Reinfuzja wewnątrzwątrobowa komórek macierzystych CD133+ u pacjentów z marskością wątroby (Cirrhosis133)

TYTUŁ: Badanie fazy I nad reinfuzją wewnątrzwątrobową wysokooczyszczonych komórek macierzystych CD133+ u pacjentów ze schyłkową niewydolnością wątroby.

GŁÓWNY BADACZ: dr n. med. Roberto M. Lemoli WSPÓŁBADACZY: dr n. med. Pietro Andreone, dr n. med. Francesca Bonifazi; Lucia Catani, BS; Antonia D'Errico, lekarz medycyny; Michelangelo Fiorentino, MD; lek. Valeria Giudice; Annagiulia Gramenzi, MD; Elisabetta Loggi, BS; dr n. med. Stefania Lorenzini; Francesco Losinno, MD; Maria Rosa Motta, BS; Simonetta Rizzi, BS; Cristina Rossi, lek.

CENTRUM STUDIÓW: Azienda Ospedaliero-Universitaria di Bologna, Policlinico S.Orsola-Malpighi, Bologna - Italia, Unità Operativa di Ematologia we współpracy z:

Unità Operativa di Semeiotica Medica Unità Operativa di Anatomia e Istologia Patologica Unità Operativa di Immunoematologia e Trasfusionale Unità Operativa di Radiologia

FAZA KLINICZNA: Faza I

CEL(Y): Podstawowy:

Ocena bezpieczeństwa reinfuzji wewnątrzwątrobowej coraz większej liczby autologicznych wysoce oczyszczonych komórek macierzystych CD133+ (SC) pacjentom ze schyłkową niewydolnością wątroby. CD133+ SC zostaną wcześniej zebrane i zamrożone po mobilizacji czynnikiem stymulującym tworzenie kolonii granulocytów (G-CSF) i leukaferezie. Bezpieczeństwo będzie oceniane jako częstość występowania zdarzenia niepożądanego (stopniowana zgodnie z WHO) oraz klinicznie istotna nieprawidłowa wartość laboratoryjna po reinfuzji SC.

Wtórny:

Ocena wykonalności immunomagnetycznej selekcji autologicznych komórek CD133+ pobranych metodą leukaferezy z krwi obwodowej (PB) pacjentów ze schyłkową niewydolnością wątroby, uprzednio zmobilizowanych G-CSF.

Ocena wpływu reinfuzji wewnątrzwątrobowej wysoko oczyszczonych komórek CD133+ na resztkową czynność wątroby pacjentów. Monitorowane będą w szczególności: synteza białek (albumin), synteza czynników krzepnięcia (czas protrombinowy, INR, fibrynogen, antytrombina III, czas tromboplastynowy), bilirubinemia, aktywność proliferacyjna, zdolności biosyntetyczne (cholesterol, pseudocholinesteraza). .

Ocena wpływu zastosowanego leczenia na produkcję wybranych cytokin podczas podawania G-CSF oraz po wewnątrzwątrobowej reinfuzji wysokooczyszczonych SC CD133+ pacjentom ze schyłkową niewydolnością wątroby.

PROJEKT BADANIA:

Dwunastu pacjentów zostanie włączonych w ciągu 18-24 miesięcy do fazy ustalania dawki. Badanie zostało zaplanowane w następujący sposób: najpierw G-CSF (Lenograstim, Aventis Pharma lub Filgrastim, Amgen) w dawce 7,5 µg/kg/2 razy dziennie. będzie podawany podskórnie (sc) od dnia 1 do zakończenia pobierania komórek macierzystych krwi obwodowej (PBSC). Zbieranie PBSC pochodzących ze szpiku kostnego (BM) rozpocznie się w dniu +4 tylko wtedy, gdy stężenie komórek CD133+ wynosi > 8/ul i będzie kontynuowane do momentu pobrania docelowej dawki komórek: 0,5 x 106 komórek CD133+/kg dla pierwsze 2 kohorty pacjentów; 1 x 106 komórek CD133+/kg dla kohorty 3 i 2 x 106 komórek CD133+/kg dla kohorty 4 (definicje patrz poniżej). Komórki jednojądrzaste PB uzyskane z mobilizowanej leukaferezy o standardowej objętości będą inkubowane z koloidalnymi superparamagnetycznymi mikrokulkami Macs CD133 (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Niemcy), a urządzenie CliniMacs zostanie użyte do pozytywnej selekcji komórek CD133+ w warunkach dobrej praktyki produkcyjnej (GMP) ( patrz załączniki). Kriokonserwacja i przechowywanie w ciekłym azocie odbywać się będzie zgodnie ze standardowymi procedurami (patrz załączniki).

