Reinfusione intraepatica di cellule staminali CD133+ in pazienti cirrotici (Cirrhosis133)

TITOLO: Studio di fase I sulla reinfusione intraepatica di cellule staminali CD133+ altamente purificate in pazienti con malattia epatica allo stadio terminale.

PRINCIPAL INVESTIGATOR: Roberto M. Lemoli, MD CO-INVESTIGATORI: Pietro Andreone, MD, Francesca Bonifazi, MD; Lucia Catani, BS; Dott.ssa Antonia D'Errico; Michelangelo Fiorentino, MD; Valeria Giudice, MD; Annagiulia Gramenzi, dott.ssa; Elisabetta Loggi, BS; Stefania Lorenzini, MD; Francesco Losinno, MD; Maria Rosa Motta, BS; Simonetta Rizzi, BS; Dott.ssa Cristina Rossi.

CENTRO STUDI: Azienda Ospedaliero-Universitaria di Bologna, Policlinico S.Orsola-Malpighi, Bologna - Italia, Unità Operativa di Ematologia in collaborazione con:

Unità Operativa di Semeiotica Medica Unità Operativa di Anatomia e Istologia Patologica Unità Operativa di Immunoematologia e Trasfusionale Unità Operativa di Radiologia

FASE CLINICA: Fase I

OBIETTIVO(I): Primario:

Valutare la sicurezza della reinfusione intraepatica di un numero crescente di cellule staminali (SC) CD133+ autologhe altamente purificate in pazienti con malattia epatica allo stadio terminale. Le SC CD133+ saranno precedentemente raccolte e crioconservate dopo la mobilizzazione con il fattore stimolante le colonie di granulociti (G-CSF) e la leucaferesi. La sicurezza sarà valutata come l'incidenza di eventi avversi (classificati secondo l'OMS) e il valore di laboratorio anormale clinicamente significativo dopo la reinfusione di SC.

Secondario:

Valutare la fattibilità della selezione immunomagnetica di cellule CD133+ autologhe raccolte con leucaferesi dal sangue periferico (PB) di pazienti con malattia epatica allo stadio terminale, precedentemente mobilizzate con G-CSF.

Valutare gli effetti della reinfusione intraepatica di cellule CD133+ altamente purificate sulla funzione epatica residua dei pazienti. In particolare verranno monitorati i seguenti valori: sintesi delle proteine ​​(albumina), sintesi dei fattori della coagulazione (tempo di protrombina, INR, fibrinogeno, antitrombina III, tempo di tromboplastina), bilirubinemia, attività proliferativa, capacità biosintetica (colesterolo, pseudocolinesterasi) .

Valutare gli effetti del trattamento sulla produzione di citochine selezionate durante la somministrazione di G-CSF e dopo la reinfusione intraepatica di CD133+ altamente purificati a pazienti con malattia epatica allo stadio terminale.

PROGETTAZIONE DI STUDIO:

Dodici pazienti saranno arruolati entro 18-24 mesi nella fase di determinazione della dose. Lo studio è stato disegnato come segue: inizialmente, G-CSF (Lenograstim, Aventis Pharma o Filgrastim, Amgen) a 7,5 µg/Kg/b.i.d. sarà somministrato per via sottocutanea (sc) dal giorno 1 fino al completamento della raccolta delle cellule staminali del sangue periferico (PBSC). La raccolta delle PBSC derivate dal midollo osseo (BM) inizierà il giorno + 4 solo se la concentrazione di cellule CD133+ è > 8/uL e continuerà fino alla raccolta della dose di cellule bersaglio: 0,5 x 106 cellule CD133+/Kg per il prime 2 coorti di pazienti; 1 x 106 cellule CD133+/Kg per la coorte 3 e 2 x 106 cellule CD133+/Kg per la coorte 4 (vedere sotto per le definizioni). Le cellule mononucleate PB ottenute dalla leucaferesi di volume standard mobilizzato saranno incubate con microsfere CD133 superparamagnetiche colloidali Macs (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germania) e il dispositivo CliniMacs sarà utilizzato per la selezione positiva delle cellule CD133+ in buone condizioni di fabbricazione (GMP) ( vedi gli allegati). La crioconservazione e la conservazione in azoto liquido saranno eseguite secondo le procedure standard (vedi allegati).

