Efeitos do genótipo da apolipoproteína E (APOE) nos triglicerídeos e no fluxo sanguíneo no cérebro humano

Visão geral: O objetivo do estudo é inscrever 90 adultos mais velhos, metade dos quais serão portadores de E4, para avaliar se o status de E4 afeta a mudança no fluxo sanguíneo cerebral global (∆CBF) em resposta a uma bebida com alto teor de gordura. A visita de triagem inclui consentimento informado, coleta de sangue basal, teste oral de tolerância a triglicerídeos (OTTT) e absorciometria de raio-x de dupla energia (DEXA). A visita do estudo envolve a avaliação do fluxo sanguíneo cerebral usando ressonância magnética de rotação arterial (ASL) - no início e 2 horas após a ingestão de creme de leite. A visita de estudo também incluirá 6 coletas de sangue e uma bateria cognitiva de 30 minutos.

Procedimentos da visita de triagem (no campus da Seattle South Lake Union): Antes da visita de triagem, os participantes receberão uma cópia do formulário de consentimento pelo correio, bem como um questionário de histórico médico para preencher. Os participantes serão aconselhados a jejuar na noite anterior à visita de triagem (mínimo de 8 horas necessárias). Após um processo de consentimento informado, a equipe do estudo verificará os sinais vitais, incluindo circunferência da cintura, altura e peso para cálculo do índice de massa corporal (IMC). Um IV será colocado pela enfermeira do estudo e sangue enviado para hemograma completo, chem20 (incluindo avaliação da função hepática e renal), hemoglobina glicada (hemoglobina A1C), painel lipídico e uma amostra de sangue para genotipagem APOE (Northwest Lipids usando polimerase chain metodologia de reação (PCR)). Amostras de sangue, exceto APOE, serão enviadas para o laboratório certificado pela Emenda de Melhoria de Laboratório Clínico (CLIA) da Universidade de Washington (UW), e os participantes receberão uma cópia dos resultados por correio. Após a coleta de sangue, os participantes serão submetidos a um teste oral de tolerância à glicose (OGTT): 6 pontos de tempo (0, 15, 30, 45, 60,120 min) que incluirão uma coleta de sangue para plasma para medir insulina e peptídeo C (em lotes por lipídios do Noroeste (NW)). Nos tempos 0 e 120 minutos, o pessoal do estudo também avaliará os sinais vitais e a glicose de um ponto de atendimento usando um glicosímetro. O OGTT será a bebida padrão de 75 gramas de glicose do abastecimento central. Após a conclusão do OGTT de 2 horas, os pacientes serão submetidos a uma varredura DEXA. Observe que o DEXA pode ser realizado antes do OGTT, se necessário para o fluxo do estudo. O estacionamento será fornecido e os participantes serão pagos com um cartão-presente.

Dia da amostra da visita de triagem:

8:00: Check-in na clínica 8-8:30: consentimento informado em quarto privado, revisão do histórico médico 8:30-9: Inserir IV, preencher depressão, tela de ansiedade, colher sangue de linha de base 9 -11:00: OGTT ( Durante as lacunas no OGTT, faça a Avaliação Cognitiva de Montreal (MoCA)) 11-11h25: DEXA 11h25-11h30: Remover IV, distribuir cartão-presente e validação de estacionamento Tempo: 3,5 horas, sangue total coletado 40 mls

Procedimentos de visita de estudo (no campus principal da Universidade de Washington): Os participantes chegarão à UW Translational Research Unit (TRU) após um jejum noturno (mínimo de 8 horas necessárias). A enfermeira do estudo colocará um IV e verificará os sinais vitais, incluindo pressão arterial, frequência cardíaca, temperatura e peso. Em seguida, o participante será acompanhado ao scanner de ressonância magnética e submetido ao protocolo de imagiologia em jejum. O participante retornará ao TRU e iniciará o teste oral de tolerância aos triglicerídeos (OTTT). O sangue do tempo 0 é coletado e o tempo documentado. Em seguida, o participante beberá o laticínio - 100 mL de creme de leite (pouco menos de meio copo) que contém 370 calorias, 40,4 gramas de gordura total, 23,6 gramas de gordura saturada. O participante será encorajado a beber o produto durante 5 minutos de acordo com os protocolos OTTT publicados. Coletas de sangue serão coletadas para medição de glicose, insulina, lipídios e hormônios do apetite (30, 120, 180, 240 min). Uma ressonância magnética pós-lipídica será feita no ponto de tempo de 2 horas, e a avaliação cognitiva da caixa de ferramentas do NIH será feita no ponto de tempo de 3 horas. A bateria do NIH leva aproximadamente 30 minutos para ser administrada e será feita em um tablet portátil.

