ФЗТ при болезни Помпе: выяснение молекулярных структур, способствующих поглощению ферментов и иммунореактивности

Заместительная энзимотерапия (ФЗТ) рекомбинантным человеческим ГАА (rhGAA = алглюкозидаза альфа) доступна с 2006 г. и показала свою эффективность при IOPD и LOPD; однако реакция на лечение изменчива и несовершенна. Это привело к разработке rhGAA следующего поколения с повышенным гликозилированием и улучшенным поглощением мышечными клетками (авальглюкозидаза альфа). Эффективность ФЗТ в значительной степени зависит от статуса гликозилирования фермента, определяющего поглощение мышечными клетками через маннозо-6-фосфатный (М6Ф) рецептор, и от образования антител, направленных против рекомбинантного фермента. Влияние иммунологических факторов на эффективность подчеркивается появлением высоких устойчивых титров антител (HSAT) у пациентов с IOPD, не продуцирующих GAA вообще (CRIM-отрицательный), что приводит к худшему исходу, аналогичному исходу у нелеченых пациентов, если не применять иммуномодулирующие препараты. дают лекарство. Такой HSAT также может возникать у пациентов с IOPD, синтезирующих нефункциональную GAA (CRIM-положительные), и у некоторых пациентов с болезнью Помпе с поздним началом (LOPD).

В первой части этого исследования исследователи стремятся охарактеризовать молекулярную структуру ГАА дикого типа и, в частности, мутантных вариантов ГАА с HSAT и без него, чтобы узнать, как мутация ухудшает поглощение ГАА клеткой через рецептор M6P. . Для этого будут изучены 5 здоровых субъектов и 45 пациентов с болезнью Помпе (15 IOPD и 30 LOPD). Исследователи будут идентифицировать эпитопы антител в сыворотке пациентов с антителами к rhGAA, а также определять и количественно сравнивать их аффинность связывания, используя комбинацию протеолитической аффинно-масс-спектрометрии и биосенсорного анализа поверхностного плазмонного резонанса. Исследователи считают, что определенные мутации могут по-разному влиять на статус эпитопа. В связи с этим исследователи также предполагают, что гликозилирование и остатки M6P могут модифицировать эпитопы в их непосредственной близости. Эти результаты помогут понять, где расположены эпитопы, связывающие антитело.

Во второй части исследования исследователи стремятся узнать, с какими эпитопами связываются антитела, а с какими нет. Для этого будут синтезированы и химически модифицированы эпитопные пептиды, чтобы эффективно блокировать антитела, направленные против терапевтического фермента. Ожидается, что применение высокоаффинных эпитопных пептидов GAA, способных связывать нейтрализующие антитела, потенциально повысит эффективность и безопасность ФЗТ, тем самым обеспечивая новый целенаправленный и персонализированный подход к иммунотолерантности.