CD133+ őssejtek intrahepatikus refúziója cirrhoticus betegekben (Cirrhosis133)

CÍM: Nagy tisztaságú CD133+ őssejtek intrahepatikus reinfúziójának I. fázisa végstádiumú májbetegségben szenvedő betegeknél.

VEZETŐ NYOMOZÓ: Roberto M. Lemoli, MD TÁRSNYOMOZÓK: Pietro Andreone, MD, Francesca Bonifazi, MD; Lucia Catani, BS; Antonia D'Errico, MD; Michelangelo Fiorentino, MD; Valeria Giudice, MD; Annagiulia Gramenzi, MD; Elisabetta Loggi, BS; Stefania Lorenzini, MD; Francesco Losinno, MD; Maria Rosa Motta, BS; Simonetta Rizzi, BS; Cristina Rossi, MD.

TANULMÁNYI KÖZPONT: Azienda Ospedaliero-Universitaria di Bologna, Policlinico S.Orsola-Malpighi, Bologna - Italia, Unità Operativa di Ematologia együttműködve:

Unità Operativa di Semeiotica Medica Unità Operativa di Anatomia e Istologia Patologica Unità Operativa di Immunoematologia e Trasfusionale Unità Operativa di Radiologia

KLINIKAI FÁZIS: I. fázis

CÉLKITŰZÉS(EK): Elsődleges:

A növekvő számú autológ, nagy tisztaságú CD133+ őssejtek (SC) intrahepatikus reinfúziójának biztonságosságának felmérése végstádiumú májbetegségben szenvedő betegek számára. A CD133+ SC-ket előzetesen összegyűjtjük és kriokonzerváljuk granulocita-kolónia stimuláló faktorral (G-CSF) és leukaferézissel történő mobilizálás után. A biztonságot a nemkívánatos események előfordulása (a WHO szerint osztályozva) és a klinikailag szignifikáns kóros laboratóriumi értékek alapján értékelik az SC-k újrainfúzióját követően.

Másodlagos:

A korábban G-CSF-fel mobilizált, végstádiumú májbetegségben szenvedő betegek perifériás véréből (PB) leukaferézissel gyűjtött autológ CD133+ sejtek immunmágneses szelekciójának megvalósíthatóságának felmérése.

Nagy tisztaságú CD133+ sejtek intrahepatikus reinfúziójának hatásainak felmérése a betegek reziduális májfunkciójára. Különösen a következő értékeket kell ellenőrizni: fehérjék szintézise (albumin), véralvadási faktorok szintézise (protrombin idő, INR, fibrinogén, antitrombin III, tromboplasztin idő), bilirubinémia, proliferatív aktivitás, bioszintetikus kapacitás (koleszterin, pszeudokolinészteráz) .

A kezelés hatásainak felmérése a kiválasztott citokinek termelésére a G-CSF beadása során és a nagy tisztaságú CD133+ SC-k intrahepatikus reinfúziója után végstádiumú májbetegségben szenvedő betegeknél.

DIZÁJNT TANULNI:

18-24 hónapon belül 12 beteget vonnak be a dózismegállapítási fázisba. A vizsgálatot a következőképpen tervezték: először G-CSF (Lenograstim, Aventis Pharma vagy Filgrastim, Amgen) 7,5 µg/kg/b.i.d. szubkután (sc) adják be az 1. naptól a perifériás vér őssejtek (PBSC) gyűjtésének befejezéséig. A csontvelőből (BM) származó PBSC begyűjtése csak akkor kezdődik a + 4. napon, ha a CD133+ sejtek koncentrációja > 8/uL, és a célsejt dózis begyűjtéséig folytatódik: 0,5 x 106 CD133+ sejt/kg a a betegek első 2 csoportja; 1 x 106 CD133+ sejt/kg a 3. kohorsznál és 2 x 106 CD133+ sejt/kg a 4. kohorsznál (a meghatározásokat lásd alább). A mobilizált standard térfogatú leukaferézissel nyert PB mononukleáris sejteket Macs kolloid szuperparamágneses CD133 mikrogyöngyökkel inkubálják (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Németország), és CliniMacs készüléket használnak a CD133+ sejtek pozitív szelekciójára jó gyártási gyakorlat (GMP) körülmények között ( lásd a mellékleteket). A mélyhűtést és a folyékony nitrogénben történő tárolást a szabványos eljárások szerint hajtják végre (lásd a mellékleteket).