Almeno 4 settimane dopo la mobilizzazione e il prelievo di SC, fino a 40 mL di sospensione unicellulare di cellule CD133+ autologhe altamente purificate, ottenute dopo rapido scongelamento, saranno infuse attraverso l'arteria epatica mediante arteriografia transfemorale o transbrachiale. Il tempo di infusione sarà inferiore a 15 ml/min per evitare la formazione di trombi. L'intera procedura sarà eseguita sotto controllo anestesiologico. La via di somministrazione intraepatica è ritenuta necessaria per evitare il potenziale massiccio intrappolamento della milza da parte delle cellule CD133+ dopo reinfusione endovenosa convenzionale nei pazienti cirrotici. Entro 24 ore dalla procedura verrà eseguita un'ecografia doppler del tronco celiaco per escludere eventi trombotici del distretto mesenterico.

Secondo la regola di incremento di Fibonacci modificata, cellule CD133+ mobilizzate con G-CSF altamente purificate saranno somministrate a pazienti a partire da 5x104/Kg di peso corporeo del paziente e aumentate ogni 3 pazienti. La dose massima di cellule infuse sarà di 1x106/kg (vedi sotto). Lenograstim o Filgrastim a 5µg/Kg/giorno saranno somministrati sc per 3 giorni dopo la reinfusione delle SC (dal giorno 0 al giorno +2) per la loro espansione e per indurre un vantaggio proliferativo selettivo delle cellule reinfuse in vivo.

NUMERO DI PAZIENTI E PERIODO DI TEMPO: Dodici pazienti saranno arruolati entro 18-24 mesi nella fase di determinazione della dose.

DIAGNOSI E CRITERI DI INCLUSIONE: Consenso informato firmato. Età >18. Punteggio di Karnofsky > 70% o OMS <1. Adeguata funzionalità renale (creatinina sierica < 2 mg/dl) e polmonare (Sat O2 > 96%). Diagnosi di malattia epatica avanzata allo stadio terminale definita da un punteggio del modello Mayo per la malattia epatica allo stadio terminale (MELD) compreso tra 17 e 25.

Saranno arruolati nello studio pazienti con le seguenti eziologie di malattie epatiche: epatite virale cronica B, epatite virale cronica C, epatite virale cronica D, cirrosi alcolica, colangite sclerosante primitiva, cirrosi biliare primitiva, malattia di Wilson, emocromatosi genetica o sovraccarico di ferro cirrosi, cirrosi da steatoepatite non alcolica. I pazienti con cirrosi epatica alcolica devono aver interrotto il consumo di alcol attivo per essere arruolati nello studio.

L'idoneità al trapianto ortotopico di fegato (OLT) non è una controindicazione per entrare nello studio clinico. I pazienti in lista d'attesa per il trapianto di OLT non saranno ritirati e saranno trapiantati non appena sarà disponibile un donatore idoneo. Il loro punteggio MELD rimarrà quello registrato prima dell'infusione di SC in caso di miglioramento in seguito alla procedura sperimentale.

La presenza di sintomi correlati alla cirrosi, come ascite, edema periferico, sanguinamento del tratto gastrointestinale ricorrente, encefalopatia ricorrente non rappresentano controindicazioni maggiori all'arruolamento nello studio. I pazienti possono essere considerati idonei quando clinicamente stabili.

CRITERI DI ESCLUSIONE: positività all'HIV. Donne incinte o che allattano. Infezione incontrollata attuale. Danno d'organo intercorrente. Diagnosi di epatocarcinoma. Trombosi portale completa. Grave compromissione della funzione coagulativa (PT < 30%, INR> 2,5, piastrine < 40x109/L) che controindica l'arteriografia. Splenomegalia di IV grado.

La sindrome di Budd-Chiari con trombosi venosa sovraepatica e cirrosi di origine sconosciuta non sarà inclusa nello studio.