Exemplo de dia de visita de estudo:

8:00: Check-in no UW TRU, pergunte sobre novos medicamentos, coloque IV 8:15: Acompanhe a área de ressonância magnética, obtenha pré-RM 8:45: De volta ao TRU: coleta de sangue T0 8:45-8:50: Beba lipídios 9:20: T30 min coleta de sangue 9:50: T60 min coleta de sangue 10:50: T120 min (2 horas) coleta de sangue

**Retorne ao scanner de ressonância magnética para ressonância magnética de 2 horas** (será ~2 horas e 10 minutos após a bebida) 11:50: T180 min (3 horas) coleta de sangue **Faça o teste de caixa de ferramentas do NIH agora - leva cerca de 30 minutos* * 12:50: T240 min (4 horas) coleta de sangue 12:50-13:00: Remover IV, recebimento do vale-presente, check-out do participante. Tempo: 5 horas, total de sangue coletado: 80 mls (13 por coleta de sangue x 6 pontos de tempo)

Protocolo de ressonância magnética: o investigador usará rotulagem de rotação arterial pseudocontínua para medir o fluxo sanguíneo cerebral (CBF) em ml/100g/min como um marcador de perfusão para melhorar a qualidade do sinal. Nesta abordagem, a água do sangue arterial marcada magneticamente serve como contraste endógeno. As imagens de ressonância magnética serão armazenadas no disco rígido externo com criptografia e serão carregadas no One Drive ou em outro sistema compatível com HIPAA para posterior processamento e análise.

Experimento: De acordo com as recomendações de consenso, o investigador usará uma sequência (5,5 minutos) com longa duração de marcação = 1,8 s, longo atraso pós-rotulagem = 2 s, com deslocamento de marcação = 25-30 mm, fatias = 20, resolução espacial = 3,5×3,5×5 mm3, campo de visão = 240×240×100 mm3, fator SENSE = 2, tempo de repetição/tempo de eco (TR/TE)= 5000/18 ms. Pulsos duplos de supressão de fundo adiabáticos serão aplicados para minimizar a contaminação dos tecidos da substância cinzenta e branca no atraso de inversão (TI) = 2,05 e 3,25 s. Finalmente, o investigador adquirirá uma varredura de magnetização de equilíbrio (M0, 1 minuto), idêntica à varredura acima, mas com TR = 10.000 ms e sem marcação ou supressão de fundo.

Análise: Primeiro, a correção de movimento será aplicada às imagens de rotulagem do spin arterial usando correção de movimento (FSL-MCFLIRT), e estas serão registradas na imagem M0. Em seguida, o investigador realizará uma subtração de pares entre as imagens de controle e nula e aplicará um modelo de dois compartimentos para quantificar o CBF. O mapa CBF resultante será co-registrado para a varredura T1 seguida por uma transformação para o espaço do Montreal Neurological Institute (MNI). ser identificados usando o atlas cortical e subcortical padrão de Harvard-Oxford. Os valores de CBF serão comparados nessas regiões entre os grupos. A abordagem da região de interesse pode diluir efeitos menores que o tamanho da região de interesse. Portanto, o investigador também realizará testes de permutações em FSL para avaliar as diferenças de CBF voxel entre os grupos. A fim de garantir que os resultados em termos de voxels não sejam mero acaso, o investigador imporá uma correção de erro estritamente familiar para comparações múltiplas.

Dados coletados para este estudo:

Dados coletados no telefone e no formulário de histórico médico (consentimento verbal dado, antes do consentimento informado):

Histórico médico, incluindo se os participantes conhecem seu genótipo APOE Revisão direcionada dos sistemas Idade da menopausa (para mulheres) Medicamentos Uso de drogas, tabaco e álcool Alergias a medicamentos Alergias/intolerâncias alimentares Mão manual Histórico de trabalho e educação do participante Nível educacional da mãe (se conhecido ) Nível de escolaridade do pai (se conhecido) Lista de verificação de ressonância magnética: cirurgias, metal no corpo

Dados coletados na visita de triagem:

Como o paciente se identifica quanto à raça/etnia Vitais: Altura, peso, medida da circunferência da cintura Questionário de Saúde Física-9 (PHQ9, uma triagem de depressão) Avaliação do Transtorno de Ansiedade Generalizada-7 (GAD-7, uma triagem de ansiedade) Avaliação cognitiva: MoCA versão 8.2 Versão em inglês Exames de sangue de triagem: química, função hepática, perfil lipídico, hemoglobina A1C, hemograma completo (CBC), genótipo APOE (swab de bochecha e exame de sangue) Jejum e 2 horas de glicose no local de atendimento (usando um glicosímetro) Jejum e 2 horas de coração taxa, pressão arterial Seis coletas de sangue OGTT: tubo superior de 4 ml de lavanda para medir glicose, insulina (enviada ao laboratório em lotes) varredura DEXA para medidas padrão de composição corporal (ou seja, massa gorda, massa isenta de gordura)

Dados coletados na visita do estudo:

Vitais: Frequência cardíaca (FC), PA, Frequência respiratória (FR), temperatura em todos os pontos de tempo Seis coletas de sangue: coleta de soro e plasma para glicose, insulina, lipídios e hormônios do apetite Caixa de ferramentas do NIH dados cognitivos MRI Dados ASL: ASL total e regional imagens (não inclui uma leitura de ressonância magnética clínica)