Estudo do Metabolismo no Nicho Linfático da LLC

A leucemia linfoide crônica (LLC) é a leucemia adulta mais comum, caracterizada por um acúmulo monoclonal maligno de células B tumorais e quiescentes no sangue periférico. Em estágios avançados da doença (estágio Binet C), essa população invade a medula óssea (BM) e prolifera nos órgãos linfóides, resultando em adenopatia generalizada. A transformação de Richter é uma complicação grave e agressiva da CLL (transformação da doença em um linfoma agressivo) detectada com base em TEP/CT (tomografia por emissão de pósitrons/tomografia computadorizada) que mostra o consumo altamente derivado de glicose pelas células cancerígenas. Dados clínicos de pacientes com LLC com agudização da doença mostraram linfadenopatia hipermetabólica com alto valor de captação padronizado (SUV), enquanto há captação de traçador de baixo grau na BM. Supusemos que o microambiente tumoral do nicho linfático promove a proliferação e a atividade glicolítica das células LLC que se tornam particularmente resistentes ao tratamento. O desenvolvimento de um modelo tumoral ex-vivo que reproduza o microambiente do nicho linfonodal parece essencial para identificar e validar novos alvos terapêuticos, pois apesar do arsenal terapêutico disponível alguns pacientes ainda apresentam recidiva ou são refratários ao tratamento. Os nossos objectivos são i / Caracterizar este nicho de resistência através do desenvolvimento de um modelo tumoral ex-vivo e ii / Avaliar in-vitro a eficácia da associação dos tratamentos actuais (RFC, Ibrutinib ou Venetoclax) com terapias anti-metabólicas (inibidores de glicólise) Nosso laboratório está desenvolvendo modelos ex-vivo do nicho linfático na LLC com base em co-culturas de células leucêmicas de pacientes estimulados com CpG ODN e IL2 com fibroblastos linfáticos humanos primários (HLF) (EC 12PP15). Esta co-cultura nunca foi descrita na literatura e permite estudar o nicho linfático de pacientes com LLC. A exploração do linfonodo (LN) na LLC requer acesso invasivo e não traz nenhuma informação adicional no diagnóstico inicial. Em seguida, validamos nosso modelo de cocultura usando abordagens complementares: aumento da viabilidade, proliferação e resistência ao Ibrutinibe, associado ao aumento da produção de proteínas antiapoptóticas como MCL1 e BCL2 após 48 horas de cocultura. Em segundo lugar, estudamos o metabolismo neste nicho de resistência. Encontramos um aumento da produção de lactato e um consumo agudo de glicose, associados a uma forte ativação metabólica detectada pelo SEAHORSE e pela produção de enzimas glicólise como a hexoquinase 2. Nosso estudo constitui um projeto original porque caracterizou o metabolismo energético da LLC nicho linfático desenvolvendo um modelo ex-vivo original e aprimorando nossa compreensão da contribuição do microambiente específico na dissociação da atividade metabólica usando SUV max em BM e nicho linfático. Terapias antimetabólicas são eficientes em co-cultura de células LLC e podem ser uma alternativa para pacientes refratários ou recidivantes sob tratamento atual.