Intrahepatische Reinfusion von CD133+-Stammzellen bei Patienten mit Leberzirrhose (Cirrhosis133)

TITEL: Phase-I-Studie zur intrahepatischen Reinfusion hochgereinigter CD133+-Stammzellen bei Patienten mit Lebererkrankungen im Endstadium.

Hauptermittler: Roberto M. Lemoli, MD Mitermittler: Pietro Andreone, MD, Francesca Bonifazi, MD; Lucia Catani, BS; Antonia D'Errico, MD; Michelangelo Fiorentino, MD; Valeria Giudice, MD; Annagiulia Gramenzi, MD; Elisabetta Loggi, BS; Stefania Lorenzini, MD; Francesco Losinno, MD; Maria Rosa Motta, BS; Simonetta Rizzi, BS; Cristina Rossi, MD.

STUDIENZENTRUM: Azienda Ospedaliero-Universitaria di Bologna, Policlinico S.Orsola-Malpighi, Bologna – Italien, Unità Operativa di Ematologia in Zusammenarbeit mit:

Unità Operativa di Semeiotica Medica Unità Operativa di Anatomia e Istologia Patological Unità Operativa di Immunoematologia e Trasfusionale Unità Operativa di Radiologia

KLINISCHE PHASE: Phase I

ZIEL(E): Primär:

Bewertung der Sicherheit der intrahepatischen Reinfusion einer zunehmenden Anzahl autologer hochgereinigter CD133+-Stammzellen (SCs) bei Patienten mit Lebererkrankungen im Endstadium. CD133+ SCs werden zuvor gesammelt und nach Mobilisierung mit Granulozyten-Kolonie-stimulierendem Faktor (G-CSF) und Leukapherese kryokonserviert. Die Sicherheit wird als Inzidenz unerwünschter Ereignisse (nach WHO eingestuft) und klinisch signifikanter abnormaler Laborwerte nach Reinfusion von SCs bewertet.

Sekundär:

Um die Machbarkeit der immunmagnetischen Selektion autologer CD133+-Zellen zu beurteilen, die mit Leukapherese aus dem peripheren Blut (PB) von Patienten mit Lebererkrankungen im Endstadium gesammelt und zuvor mit G-CSF mobilisiert wurden.

Um die Auswirkungen der intrahepatischen Reinfusion hochgereinigter CD133+-Zellen auf die verbleibende Leberfunktion der Patienten zu bewerten. Insbesondere werden folgende Werte überwacht: Synthese von Proteinen (Albumin), Synthese von Faktoren der Gerinnung (Prothrombinzeit, INR, Fibrinogen, Antithrombin III, Thromboplastinzeit), Bilirubinämie, proliferative Aktivität, Biosynthesekapazität (Cholesterin, Pseudocholinesterase). .

Um die Auswirkungen der Behandlung auf die Produktion ausgewählter Zytokine während der Verabreichung von G-CSF und nach der intrahepatischen Reinfusion hochgereinigter CD133+ SCs an Patienten mit Lebererkrankungen im Endstadium zu bewerten.

STUDIENDESIGN:

Zwölf Patienten werden innerhalb von 18 bis 24 Monaten in die Dosisfindungsphase aufgenommen. Die Studie wurde wie folgt konzipiert: Zunächst wurde G-CSF (Lenograstim, Aventis Pharma oder Filgrastim, Amgen) mit 7,5 µg/kg/zweimal täglich verabreicht. wird vom ersten Tag bis zum Abschluss der Sammlung peripherer Blutstammzellen (PBSC) subkutan (sc) verabreicht. Die Ernte von aus Knochenmark (BM) stammenden PBSC beginnt am Tag + 4 nur, wenn die Konzentration an CD133+-Zellen > 8/ul beträgt, und wird bis zur Sammlung der Zielzelldosis fortgesetzt: 0,5 x 106 CD133+-Zellen/kg für die ersten beiden Kohorten von Patienten; 1 x 106 CD133+-Zellen/kg für Kohorte 3 und 2 x 106 CD133+-Zellen/kg für Kohorte 4 (Definitionen siehe unten). Mononukleäre PB-Zellen, die aus mobilisierter Standardvolumen-Leukapherese gewonnen werden, werden mit Macs kolloidalen superparamagnetischen CD133-Mikrokügelchen (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Deutschland) inkubiert und das Gerät von CliniMac wird für die positive Selektion von CD133+-Zellen unter Bedingungen der guten Herstellungspraxis (GMP) verwendet ( Siehe Anhang). Die Kryokonservierung und Lagerung in flüssigem Stickstoff erfolgt nach Standardverfahren (siehe Anhänge).