Co najmniej 4 tygodnie po mobilizacji i pobraniu SC, do 40 ml zawiesiny pojedynczych komórek wysoce oczyszczonych autologicznych komórek CD133+, uzyskanych po szybkim rozmrożeniu, zostanie podanych w infuzji przez tętnicę wątrobową za pomocą arteriografii przezudowej lub przezramiennej. Czas infuzji będzie krótszy niż 15 ml/min, aby uniknąć tworzenia się skrzeplin. Cały zabieg odbędzie się pod kontrolą anestezjologa. Uważa się, że droga podawania wewnątrzwątrobowa jest konieczna, aby uniknąć potencjalnego masywnego uwięzienia śledziony przez komórki CD133+ po konwencjonalnej reinfuzji dożylnej u pacjentów z marskością wątroby. W ciągu 24 godzin od zabiegu zostanie wykonane badanie ultrasonograficzne dopplerowskie pnia trzewnego w celu wykluczenia incydentów zakrzepowych w okolicy krezki.

Zgodnie ze zmodyfikowaną regułą wzrostu Fibonacciego, wysoce oczyszczone komórki CD133+ mobilizowane G-CSF będą podawane pacjentom zaczynając od 5x104/kg masy ciała pacjenta i zwiększając co 3 pacjentów. Maksymalna dawka komórek w infuzji będzie wynosić 1x106/kg (patrz poniżej). Lenograstim lub filgrastym w dawce 5 µg/kg/dzień będzie podawany podskórnie przez 3 dni po reinfuzji SC (od dnia 0 do dnia +2) w celu ich ekspansji i wywołania selektywnej przewagi proliferacyjnej reinfuzji komórek in vivo.

LICZBA PACJENTÓW I RAMY CZASOWE: Dwunastu pacjentów zostanie włączonych w ciągu 18-24 miesięcy do fazy ustalania dawki.

DIAGNOZA I KRYTERIA WŁĄCZENIA: Podpisana świadoma zgoda. Wiek >18 lat. Wynik Karnofsky'ego > 70% lub WHO <1. Odpowiednia czynność nerek (stężenie kreatyniny w surowicy < 2 mg/dl) i płuc (saturacja O2 > 96%). Rozpoznanie zaawansowanej, schyłkowej choroby wątroby zdefiniowanej na podstawie wyniku w skali Mayo Model for End Stage Liver Disease (MELD) między 17 a 25.

Do badania zostaną włączeni pacjenci z następującą etiologią choroby wątroby: przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby typu B, przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby typu C, przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby typu D, alkoholowa marskość wątroby, pierwotne stwardniające zapalenie dróg żółciowych, pierwotna marskość żółciowa wątroby, choroba Wilsona, genetyczna hemochromatoza lub przeciążenie żelazem marskość wątroby, marskość spowodowana niealkoholowym stłuszczeniowym zapaleniem wątroby. Pacjenci z alkoholową marskością wątroby powinni wycofać aktywne spożywanie alkoholu, aby zostali włączeni do badania.

Kwalifikacja do ortotopowego przeszczepu wątroby (OLT) nie jest przeciwwskazaniem do udziału w badaniu klinicznym. Pacjenci z listy oczekujących na przeszczep OLT nie będą wycofywani i zostaną przeszczepieni, gdy tylko pojawi się odpowiedni dawca. W przypadku poprawy po procedurze eksperymentalnej ich wynik MELD pozostanie taki sam, jak w przypadku wcześniejszej infuzji SC.

Obecność objawów związanych z marskością wątroby, takich jak wodobrzusze, obrzęki obwodowe, nawracające krwawienia z przewodu pokarmowego, nawracająca encefalopatia, nie stanowi głównego przeciwwskazania do włączenia do badania. Pacjenci mogą zostać uznani za kwalifikujących się do badania, jeśli stan kliniczny jest stabilny.

KRYTERIA WYKLUCZENIA: pozytywny wynik testu na obecność wirusa HIV. Kobiety w ciąży lub karmiące. Obecna niekontrolowana infekcja. Współistniejące uszkodzenie narządów. Rozpoznanie raka wątroby. Całkowita zakrzepica wrotna. Ciężkie upośledzenie funkcji krzepnięcia (PT < 30%, INR > 2,5, płytki krwi < 40x109/l), które stanowiłoby przeciwwskazanie do arteriografii. Splenomegalia IV stopnia.

Zespół Budda-Chiariego z zakrzepicą żyły wątrobowo-nerkowej i marskością wątroby niewiadomego pochodzenia nie zostanie włączony do badania.