crianças serão designadas aleatoriamente para um dos dois braços (RUSF à base de lentilha de arroz e MDCF-2).

O componente de reabilitação nutricional pós randomização terá 3 fases. A primeira fase envolverá a alimentação no local da dieta duas vezes ao dia durante 1 mês nos centros de nutrição estabelecidos em Mirpur e Kurigram. A segunda fase consistirá em alimentar as crianças uma vez no centro de nutrição e uma vez em casa. Durante a terceira fase, as crianças serão alimentadas com as dietas duas vezes ao dia em casa. As crianças serão observadas por 4 semanas na fase pós-intervenção. Durante todo o período do estudo, dados antropométricos, dados de diversidade alimentar e amostras (sangue, fezes e urina) serão coletados. Coletaremos dados semanais qualitativos da ingestão dietética nas últimas 24 horas por meio de Questionários de Frequência Alimentar durante a intervenção dietética para todos os participantes do estudo.

Randomização Após as fases de estabilização e reabilitação nutricional, quando as crianças atingirem o estado MAM, elas serão designadas aleatoriamente para um dos dois braços (RUSF à base de lentilha de arroz e MDCF-2). O código do tipo de tratamento atribuído será guardado em envelopes opacos fechados até ser atribuído a uma criança inscrita.

Braço 1- RUSF à base de lentilha de arroz (fundamental: padrão de referência de tratamento para pós-SAM, MAM; com base no conhecimento de seus efeitos no crescimento infantil e na microbiota intestinal) Braço 2- Protótipo MDCF-2 com quatro ingredientes alimentares complementares sem pó leite (fundamental: conduza com evidências do ensaio clínico pré-POC recentemente concluído de promoção da microbiota promotora do crescimento e efeitos positivos no crescimento).

Recrutamento, Triagem e Consentimento As crianças com SAM serão identificadas por meio de observação direta e triagem no icddr,b Dhaka Hospital, RADDA-MCH-FP Clinic em Mirpur, o SNU de TdH em Kurigram, bem como por triagem nas comunidades em Mirpur e Sadar, Ulipur e Chilmari Upazilas do distrito de Kurigram. Aqueles que necessitam de cuidados de estabilização serão internados nas instalações mencionadas acima, onde será fornecido o padrão de atendimento para o tratamento da fase aguda da SAM. Em resumo; este cuidado de estabilização é baseado em alimentação programada, suplementação de micronutrientes, reidratação criteriosa, tratamento com antibióticos de amplo espectro e pronto reconhecimento e manejo de complicações. Posteriormente, serão tratados com o protocolo dietético padrão de atendimento para reabilitação nutricional. Após a graduação no MAM, os pais das crianças que atendem aos critérios do MAM para o ensaio pós-SAM MAM serão abordados sobre a inscrição no estudo. Um Assistente de Pesquisa de Campo (FRA) treinado explicará o estudo em detalhes, responderá a quaisquer perguntas do(s) pai(s) e convidará o(s) pai(s) a inscrever a criança no estudo.

No início do estudo, serão buscadas informações sobre as características demográficas e os FRAs registrarão o peso das crianças em balança digital com precisão de 2 g (Seca, modelo 728, Alemanha), comprimento (com infantômetro, Seca, modelo 416, Alemanha ) e circunferência do braço até o milímetro mais próximo (usando uma fita de inserção não elástica). A antropometria será feita de acordo com os procedimentos padrão. Os participantes do estudo serão solicitados a comparecer ao centro de nutrição designado para terapia nutricional para garantir a ingestão do MDCF/RUSF. Eles receberão um número de telefone para entrar em contato com a equipe clínica, e um membro da equipe pode visitar a casa de uma família para terapia nutricional diretamente observada com acordo prévio, se necessário. A alimentação programada do MDCF-2 ou RUSF por três meses após a reabilitação nutricional é ilustrada na figura.

