Microbiota intestinal e dor visceral na síndrome de pseudo-obstrução intestinal crônica (CIPO) (METADOLOMIC)

O objetivo do estudo é identificar metabólitos produzidos diferencialmente pela microbiota intestinal de pacientes com CIPO com dor visceral para determinar seu efeito no hospedeiro com foco na homeostase intestinal.

Para isso, serão coletadas 3 amostras de efluente digestivo em pacientes pediátricos com CIPO.

Então, o estudo irá:

1. Caracterizar a microbiota intestinal dos efluentes digestivos de pacientes pediátricos com CIPO dolorosos e não dolorosos.
2. Quantifique lipídios bacterianos em efluentes digestivos de pacientes pediátricos com CIPO dolorosos e não dolorosos. Nos efluentes ileais realizaremos quantificação absoluta do lipidoma bacteriano. Quantificaremos ácidos graxos de cadeia curta por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa e ácidos graxos beta-hidroxilados de cadeia longa, lipopeptídeos GABA, lipoaminas e ácidos biliares primários e secundários por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa em tandem.
3. Testar a função destes lipídios bacterianos na atividade neuronal sensorial em uma cultura primária de gânglios da raiz dorsal do rato. Os efeitos dos lipídios bacterianos nos neurônios sensoriais serão avaliados em cultura primária de gânglios da raiz dorsal de camundongos. Quantificaremos a mobilização de cálcio em neurônios sensoriais tratados com os compostos lipídicos identificados acima. Numa segunda etapa, para determinar seu potencial inibitório, os mesmos experimentos serão realizados em neurônios ativados por um agonista do receptor dos canais de cálcio, TRPV1 (capsaicina) ou por uma mistura de agonistas (histamina, serotonina e bradicinina) da proteína G- receptores acoplados envolvidos na hipersensibilidade visceral