Réinfusion intrahépatique de cellules souches CD133+ chez des patients cirrhotiques (Cirrhosis133)

TITRE : Étude de phase I sur la réinfusion intrahépatique de cellules souches CD133+ hautement purifiées chez des patients atteints d'une maladie hépatique en phase terminale.

CHERCHEUR PRINCIPAL : Roberto M. Lemoli, MD CO-CHERCHEURS : Pietro Andreone, MD, Francesca Bonifazi, MD; Lucia Catani, BS; Antonia D'Errico, MD; Michelangelo Fiorentino, MD ; Valeria Giudice, MD ; Annagiulia Gramenzi, M.D. ; Elisabetta Loggi, BS; Stefania Lorenzini, M.D. ; Francesco Losinno, MD ; Maria Rosa Motta, BS; Simonetta Rizzi, BS; Cristina Rossi, MD.

CENTRE D'ÉTUDES: Azienda Ospedaliero-Universitaria di Bologna, Policlinico S.Orsola-Malpighi, Bologna - Italia, Unità Operativa di Ematologia en collaboration avec:

Unità Operativa di Semeiotica Medica Unità Operativa di Anatomia e Istologia Patologica Unità Operativa di Immunoematologia e Trasfusionale Unità Operativa di Radiologia

PHASE CLINIQUE : Phase I

OBJECTIF(S) : Primaire :

Évaluer l'innocuité de la réinfusion intrahépatique d'un nombre croissant de cellules souches (SC) CD133+ autologues hautement purifiées chez des patients atteints d'une maladie hépatique en phase terminale. Les SC CD133+ seront préalablement collectés et cryoconservés après mobilisation avec le facteur de stimulation des colonies de granulocytes (G-CSF) et leucaphérèse. L'innocuité sera évaluée en fonction de l'incidence des événements indésirables (classés selon l'OMS) et des valeurs de laboratoire anormales cliniquement significatives après la réinjection de SC.

Secondaire:

Évaluer la faisabilité de la sélection immunomagnétique de cellules CD133+ autologues collectées par leucaphérèse à partir du sang périphérique (PB) de patients atteints d'une maladie hépatique en phase terminale, préalablement mobilisés avec du G-CSF.

Évaluer les effets de la réinfusion intrahépatique de cellules CD133+ hautement purifiées sur la fonction hépatique résiduelle des patients. En particulier, les valeurs suivantes seront suivies : synthèse de protéines (albumine), synthèse de facteurs de la coagulation (temps de prothrombine, INR, fibrinogène, antithrombine III, temps de thromboplastine), bilirubinémie, activité proliférative, capacité de biosynthèse (cholestérol, pseudocholinestérase) .

Évaluer les effets du traitement sur la production de cytokines sélectionnées pendant l'administration de G-CSF et après la réinfusion intrahépatique de SC CD133+ hautement purifiés chez des patients atteints d'une maladie hépatique en phase terminale.

ÉTUDIER LE DESIGN:

Douze patients seront recrutés dans les 18 à 24 mois pour la phase de recherche de dose. L'étude a été conçue comme suit : dans un premier temps, G-CSF (Lenograstim, Aventis Pharma ou Filgrastim, Amgen) à 7,5 µg/Kg/b.i.d. sera administré par voie sous-cutanée (sc) du jour 1 jusqu'à la fin de la collecte des cellules souches du sang périphérique (PBSC). La récolte des PBSC dérivés de la moelle osseuse (BM) commencera le jour + 4 uniquement si la concentration de cellules CD133+ est > 8/uL et se poursuivra jusqu'à la collecte de la dose de cellules cibles : 0,5 x 106 cellules CD133+/Kg pour le 2 premières cohortes de patients ; 1 x 106 cellules CD133+/Kg pour la cohorte 3 et 2 x 106 cellules CD133+/Kg pour la cohorte 4 (voir ci-dessous pour les définitions). Les cellules mononucléaires PB obtenues à partir d'une leucaphérèse à volume standard mobilisé seront incubées avec des microbilles CD133 superparamagnétiques colloïdales Macs (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Allemagne) et le dispositif CliniMacs sera utilisé pour la sélection positive des cellules CD133+ dans des conditions de bonnes pratiques de fabrication (BPF) ( voir pièces jointes). La cryoconservation et le stockage dans l'azote liquide seront effectués selon les procédures standard (voir pièces jointes).