Preparação de MDCF-2 e RUSF:

Com base em combinações compatíveis de ingredientes alimentares complementares identificados no estudo Pré-POC mencionado acima, prepararemos MDCF-2 e RUSF nas instalações de processamento de alimentos icddr,b em Mirpur e em Kurigram em quantidades suficientes para o estudo clínico. As duas dietas serão combinadas em densidade de energia e conteúdo de micronutrientes. A densidade de energia do MDCF-2 é de 125 kcal/25 g (por porção), e a distribuição calórica é de 45 a 50 por cento de gordura e 8 a 10 por cento de proteína. As duas porções de MDCF-2 ou RUSF fornecerão 250 Kcal e os micronutrientes necessários, além de fornecer o substrato para a proliferação da microbiota benéfica. As porções servem para complementar a dieta habitual recebida por essas crianças em casa. Mães/cuidadores primários serão aconselhados a manter as práticas alimentares e de amamentação atuais de seus filhos.

Experimentos de desenvolvimento de protótipos de MDCF-2 e avaliação das propriedades organolépticas foram realizados no ensaio clínico Pré-POC.

Os alimentos serão preparados todos os dias para garantir que não ocorram contaminações inesperadas e perdas de nutrientes durante o preparo. Embora os ingredientes dos alimentos crus sejam cuidadosamente adquiridos no mercado local e armazenados em quantidades razoáveis, prepararemos, dispensaremos e alimentaremos as crianças no mesmo dia em que o MDCF-2 e o RUSF forem preparados.

Após o recebimento da matéria-prima (arroz/lentilha/grão-de-bico) retiraremos os materiais estranhos/grãos ou sementes (se houver) que podem ser descartados, e então em uma panela aberta a matéria-prima será tostada. Manteremos a temperatura em 120-130°C para assar. Geralmente leva de 8 a 10 minutos para assar 100g de cada matéria-prima. A agitação contínua é essencial para garantir a torrefação de sementes/grãos individuais. Após a finalização da torrefação, guardaremos para esfriar e depois moeremos. Vamos pegar o pó e coar com uma peneira. Após coar de 4 a 5 vezes, pegaremos o pó fino para misturar com os demais ingredientes (leite em pó/óleo). Também moeremos o açúcar e o pó fino servirá para misturar. Por fim, adicionaremos o pó de pré-mistura pré-pesado. O processamento da banana verde inteira é diferente dos demais ingredientes. A banana verde com casca será colocada em uma panela funda em água fervente (100°C-110°C) e fervida por cerca de 17-20 minutos até que estejam cozidas e macias. A casca da banana verde seria retirada e a parte branca comestível seria retirada e ralada em pequenos pedaços. Em seguida, eles serão levados para uma panela e deixados esfriar. Amassaremos os pedacinhos de banana com colher/triturador manual. Os pesos de todos os outros ingredientes serão registrados. As receitas potenciais serão produzidas em pequenos lotes, misturando todos os ingredientes em um liquidificador elétrico. A preparação dos alimentos em diferentes etapas, ou seja, torrefação, redução do tamanho das partículas, mistura homogênea e fornecimento aos centros de nutrição, será monitorada pelos investigadores do icddr,b. Os alimentos serão preparados todos os dias para garantir que não ocorram contaminações inesperadas e perdas de nutrientes durante o preparo. Embora os ingredientes dos alimentos crus sejam cuidadosamente adquiridos no mercado local e armazenados em quantidades razoáveis, prepararemos, dispensaremos e alimentaremos as crianças no mesmo dia em que o MDCF e o RUSF forem preparados.