Legalább 4 héttel az SC mobilizálás és begyűjtés után legfeljebb 40 ml nagy tisztaságú autológ CD133+ sejtek egysejtes szuszpenzióját, amelyet gyors felolvasztás után kaptunk, infundáljuk a májartérián keresztül transzfemorális vagy transzbrachiális arteriográfiával. Az infúziós idő 15 ml/perc alatt kell, hogy elkerülje a trombusképződést. A teljes eljárást aneszteziológiai ellenőrzés mellett végezzük. Az intrahepatikus beadási módot szükségesnek tartják a CD133+ sejtek esetleges masszív lépcsapdájának elkerülése érdekében a hagyományos intravénás reinfúziót követően cirrózisos betegeknél. A beavatkozást követő 24 órán belül a coeliakia törzséről doppler ultrahangvizsgálatot végeznek, hogy kizárják a mesenterialis körzet trombotikus eseményeit.

A módosított Fibonacci növekményszabály szerint nagy tisztaságú G-CSF-mobilizált CD133+ sejteket adunk a betegeknek 5x104/kg testtömegtől kezdve, és 3 betegenként növelve. A maximális beadott sejtdózis 1x106/kg (lásd alább). A Lenograstim vagy Filgrastim 5 µg/kg/nap dózisban szubkután beadásra kerül az SC-k újrainfúziója után 3 napig (0. naptól +2. napig), hogy fokozódjanak, és hogy az újrainfundált sejtek szelektív proliferációs előnyét in vivo kiváltsák.

A BETEGEK SZÁMA ÉS IDŐKERET: 18-24 hónapon belül 12 beteget vonnak be a dózismegállapítási fázisba.

DIAGNOSZTIKAI ÉS BEVONÁSI KRITÉRIUMOK: Aláírt, tájékozott beleegyezés. 18 év feletti életkor. Karnofsky pontszám > 70%, vagy WHO <1. Megfelelő vese (szérum kreatinin < 2 mg/dl) és tüdő (Sat O2 > 96%) működése. Előrehaladott, végstádiumú májbetegség diagnosztizálása, amelyet a Mayo-modell a végstádiumú májbetegség (MELD) pontszámára 17 és 25 között határoz meg.

A következő etiológiájú májbetegségben szenvedő betegeket vonnak be a vizsgálatba: krónikus vírusos hepatitis B, krónikus vírusos hepatitis C, krónikus vírusos hepatitis D, alkoholos cirrhosis, primer szklerotizáló cholangitis, primer biliaris cirrhosis, Wilson-kór, genetikai haemochromatosis vagy vas-túlterhelés cirrhosis, nem alkoholos steato-hepatitis okozta cirrhosis. Az alkoholos májcirrhosisban szenvedő betegeknek abba kell hagyniuk az aktív alkoholfogyasztást, hogy részt vegyenek a vizsgálatban.

Az ortotopikus májátültetésre (OLT) való jogosultság nem ellenjavallat a klinikai vizsgálatban való részvételnek. Az OLT-transzplantációra várólistán szereplő betegeket nem vonják vissza, és amint megfelelő donor elérhetővé válik, átültetik őket. MELD-pontszámuk a korábbi SC-infúzióban rögzített érték marad, ha a kísérleti eljárást követően javulnak.

A cirrhosishoz kapcsolódó tünetek, mint az ascites, perifériás ödéma, visszatérő gyomor-bélrendszeri vérzés, visszatérő encephalopathia nem jelentenek jelentős ellenjavallatot a vizsgálatba való bevonásra. A betegek akkor tekinthetők alkalmasnak, ha klinikailag stabilak.

KIZÁRÁSI KRITÉRIUMOK: HIV-pozitivitás. Terhes vagy szoptató nőstények. Jelenlegi ellenőrizetlen fertőzés. Intercurrent szervkárosodás. A hepatocarcinoma diagnózisa. Teljes portális trombózis. A véralvadási funkció súlyos károsodása (PT< 30%, INR>2,5, Thrombocytaszám < 40x109/L), amely ellenjavallt arteriográfiát. IV fokozatú splenomegalia.

A Budd-Chiari szindróma szovrahepatikus vénás trombózissal és ismeretlen eredetű cirrhosissal nem kerül be a vizsgálatba.