Au moins 4 semaines après la mobilisation et le prélèvement SC, jusqu'à 40 ml de suspension monocellulaire de cellules CD133+ autologues hautement purifiées, obtenues après décongélation rapide, seront perfusés par l'artère hépatique par artériographie transfémorale ou transbrachiale. Le temps de perfusion sera inférieur à 15 ml/min pour éviter la formation de thrombus. L'ensemble de l'intervention sera réalisée sous contrôle anesthésique. La voie d'administration intrahépatique est jugée nécessaire pour éviter le potentiel piégeage massif des cellules CD133+ dans la rate après une réinfusion intraveineuse conventionnelle chez les patients cirrhotiques. Dans les 24 heures suivant la procédure, une échographie Doppler du tronc coeliaque sera réalisée pour exclure les événements thrombotiques du district mésentérique.

Selon la règle d'augmentation de Fibonacci modifiée, des cellules CD133+ hautement purifiées mobilisées par le G-CSF seront administrées aux patients à partir de 5x104/Kg de poids corporel du patient et augmentées tous les 3 patients. La dose maximale de cellules infusées sera de 1x106/kg (voir ci-dessous). Le lénograstim ou le filgrastim à 5µg/Kg/jour seront administrés en sc pendant 3 jours après la réinfusion des SC (jour 0 à jour +2) pour leur expansion et induire un avantage prolifératif sélectif des cellules réinfusées in vivo.

NOMBRE DE PATIENTS ET CALENDRIER : Douze patients seront recrutés dans les 18 à 24 mois pour la phase de recherche de dose.

CRITÈRES DE DIAGNOSTIC ET D'INCLUSION : Consentement éclairé signé. Âge >18. Score de Karnofsky > 70 % ou OMS < 1. Fonction rénale (créatinine sérique < 2 mg/dl) et pulmonaire (Sat O2 > 96 %) adéquate. Diagnostic d'une maladie hépatique avancée en phase terminale définie par un score du modèle Mayo pour la maladie hépatique en phase terminale (MELD) entre 17 et 25.

Les patients présentant les étiologies de maladies hépatiques suivantes seront inclus dans l'étude : hépatite virale chronique B, hépatite virale chronique C, hépatite virale chronique D, cirrhose alcoolique, cholangite sclérosante primitive, cirrhose biliaire primitive, maladie de Wilson, hémochromatose génétique ou surcharge en fer. cirrhose, cirrhose due à une stéato-hépatite non alcoolique. Les patients atteints de cirrhose alcoolique du foie doivent avoir arrêté la consommation active d'alcool pour être inclus dans l'étude.

L'éligibilité à la transplantation hépatique orthotopique (OLT) n'est pas une contre-indication à participer à l'étude clinique. Les patients en liste d'attente pour la transplantation du BTA ne seront pas retirés et seront transplantés dès qu'un donneur compatible sera disponible. Leur score MELD restera celui enregistré avant la perfusion de SC en cas d'amélioration suite à la procédure expérimentale.

La présence de symptômes liés à la cirrhose, tels que l'ascite, l'œdème périphérique, les saignements récurrents du tractus gastro-intestinal, l'encéphalopathie récurrente ne représentent pas des contre-indications majeures à l'inclusion dans l'étude. Les patients peuvent être considérés comme éligibles lorsqu'ils sont cliniquement stables.

CRITÈRES D'EXCLUSION : séropositivité pour le VIH. Femmes enceintes ou allaitantes. Infection non contrôlée en cours. Lésions organiques intercurrentes. Diagnostic d'hépatocarcinome. Thrombose portale complète. Altération sévère de la fonction coagulative (TP < 30 %, INR> 2,5, plaquettes < 40 x 109/L) qui contre-indiquerait l'artériographie. Splénomégalie de grade IV.

Le syndrome de Budd-Chiari avec thrombose veineuse sovrahépatique et cirrhose d'origine inconnue ne sera pas inclus dans l'étude.