Sessões de alimentação:

As crianças e mães/responsáveis ​​serão solicitadas a comparecer aos centros de nutrição estabelecidos nos locais, preferencialmente entre 9h e 11h e 15h e 17h, todos os dias durante o primeiro mês. Será solicitado às mães que não dêem alimentos e leite materno nas 2 horas anteriores ao horário das refeições observadas. A criança receberá 25 gramas de MDCF-2 ou RUSF por porção, conforme decidido pela randomização. As mães serão solicitadas a alimentar seus filhos com as dietas pré-pesadas até que eles se recusem a comer, conforme descrito abaixo. Após uma pausa de dois minutos, a mesma dieta será oferecida uma segunda vez até que ele recuse novamente. Após uma segunda pausa de dois minutos, a dieta será oferecida uma terceira vez até ser recusada novamente. Após esta terceira recusa, o episódio de alimentação será considerado 'encerrado'. A duração da alimentação (excluindo os 'períodos de descanso' intermediários) será registrada pelo cronômetro, e a duração total da alimentação será anotada. Este episódio de alimentação durará no máximo 60 minutos. Volumes medidos de água pura também serão dados e a quantidade de água ingerida durante esse período de refeição de 60 minutos será medida. O episódio de alimentação ocorrerá sob a supervisão direta de pessoal de estudo treinado. As crianças serão consideradas como recusando mais ingestão se afastarem a cabeça da comida, chorarem, apertarem a boca ou cerrarem os dentes, ou ficarem agitadas, cuspirem fora a comida ou se recusem a engolir. A quantidade de MDCF-2/RUSF efetivamente ingerida será calculada subtraindo-se a sobra da quantidade ofertada, ou perguntando-se à mãe quando alimentado em casa. As crianças matriculadas serão monitoradas diariamente pelos assistentes de pesquisa de campo para quaisquer possíveis efeitos colaterais/eventos adversos (por exemplo, erupção cutânea, urticária devido a alergia alimentar ou qualquer alteração significativa no estado clínico) por uma semana. Se quaisquer efeitos colaterais/eventos adversos forem observados, eles serão tratados de acordo com o padrão de atendimento. Um procedimento de produção padronizado será seguido para controlar a qualidade de RUSF e MDCF-2. Cada criança receberá 25g da dieta duas vezes ao dia no centro de alimentação durante as primeiras 4 semanas. No mês seguinte, a criança receberá 25g da dieta no centro de alimentação e 25g adicionais serão fornecidos em um recipiente limpo para alimentar em casa. No terceiro mês, dois recipientes separados contendo 25g de ração serão fornecidos todos os dias para cada criança matriculada na casa do participante. Informações sobre alimentação serão coletadas das mães e a quantidade consumida será medida a partir das sobras. A comida será mantida em recipientes estéreis e à temperatura ambiente entre a sessão de alimentação. A qualidade dos alimentos será assegurada por amostras dos alimentos preparados testados para micróbios e fungos a cada 2 meses no icddr,b. As amostras selecionadas para teste incluirão alimentos armazenados por 2 e 6 horas após o cozimento. As amostras também serão testadas para aflatoxina a cada seis meses nos Laboratórios SGS, Delhi.

Neste estudo o estado nutricional será avaliado através da antropometria, comparando com os padrões de referência de crescimento da OMS. No início do estudo, serão buscadas informações sobre as características demográficas (riqueza das famílias, padrão de moradia, estrutura familiar e características dos pais etc.) modelo 728, Alemanha), comprimento (usando infantômetro, Seca, modelo 416, Alemanha) e circunferência do braço até o milímetro mais próximo (usando uma fita de inserção não elástica). A antropometria será feita de acordo com os procedimentos padrão e todas as medições serão feitas três vezes e o valor médio será registrado.

Coleta de amostras fecais Na fase aguda de estabilização, amostras fecais serão coletadas em dias alternados. Durante a fase de reabilitação, amostras fecais semanais (1-2g) serão coletadas dentro de 30 minutos após a produção (em casa e transportadas de volta para o icddr,b) usando o SOP (Procedimento Operacional Padrão) de coleta de espécime seco de nitrogênio usado no recente Ensaio clínico pré-POC (Apêndice-A). As amostras serão armazenadas a -80◦C antes de serem enviadas ao Gordon Lab no final de cada estudo para análise da maturidade da microbiota (medida antes, durante e após a interrupção do tratamento com MDCF-2 e RUSF) e avaliação baseada em PCR de carga de enteropatógenos em amostras fecais (medida antes e depois do tratamento com MDCF-2). Um total de 12 amostras fecais será coletado de cada criança em diferentes momentos durante todo o período do estudo. Considerando 62 participantes/braço do estudo, um total de 1.488 amostras fecais será coletado neste estudo. Junto com isso serão coletados 2 g de amostra fecal das mães no início da fase de estabilização.

