肝硬化患者 CD133+ 干细胞的肝内再输注 (Cirrhosis133)

标题：终末期肝病患者肝内回输高度纯化的 CD133+ 干细胞的 I 期研究。

首席研究员：Roberto M. Lemoli，医学博士 共同研究员：Pietro Andreone，医学博士，Francesca Bonifazi，医学博士；露西亚卡塔尼，BS；医学博士 Antonia D'Errico； Michelangelo Fiorentino，医学博士；医学博士 Valeria Giudice； Annagiulia Gramenzi，医学博士；伊丽莎白·洛吉，BS； Stefania Lorenzini，医学博士；医学博士 Francesco Losinno；玛丽亚·罗莎·莫塔，BS； Simonetta Rizzi，理学士；医学博士克里斯蒂娜·罗西 (Cristina Rossi)。

研究中心：Azienda Ospedaliero-Universitaria di Bologna, Policlinico S.Orsola-Malpighi, Bologna - Italia, Unità Operativa di Ematologia 与以下机构合作：

Unità Operativa di Semeiotica Unità Operativa di Anatomia e Istologia Patologica Unità Operativa di Immunematologia e Trafusionale Unità Operativa di Radiologia

临床阶段：第一阶段

目标（S）：主要：

评估将越来越多的自体高度纯化的 CD133+ 干细胞 (SC) 肝内回输给终末期肝病患者的安全性。 在使用粒细胞集落刺激因子 (G-CSF) 和白细胞去除术动员后，将预先收集 CD133+ SC 并冷冻保存。 安全性将评估为不良事件的发生率（根据 WHO 分级）和 SC 回输后临床上显着的异常实验室值。

中学：

评估通过白细胞分离术从终末期肝病患者的外周血 (PB) 中收集的自体 CD133+ 细胞的免疫磁性选择的可行性，这些细胞先前已用 G-CSF 动员。

评估高纯度CD133+细胞肝内回输对患者残余肝功能的影响。 特别是，将监测以下值：蛋白质合成（白蛋白）、凝血因子合成（凝血酶原时间、INR、纤维蛋白原、抗凝血酶 III、促凝血酶原激酶时间）、胆红素血症、增殖活性、生物合成能力（胆固醇、假胆碱酯酶） .

评估在 G-CSF 给药期间和将高度纯化的 CD133+ SCs 肝内回输给终末期肝病患者后，治疗对选定细胞因子产生的影响。

学习规划：

12 名患者将在 18-24 个月内纳入剂量探索阶段。 研究设计如下：首先，G-CSF（Lenograstim，Aventis Pharma 或 Filgrastim，Amgen）为 7.5µg/Kg/b.i.d。从第 1 天开始皮下 (sc) 给药，直至外周血干细胞 (PBSC) 采集完成。 仅当 CD133+ 细胞浓度 > 8/uL 时，骨髓 (BM) 来源的 PBSC 的收获才会在第 + 4 天开始，并且将继续进行，直到收集到目标细胞剂量：0.5 x 106 CD133+ 细胞/Kg前 2 组患者；队列 3 为 1 x 106 CD133+ 细胞/Kg，队列 4 为 2 x 106 CD133+ 细胞/Kg（定义见下文）。 从动员的标准体积白细胞分离术中获得的 PB 单核细胞将与 Macs 胶体超顺磁性 CD133 微珠（Miltenyi Biotec，Bergisch Gladbach，德国）一起孵育，CliniMacs 设备将用于在良好生产规范（GMP）条件下对 CD133+ 细胞进行阳性选择（见附件）。 液氮冷冻保存按标准程序进行（见附件）。

在 SC 动员和收集后至少 4 周，快速解冻后获得高达 40 mL 的高度纯化的自体 CD133+ 细胞单细胞悬浮液，将通过经股动脉或经臂动脉造影术通过肝动脉注入。 输注时间应低于 15ml/min，以避免血栓形成。 整个过程将在麻醉控制下进行。 肝内给药途径被认为是必要的，以避免在肝硬化患者常规静脉内再输注后潜在的大量脾脏捕获 CD133+ 细胞。 手术后 24 小时内，将对腹腔干进行多普勒超声检查，以排除肠系膜区的血栓事件。

根据修正的斐波那契递增法则，高度纯化的 G-CSF 动员的 CD133+ 细胞将从 5x104/Kg 患者体重开始给予患者，每 3 名患者增加一次。 最大注入细胞剂量为 1x106/kg（见下文）。 Lenograstim 或 Filgrastim 以 5µg/Kg/天的剂量皮下给药，持续 3 天（第 0 天至第 +2 天）再输注 SC 后，用于它们的扩增并在体内诱导再输注细胞的选择性增殖优势。

患者数量和时间范围：在剂量探索阶段，将在 18-24 个月内招募 12 名患者。

诊断和纳入标准：签署知情同意书。 年龄 >18。 Karnofsky 评分 > 70% 或 WHO <1。 足够的肾功能（血清肌酐 < 2 mg/dl）和肺功能（Sat O2 > 96%）。 根据终末期肝病梅奥模型 (MELD) 得分在 17 到 25 之间定义的晚期终末期肝病的诊断。

具有以下肝病病因的患者将被纳入研究：慢性病毒性乙型肝炎、慢性病毒性丙型肝炎、慢性病毒性丁型肝炎、酒精性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、威尔逊氏病、遗传性血色素沉着症或铁过载肝硬化，非酒精性脂肪性肝炎引起的肝硬化。 患有酒精性肝硬化的患者应已停止饮酒以参加该研究。

原位肝移植 (OLT) 的资格不是进入临床研究的禁忌症。 等待 OLT 移植的患者将不会退出，并会在合适的供体可用时尽快进行移植。 他们的 MELD 评分将保持之前记录的 SCs 输注，以防在实验程序后有所改善。

肝硬化相关症状的存在，如腹水、外周水肿、复发性胃肠道出血、复发性脑病，并不代表参加该研究的主要禁忌症。 当临床稳定时，患者可能被认为符合条件。

排除标准：HIV 阳性。 怀孕或哺乳的女性。 当前不受控制的感染。 并发器官损害。 肝癌的诊断。 完全性门脉血栓形成。 凝血功能严重受损（PT < 30%，INR > 2.5，血小板 < 40x109/L）禁忌动脉造影。 Ⅳ级脾肿大。

伴有肝静脉血栓形成和不明原因的肝硬化的布加综合征将不包括在研究中。