Mindestens 4 Wochen nach der SC-Mobilisierung und -Sammlung werden bis zu 40 ml einer Einzelzellsuspension hochgereinigter autologer CD133+-Zellen, die nach schnellem Auftauen gewonnen wurde, mittels transfemoraler oder transbrachialer Arteriographie durch die Leberarterie infundiert. Die Infusionszeit sollte unter 15 ml/min liegen, um die Bildung von Thromben zu vermeiden. Der gesamte Eingriff wird unter anästhesiologischer Kontrolle durchgeführt. Der intrahepatische Verabreichungsweg wird als notwendig erachtet, um den potenziellen massiven Einschluss von CD133+-Zellen in der Milz nach herkömmlicher intravenöser Reinfusion bei Patienten mit Leberzirrhose zu vermeiden. Innerhalb von 24 Stunden nach dem Eingriff wird eine Doppler-Sonographie des Truncus coeliacus durchgeführt, um thrombotische Ereignisse im Mesenterialbezirk auszuschließen.

Gemäß der modifizierten Fibonacci-Inkrementregel werden hochgereinigte G-CSF-mobilisierte CD133+-Zellen an Patienten ab 5x104/kg Körpergewicht des Patienten verabreicht und alle 3 Patienten erhöht. Die maximale infundierte Zelldosis beträgt 1x106/kg (siehe unten). Lenograstim oder Filgrastim mit 5 µg/kg/Tag werden 3 Tage lang nach der Reinfusion der SCs (Tag 0 bis Tag +2) sc verabreicht, um deren Expansion zu gewährleisten und einen selektiven proliferativen Vorteil der reinfundierten Zellen in vivo zu induzieren.

ANZAHL DER PATIENTEN UND ZEITRAHMEN: Zwölf Patienten werden innerhalb von 18–24 Monaten in die Dosisfindungsphase aufgenommen.

DIAGNOSE- UND EINSCHLUSSKRITERIEN: Unterzeichnete Einverständniserklärung. Alter >18. Karnofsky-Score > 70 % oder WHO <1. Ausreichende Nieren- (Serumkreatinin < 2 mg/dl) und Lungenfunktion (Sat O2 > 96 %). Diagnose einer fortgeschrittenen Lebererkrankung im Endstadium, definiert durch einen MELD-Score (Mayo Model for End Stage Liver Disease) zwischen 17 und 25.

Patienten mit den folgenden Ursachen von Lebererkrankungen werden in die Studie aufgenommen: chronische Virushepatitis B, chronische Virushepatitis C, chronische Virushepatitis D, alkoholische Zirrhose, primär sklerosierende Cholangitis, primäre biliäre Zirrhose, Morbus Wilson, genetische Hämochromatose oder Eisenüberladung Zirrhose, Zirrhose aufgrund einer nichtalkoholischen Steatohepatitis. Patienten mit alkoholischer Leberzirrhose sollten den aktiven Alkoholkonsum eingestellt haben, um in die Studie aufgenommen zu werden.

Die Eignung für eine orthotope Lebertransplantation (OLT) ist keine Kontraindikation für die Teilnahme an der klinischen Studie. Patienten auf der Warteliste für eine OLT-Transplantation werden nicht zurückgezogen und transplantiert, sobald ein geeigneter Spender verfügbar ist. Ihr MELD-Score bleibt derjenige, der vor der SC-Infusion aufgezeichnet wurde, im Falle einer Verbesserung nach dem experimentellen Verfahren.

Das Vorhandensein von Zirrhose-bedingten Symptomen wie Aszites, peripherem Ödem, wiederkehrenden Blutungen im Magen-Darm-Trakt und wiederkehrender Enzephalopathie stellen keine wesentlichen Kontraindikationen für die Aufnahme in die Studie dar. Die Patienten können als geeignet angesehen werden, wenn sie klinisch stabil sind.

AUSSCHLUSSKRITERIEN: HIV-Positivität. Schwangere oder stillende Frauen. Aktuelle unkontrollierte Infektion. Interkurrente Organschädigung. Diagnose eines Hepatokarzinoms. Vollständige Portalthrombose. Schwere Beeinträchtigung der Gerinnungsfunktion (PT < 30 %, INR > 2,5, Thrombozyten < 40 x 109/l), die eine Artheriographie kontraindizieren würde. Splenomegalie Grad IV.

Das Budd-Chiari-Syndrom mit sovrahepatischer Venenthrombose und Zirrhose unbekannter Ursache wird nicht in die Studie einbezogen.