Coleta de amostras de urina Um total de 7 amostras de urina (2 ml cada) serão coletadas de cada criança em diferentes momentos durante todo o período do estudo. Assumindo 62 participantes/braço do estudo, um total de 868 amostras de urina serão coletadas neste estudo. Junto com isso serão coletados 5 ml de amostras de urina das mães no início da fase de estabilização.

Coleta de amostras de sangue Um total de 4 amostras de sangue (2 ml cada) será coletado em diferentes momentos durante todo o período do estudo. Cada um será coletado de cada criança no início da fase de estabilização, antes da intervenção; final do primeiro mês de intervenção e logo após o término da intervenção.

Assumindo 62 participantes/braço do estudo, um total de 496 amostras de plasma serão coletadas neste estudo. Junto com isso, serão coletados 5 ml de amostras de sangue das mães no início da fase de estabilização.

O estado nutricional materno está associado ao estado nutricional infantil, conforme demonstrado pelos resultados de nosso estudo MAL-ED em oito países. Além disso, fatores pré-natais e maternos foram determinantes precoces de menor comprimento para a idade, e sua contribuição permaneceu importante ao longo dos primeiros 24 meses de vida. Como tal, registraremos a altura e o peso maternos. Para entender o estado biológico de nutrição da mãe, serão solicitadas amostras de fezes, sangue e urina da mãe. Essas amostras serão analisadas quanto à microbiota intestinal e proteômica, e os resultados serão correlacionados com os das crianças matriculadas.

Antropometria A idade da criança será verificada mediante documentação (certidão de nascimento ou carteira de vacinação, se houver) ou relatório do responsável pela data de nascimento da criança. O comprimento será medido por um infantômetro sensível a 0,1 cm. O peso corporal será medido por uma balança sensível a 2g (SECA 7281321009, Hamburgo, Alemanha). Os escores Z de comprimento por idade (LAZ), peso por comprimento (WLZ) e peso por idade (WAZ) serão calculados seguindo os padrões de crescimento da OMS do Multicentre Growth Reference Study (MGRS). O edema será examinado pressionando a parte superior de ambos os pés por 3 segundos. A circunferência do braço médio (MUAC) será medida usando fita TALC MUAC (Reino Unido). A padronização regular dos equipamentos de medição será feita usando padrões diários por assistente de pesquisa de campo treinado.

Análises de plasma e amostras fecais As amostras de plasma coletadas neste estudo serão enviadas ao laboratório do Dr. Jeffrey Gordon no Centro de Ciências Genômicas e Biologia de Sistemas da Universidade de Washington em St. Louis. Métodos avançados baseados em espectroscopia de massa e imunoensaio serão usados ​​para obter novos conhecimentos sobre o papel da imaturidade da microbiota intestinal e os efeitos da tentativa de reparo agudo dessa imaturidade com alimentos complementares direcionados à microbiota de chumbo (MDCF-2) em biomarcadores e mediadores de crescimento saudável. As comparações serão feitas com o grupo de controle (ou seja, aqueles que consomem o padrão RUSF de referência). Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa Alvo de Ultra Desempenho (UPLC-MS) e Espectrometria de Massa-Cromatografia Gasosa (GC-MS) serão usadas para perfilar analitos de interesse específico em amostras de plasma e/ou fezes, incluindo ácidos biliares e ácidos graxos de cadeia curta (SCFAs). ); marcadores da função mitocondrial (por exemplo, β-hidroxibutirato, acilcarnitinas/acilCoAs, intermediários do ciclo TCA); aminoácidos no soro mais amostras fecais [aminoácidos de cadeia ramificada, triptofano e metabólitos de triptofano relacionados ao crescimento e estado inflamatório, incluindo aqueles produzidos pelo metabolismo bacteriano do triptofano (por exemplo, derivados do ácido indol acético)]. Além disso, os principais mediadores/biomarcadores do crescimento linear (por exemplo, hormônio do crescimento e IGF-1), utilização de energia (insulina, leptina) e biologia óssea [IL-6 (interleucina-6), osteoprotegerina, o peptídeo C-terminal do colágeno tipo I (CTX, um marcador de atividade osteoclástica/reabsorção óssea) e o propeptídeo amino-terminal do procolágeno tipo 1 (P1NP, um marcador de atividade osteoblástica/formação óssea)], e inflamação sistêmica (PCR, AGP) serão quantificados usando ensaios ELISA/Luminex estabelecidos. As proteínas no sangue serão identificadas usando a varredura SOMAlogic que permite a identificação de mais de 1300 proteínas diferentes. O estudo proteômico feito em amostras de plasma de crianças com SAM em nosso estudo Pré-POC anterior feito em Dhaka já demonstrou várias associações significativas e clinicamente relevantes entre certas proteínas e fenótipos clínicos usando a varredura SOMAlogic.

As informações coletadas serão usadas para selecionar amostras fecais humanas para transplante em animais livres de germes; esses animais, que serão alimentados com as dietas de seus doadores de microbiota humana, serão usados ​​para caracterizar ainda mais os mecanismos que ligam os protótipos do MDCF-2, a microbiota intestinal e a fisiologia/metabolismo do hospedeiro. Além disso, esses biomarcadores plasmáticos e fecais serão usados ​​para determinar que o MDCF-2 promove o reparo da imaturidade da microbiota e melhora o estado biológico em crianças.

Cálculo do tamanho da amostra No ensaio pré-POC de diferentes MDCFs, o escore Z de peso por comprimento da linha de base de crianças que receberam MDCF2 (Microbiota Directed Complementary Food 2) foi -2,2 e após um mês de suplementação foi -1,7. Se considerarmos o WLZ -2 na linha de base e -1,7 na linha final, SD agrupado (desvio padrão) como 0,53, então o tamanho da amostra é 49 em cada braço com poder de 80% e nível de significância de 5%. Com 20% de atrito, 62 crianças deverão ser matriculadas em cada braço. Portanto, para este ensaio, 62 crianças receberão MDCF-2 e 62 crianças arroz-lentilha RUSF.

Análise de dados:

Os dois grupos de crianças com Post SAM-MAM serão comparados na linha de base e em momentos diferentes, conforme mostrado na ilustração do desenho do ensaio. As variáveis ​​de resultado clínico para comparação incluirão taxa de ganho de peso, índices antropométricos e morbidade. Todos os analitos mencionados na seção 'Análise de amostras de plasma e fezes' serão comparados entre os grupos MDCF-2 e RUSF.

Garantia ética para a proteção dos direitos humanos O estudo foi iniciado após a obtenção da aprovação do IRB (Conselho de Revisão Institucional) pelo Comitê de Revisão de Pesquisa e Comitê de Revisão Ética do icddr,b. Antes da inscrição no estudo, o consentimento informado por escrito está sendo obtido do responsável legal dos participantes do estudo. As identificações pessoais obtidas durante a inscrição e outros procedimentos do estudo estão sendo mantidas trancadas.

Os riscos/eventos adversos esperados para este protocolo são aqueles relacionados à coleta de amostras de sangue, coleta de amostras fecais e alimentação de alimentos complementares direcionados à microbiota. Nenhum deles se qualifica como um evento adverso grave (SAE). Os eventos adversos esperados (EAEs) relacionados à coleta de sangue são os seguintes:

• desconforto
• dor
• introdução de infecção
• sangramento

• desmaio ou hematomas

  • Precauções serão tomadas para evitar a introdução de infecção, desinfetando o local da punção venosa e usando equipamento estéril
  • O risco de sangramento e hematomas será minimizado pela aplicação imediata de pressão após a punção venosa
  • O participante (criança) ficará sentado ou em decúbito dorsal durante as coletas de sangue para evitar lesões por desmaio

Todos os possíveis eventos adversos serão tratados adequadamente. Estes incluirão:

• Vômito
• Diarréia
• Erupção cutânea
• Urticária por alergia alimentar
• Distensão abdominal
• Dor abdominal Avaliação de eventos adversos Ambos os eventos adversos graves e não graves serão avaliados quanto à gravidade; relação com a participação no estudo; ações tomadas; e resultados. Todos os SAEs devem ser relatados ao ERC (Comitê de Revisão Ética) do icddr,b dentro de 24 horas após o conhecimento do local do evento, que por sua vez será distribuído ao patrocinador. Isso será feito por comunicação direta por telefone, fax ou e-mail.

icddr,b As diretrizes recomendadas pelo IRB devem ser seguidas para classificar os eventos adversos, se ocorrerem.

Gravidade:

1. Leve
2. Moderado
3. Forte

Relação com a participação no estudo:

1. Definitivamente relacionado: associação temporal clara, nenhuma outra causa possível
2. Possivelmente relacionado: Associação temporal menos clara, outras causas possíveis
3. Não relacionado: independente do estudo, existe evidência de que o evento está definitivamente relacionado a outra etiologia

Ações:

Nenhum Terapia corretiva (mais de uma dose de medicamento necessária) Descontinuação permanente da participação no estudo Hospitalização Outro

Resultados:

Arranjos colaborativos desconhecidos contínuos resolvidos Este projeto é um esforço colaborativo entre os pesquisadores da Escola de Medicina da Universidade de Washington e do Centro Internacional de Pesquisa de Doenças Diarreicas, Bangladesh (icddr,b). Os trabalhos clínicos e as atividades de campo serão realizados em Dhaka e Kurigram, Bangladesh, sob a supervisão direta do pesquisador principal, enquanto as análises laboratoriais serão realizadas no Gordon Lab da Universidade de Washington em St. Louis. Todas as unidades de pesquisa e os investigadores colaboradores têm um longo histórico de colaborações internacionais. Todos os investigadores se comunicaram durante o desenvolvimento deste projeto e estão comprometidos com sua implementação bem-sucedida.

Instalações Disponíveis O icddr,b possui um Laboratório de Processamento de Alimentos bem equipado que facilitará experimentos com receitas de dieta. Temos estudos em andamento na área de Baoniabad em Mirpur. Vários escritórios de projetos estão localizados lá. Mais importante, temos um excelente relacionamento com a comunidade. A Terre des Hommes que administra o SNU em Kurigram onde uma parte do julgamento será realizada. No passado ajudamos no desenvolvimento do SNU e realizamos estudos lá. O SNU tem uma grande reputação na comunidade.

Centro de Ciências do Genoma, Universidade de Washington em St. Louis:

As amostras de fezes serão aliquotadas em icddr,b. Amostras de fezes serão enviadas para o laboratório do Prof Jeffery Gordon em St. Louis para o sequenciamento do gene de RNA ribossômico 16S de alto rendimento. A presença/abundância de uma ampla gama de enteropatógenos em amostras de fezes antes e depois do tratamento com MDCF-2 será determinada usando um ensaio baseado em PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). Amostras de fezes também podem ser usadas para cultivar cepas bacterianas constituintes para uso em estudos futuros em camundongos gnotobióticos no Gordon Lab. É pertinente mencionar aqui que os ensaios e equipamentos para realizá-los estão disponíveis atualmente apenas em alguns laboratórios do mundo, incluindo o de St. Louis. O Centro abriga uma equipe interdisciplinar, multidepartamental e multigeracional de investigadores de várias escolas que se concentram em genômica comparativa, genômica estatística e biologia de sistemas. desejam trabalhar na interface das ciências biológicas, físicas, computacionais e de engenharia.